Способ отбора мутантов микроорганизмов с повышенной продуцирующей способностью глюкоамилазы

Способ отбора мутантов микроорганизмов с повышенной продуцирующей способностью глюкоамилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

K АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63) Лоиолнительиое к авт. сВил-Ву (22) заивлено 2Щ4.77 (21) 2481535/?8-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 05,1078, Бюллетень № 3 (45) Дата опубликования описания 160878 (51) M. Кл. .2

С 12 К 1/02

Государственный комитет

Совета Министров СССР но делам изобретений и открытий (58) УДК 663 ° 18 (088. 8) (72) Авторы изобретении

Г. И. Бурд, В. Н, Гершанович, В. П.Афанасьева и И.N.Ãpà÷åâà

Q рдена Трудового Красного Знамени институт, эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи и Московский ордена

Трудового Красного Знамени технологический институт лишевой про ьпаленности (71) Заявители (54) СПОСОБ ОТБОРА МУТАНТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ с пОВьй)еннОЙ пРОдуциРуклйей спОсОББОстью

ГЛЮКОАМИЛАЗЬ

Изобретение относится к микробиоло. гической промышленности, а именно к ферментному производству.

Наиболее близким к изобретению является способ отбора мутантов с повышенной продуцируюшей способностью глюиоамилазы„ предусматривающий обработку микроорганизмов мутагеном с последуюшим вырашиванием культур и отбором колоний с целевыми свойствами (1) .

Недостатком этого способа является то, что отбор ведется вслепую и процесс селекции штаммов становится трудоемким.

Цель изобретения — повышение эффективности и сокрашение времени отбоPQ

Поставленная цель достигается тем, что вырашивание культур проводят в присутствии селективного агента 2-дезокси-Д-глюкозы в концентрации,.полностью подавлякшей рост исходной культуры„

Известно, что глюкоза подавляет синтез индуцибельных ферглентов. Зто явление известно под названием катаболитная репрессия глюкозой „

Среды, используемые в промьсшленности, .например кукурузный экстракт, содержат большое количество глюкозы. Кроме того, глюкоза„ являясь конечным продуктом гидролиза крахмала глюкоамилазой, накапливается в Ферментационной среде. Поэтому получение и использование мутантов, нечувствительных к репрессируюшему дейстьию глюкозы, позволило бы значительно увеличить эффективность производства глюкоамилазы.

Предлагаемый способ. дает возможность .быстрого и эффективного отбора мутантов микроорганизмов — продуцентов глюкоамилазы, резистентных к катаболитной.репрессии глюкозой.

Для этого суспензию клеток исходного штамма обрабатывают мутагеном и высеивают на чашки Петри с синтетической средой, содержашей аналог глюкозы-2-дезокси-Д-глюкозу в концентрации, полностью подавляюшей рост исходной культуры. Выжившие в. этих условиях единичные колонии после субклонирования на среде с ингибитором проверяют на способность синтезировать глюкоамилазу в присутствии глюкозы.

Предлагаемый способ прост и не требует бе льших затрат времени, Прин) г ципиальное отличие его- заключается в направленном отборе мутантов с пащей крахмал (0 003%) и 2-дезокси-Дглюкозу в концентрации (5.10 М), полностью подавляющей рост исходной культуры.

Колонии, появившиеся на 3-4 сутки инкубации при 30, субклонируют несколько раз на чашках, содержащих ингибитОр в концентрации 8.10Ã М и проверяют на способность синтезировать глюкоаъзллазу в присутствии глюкозы

Как видно из таблицы, путем применения предложенного способа отобраны мутанты, рез)лстентные к катаболитной репрессии глюкозой, обладающие повышенной продукцией глюкоамилазы на регламентной среде.

Т а б л и ц а

Активность глюкоамилаэы (ед./мл ) у исходного штамма Enc)ombcops re зр. 20-9 и полученных из него мутантов серии АБ (лабораторные испытания) Название штамма

Синтетическая среда с крахмалом без глюкозы

Регламентная среда с глюкозой (5%) 14Р0 +

1,0

AE 54

AB 341

AS 470

AE 513

16,5 л 1,5

19 l0 + 1,0

24,5 + 1,5

27 5 + 2,0

Формула изобретения

СПособ "отбора мутантов микроорга" 50 ннэмов. с повышенной продуцирующей способностью глюкоамилазы, включающий об-.

Составитель И.Привалова Редактор,Ж.Рожкова Техред О,Андрейко Корректор Л.Василина

Заказ 5574/30 Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва Ж--35 Ра аская наб. . 4 5 х .х, Р х6 1 филиал ппп патент ",, г, Ужгород ул. проектная. 4 вишенной продукцией глюкоамилазы путем применения селективной среды„ =адержащей токсический аналог глюкозы, на которой выживают. преимущественно колонии мутантов, нечувствительных

1 к репрессирующему действию глокозы.

Пример. Для получения мутантов дрожжей, устойчивых к катаболитной репрессии глюкозой, из известного производственного штамма — продуцента глюкоамилазы Епдо1тпсорь1з зр20-9 суспенэию отмытой дистиллированной во- Ю дой двухсуточной культуры обрабатывают нитроэогуанидином (500 мкг/мл) и высевают (1 - 10 кл/мл) на чашки с минеральной солевой средой, содержа 16

5,5 + 1,5

6,0 + 1,0

7,0 + 1,0

8,5 + 1,5

9,5 + 1,5

Применение предлагаемого способа г,1 позволяет весьма существенно сократить время, затрачиваемое селекционерами на отбор микроорганизмов с гипер- продукцией глюкоамилазы, использование которых в производстве резко.повысит производительяость на предприятиях 45 микробиологической промышленности, 1 8 + 0,7

3 7 + 1 2

5,5 + 1,5

8,4 + 1,5

9 2 + 1,5 работку микроорганизмов мутагеном с последующим выращиванием культур и отбором колоний с целевыми свойствами,, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности и сокрашения времени отбора, выращива ние культур проводят в присутствии селективного агента 2-дезокси-Д-глюкозы в концентрации, полностью подавляющей рост исходной культуры.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе заявки:

1, Патент ФРГ Р 1186015, кл. 6а 22/04, 1970.