Ингибитор активности фермента

Ингибитор активности фермента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ceej еветских

Социалистических

Ресйублии (Ч б27162 (61) дополнительное к, авт, свид-ву (22) Заявлено 060477 (Я} 2475209/?8-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет—

Государственный комитет

Совета Министров СССР но делам изобретений н открытий (43) Опубликовано 051078.Бюллетень № 37 (53) УДК63. 18 (088. 8) (45) Дата опубликования описания 160878 (72) Авторы изобретения Г.м.В.Абдуллаев, н.х.мехтиев и Ф.и.Абдуллаев

Ордена Трудового Красного Знамени институт физики

Академии Наук Азербайджанской ССР

Pl) Заявитель (54) ИН1 ИБИТОР АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетики, в частности к избирательным ингибиторам активности фермента, и может быть использовано для изучения процес-8 са транскрипции в клетках высших организмов, Известен ингибитор — амантин, который подавляет активность П формы

ДНК-зависимой РНК вЂ” пблимеразы, от- 10 ветственный эа синтез ДНК вЂ” подобных

РНК (1)

До настоящего времени сведений об ингибиторах активности 1 формы

ДНК вЂ” зависимой РНК вЂ” олимеразы не имеется .

Известно применение селенита натрия NQ беО в биологии и медицине как вещества,- влияющего на митотическое Ж деление в процессе развития, в частности в метафазе и анафазе. Введение селенита натрия вызывает уменьшение митотической активности. Селенит нат-, рия ингибирует рост клеток, обладает 25 противоокислительной активностью и антирадикальными свойствами.

Кроме того, селенит натрия влияет

На дыхательную цепь клеточных мембраи на процессы окисления и гидроксилира.Ф0 вания стероидов, лекарственных соединений и пестицидов, Селенит натрия применяеrca также для лечения беломышечной болезни, некроза печени и эксудативного диатеза цыплят.

Цель изобретения - применение натрияйсзфеО в качестве избирательного ингибитора активности 1 формы ДНК-зависимой PHK — полимеразы, катализируюшей в клетке высших организмов синтез рибонуклеиновых кислот (РНК) .

Пример. Из развивающихся зародышей костистой рыбы вьюна (trljsgur!TWAS овь1С э)получают зрелую икру оплодотворяют и определяют стадии развития по Нейфаху.

По достижении нужной стадии заро-дыши (бластодермыт отделяют от желтка затем чистые бластодермы гомогенизируют в бУфере, содержашем U,05 И

Трис НС6 (рН 7, 4) О, 02 МцСЕ и О, 25M сахароэы. Гомогенат центрифугируют 10 мин при 1500й. Осадок несколько раз промывают тем же буфером, чистоту выделения ядер контролируют микроскопически.

Реакционная смесь для определения

РНК-полимеразной активности ядер содержит в объеме 0,125 мл следующие

627162

Т а б л и ц а 1

Время развития зародышей с 1

Контроль 4 мМ селенита . Натрия

8-9

2600

1400

10-11

13-14

14-15

15-16

16-17

17-18

24-25

3600

1300

3600

1000

2100

1200

3900

1600

3600

1600

4100

1800

2000

800 ингредиенты: Трис НС — 80 мм РН В, ДТТ вЂ” 1 мм, ЭДТА — 1 мм по 0,2 мм ГТФ, ЦТФ, ГТФ и УТФ, О,):07 м МАТФ, 1,2 мк кюри С 14 ATC (582m gtrnrrtof АпегвЪсвя, I

England ), ядра из расчета 50 мкг по ДНК, Реакция проводится в условиях выской (320 мм (М)(4) 504 и2мММ С ) .

4 2

HJIN низкой, (13 мм М = е ) HoHHoA cHJIH, Добавляют специфический ингибитор

П формы фермента из расчета 0,5 мкг/

/пробу и селенит натрия (концентрация )

NO 580 от 4 до 40 мм/пробу).

Инкубацию проводят при 25 С в течение 30 минут. Реакцию останавливают перенесением проб в ледяную баню и добавляют холодную ТХУ с пирофосфатом натрия до конечной концентрации 10% и 0,53 соответсвенно. бсадки собирают и отмывают 5%-ным

ТХУ на нитроцеллюлозных фильтрах (АУФС, ЧССР), затем просчитывают в то-. луоловом сцинтилляторе на счетчике (интертехник St Ю) .

В результате эксперимента обнаружено свойство селенита натрия оказывать селективное (избирательное) действие на активность 1 формы ДНК-эави М симой PHK-полимеразы, катализирующей в клетке высших организмов синтез рибонуклеиновых кислот (PHK), Данные действия селенита натрия на активность 1 формы ДНК-зависимой 30

РНК-полимераэы ядер приведены в таблице 1 (в имп/мин на 50 мкг ДНК эа

ЗО мин) .

Таким образом, как видно из таблицы 1, уровень Включения метки в 35

PHK за исследованный период развития удиплоидных ядер в бесклеточной сис" теме синтеза PHK при внесении в инкубационную среду экзогенного селена (4 мм/пробу) резко уменьшается по сравнению с контролем.

Данные действия селенита натрия на активность П формы ДНК-зависимой

РНК - полимеразы ядер приведены в таблице 2 (в имп/мин на 50 мкг ДНК за 30 мин).

Иэ таблицы 2 видно, что селенит натрия не оказывает заметного действия на активность П формы ДНК-зависимой РНК -полимеразы ядер вьюна на всех изученных этапах развития.

Оказывая ингибируннаее действие толька на активность 1 формы ДНК-зависимой PHK-полимеразы, селенит натрия является необходимым вежеством для изучения как цикла синтеза рибосомных РНК в высших организмах, так и в качестве транскрибируюшего контроля биохимических процессов.

Свойство селенита натрия избирательно ингибировать активносТь 1 формы ДНК-зависимой РНК-полимеразы, ответственной за синтез рибосомной

РНК, дает возможность применить это соединение в качестве специфического ингибитора, что, в свою очеРедь, дает исследователям в области молекулярной биологии новый тест -метод для изучения процесса транскрипции в .клетках высших организмов.

627162

Т а блица 2

Включение метки имп мин

Время развития зародышей час

Контроль 1 4 мМ селенита натрия

8-9

2600

2200

2500

2500

2300

2200

2700

2600

4200

4200

3500

4400

4400

3100

3100

Составитель A.Áðàæíèêoâà

Редактор Ж.Рожкова. Техрец Е.Давидович Корректор Л.Василина

Заказ 5574/30 Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Ра ская н

c c P" a0. g. 4 j5

Филиал ППП Патент, r. ужгород, ул. Проектная, 4

10-1 1

13-14

14-15

15-16

16-17

17-18

24 — 25

Формула изобретения

Применение селенита натрия. (ЙО Яеф в качестве избирательного ингибитора активности 1 формы ДНК-зависимой РНК олимеразы.

-Источники информации; принятые во внимание при экспертизе:

1.9togress in NucCeic Acid Reseals ch

and motecvtar BmCogw,1973,13,93.