Способ получения 2-0-метил-д-рамнозы
Иллюстрации
Показать всеРеферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61} Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 1506.77 (21) 2498635/28-13 с присоединением заявки Pk (23) Приоритет.— (43) Опубликовано 0511,78,Бюллетень № 41 (45} Дата опубликования описаиия2Ы1.78
Сеюэ Сеаетспна
Сецнвпнетнчесннк
Реенубпнн
< 1631529
Государственный комитет
Совета Мииистров СССР по делам изобретений и открытий
{53) УДК 663;18.(088. 8) (72) Авторы изобретения
Г.М.Здоровенко и Е.Я.Рашба
P1) Заявитель
Институт микробиологии и вирусологии им. акад. Д.К.Заболотного AH Украинской ССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2-0-МЕТИЛ-Д-РАМНОЗК
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения моносахарида-1
2-0-метил-Д-рамнозы.
Известные способы получения моно- о сахаридов основаны на использовании культур, например, &Егер(.ап1 сев auveus, 51.vept orngces а Ebus, Sacci 3 us Tovukoys is, дсе1оЬаст.ег mboxidaus 1.Ц и f2) .
Однако известные способы дают воэ- 10 можность получения Д-рибозы и
1 -сорбозы — широко распространенных в природе моносахаридов.
Известен ст особ получения 2-0-метил-Д-рамноэы путем культивирования ее продуцента на питательной среде в условиях аэрации, содержащей источники углерода, азота и необходимые . минеральные соли. В качестве продуцента 2-0-метил-Д-рамнозы используют культуру микроорганизмов М î аас(.eci urn 402 (3) °
Однако указанная культура хранится в коллекциях Великобритании и является труднодоступной для использования в нашей стране.
Целью изобретения является упрощение процесса.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве продуцента используют культуру Baccikus faeca(. is abaca kigenes штамм 6 . укаэанный штамм выделен в 1960 году иэ желчи и хранится в музее живых культур Московского Государственного
Контрольного института медицинских биологических препаратов им.Л.A.Тарасевича.
Морфология и культурально-биохимические свойства. Палочка короткая, иногда изогнутая подвижная грамотоицательная, размером 0,5-1-2 К. На бульоне растет в виде равномерной мути с образованием пленки, пристеночного кольца и осадка. Аэроб. Оптимальная t роста -30-37о Хорошо растет на синтетических средах при использовании в качестве источника азота аминокислот, способна расти на аммонийных солях в качестве источника азота, если источником углерода при этом служит ацетат либо другие трехуглеродные соединения. Штамм хорошо разлагает дериваты белка типа пептона с образованием аммиака. Белки не расщепляет
Не разлагает большинство сахаров, но потребляет их окислительным путем.
Сущность способа заключается в следующем:
1529
500 мг полисахарида гидролизуют 1Н серной кислотой (0,5% раствор) 1,5 ч при 100О. Гидролиэат нейтрализуют
По мех 1х16(НСОз), сгущают при 3540 и в объеме 3-5 мл наносят на колонку размером 3,7х50 см, набитую сухим порошком целлюлозы. Разделение проводят в растворителе этанол-вода (95:5) . Разделение контролируют окрашиванием отдельных фракций антроновым реактивом и хроматографией на
Ю бумаге.
При указанных условиях достигается воспроизводимое отделение 2-0-ме тил-Д-рамнозы, а полученный препарат был хроматографически чистым при разlS делении в различных системах растворителей: и -бутанол-пиридин-вода (6:4:
:3), П -бутанол-уксусная кислста-вода(4:1:5), и --бутанол, насыщенный водой с 1% аммиака и др.при проявлении xpogg матограмм различными проявляющими реагентами: анилинфталат, щелочной раствор азотнокислого серебра, йодная кислота-бензидин и др. Препарат также ие содержит возможной примеси аминокислот и был серологическн активным при торможении гомологичной реакции преципитации.
Формула изобретения
Составитель М.Ларина
Редактор И.Самедова Техред N.Áîðèñoâà Корректор A.Êðàâ÷åíêo
Заказ 6287/26 Тираж 526 Подписное
ЦИИИПИ Государственного комитета Сонета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП Патент е г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Э 63 цля получения 2-0-метил-Д-рамнозы культура Ва сс(tus аванса Ris а Rca Kigenes штамм 6 выращивается на мясо-пептонном агаре либо бульоне в течение 1-2 суток при 37 . Из отмытой физиологическим раствором бактериальной массы, высушенной ацетоном и эфиром, известным способом экстрагируют специфический полисахарид. Полученный полиСахарид гидролизуют 1И серной кислотой (0,5% раствор полисахарида в кислоте) при 100О, 1,5-2 ч. Гидролизат нейтрализуют ионно-обменной смолой либо сухим углекислым барием. Из полученной смеси сахаров 2-О-метил-Д-рамнозу выделяют разделением последней на колонке с порошком целлюлозы в системах растворителей этанол-вода (95:5) либо n - -бутанол-вода (95:5) . Кроме того, этот сахар можно получить иэ смеси методом препаративной хроматографии на бумаге с использованием растворителя и -бутанол-пиридин-вода (6:4:3) .
Получаемый указанным способом препарат 2-0-метил-Д-рамноэы не содержит примеси .других сахаров при разделении в следующих системах растворителей: П -бутанол-пиридин-вода (6:4:3), П-бутанол-вода-(95:5) ацетон-вода (95:5), этанол-вода (95:5), а егб пик совпадает при совмещении хроматограмм с пиком этого сахара в гидролизате полисахарида при разделении последнего методом газожидкостной хроматографии s виде ацетиллированных альдононитрилов и полиолов исследуемых сахаров. Выход сахара составляет
5% от сухого веса препарата специфического полисахарида.
Пример. КультуруBacciRuefaecaБь aKcaEigenes штамм б выращивают на мясо-пептонном агаре при 37О в течение суток, смывают и промывают физиологическим раствором, а затем ацетоном и эфиром. Специфический полисахарид получают гидролизом бактериальной массы горячим формамидом по
Фуллеру. Выход препарата — 5% от сухого веса бактериальной массы. 100Способ получения 2-0-метил-Д-рамнозы путе)м культивирования ее продуцента на питательной среде в условиях аэрацни, содержащей источники углерода, азота и необходимые минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве продуцента используют культуру Saccitus 1аасаЫе alcaPigenes
40 штамм
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1. Патент США Р 3919046,кл.195-30.
2. Авторское свидетельство СССР
469 461116 кл. С 12 В 13/00, 1973.
З.Canadian 3оигпа2 of Chemist у.
1967, 45,1.987.