Способ получения флуоресцеин-5изотиоцианата нейтрального

Способ получения флуоресцеин-5изотиоцианата нейтрального

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ ""633879

Союз Свветсиик

Сецивпистичесиик респубпии

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

L (51) М. Кл. (61) дополнительное к авт. свид-ву л (22) ЗаЯвлено080677 (21) 2494233/23-04

С 09 В 11/08

//C 09 К 11/06 с присоединением заявки Ъ— (23) Приоритет (43) Опубликовано 251178.Бюллетень % 43 (45) Дата опубликования описания 30 l1 78

Государственный комитет

Совета Министров СССР но аелам иэобретений м открытий (53) УДК, 668 ° 813.7. .07 (088.8) (72) Авторы изобретения

Е. Я. Яровенко, Г.С. Петрова, A. П. Болдырева, Н.A. Родионова и Н.В.Факеева (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЛУОРЕСЦЕИН-5-ИЗОТИОЦИАНАТА

Н ЕЙТР АЛ ЬНО ГО

С=О

Изобретение относится к способам получения Флуоресцеин-5-иэотиоцианата нейтрального, являющегося флуоресцентным микробиологическим красителем формулы 5 с =т И

Это соединение применяется в Флуоресцентной микроскопии для приготовления люминесцирующих сывороток и как флуоресцентный метчик белка.

В микробиологической практике 3) для флуоресцентной метки белка и приготовления люминесцирующих сывороток широко используют хлоргидрат флуоресцеин-5-иэотиоцианата. Однако он менее удобен при приМенении, чем флуоресцеин-5-изотиоцианат нейтральный, так как в самом процессе применения исследователи-биологи вынуждены хлоргидрат переводить в нейтральный продукт, что усложняет исследование био- 30 логических систем, кроме того, он менее стабилен при хранении.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ полу" чения флуоресцеин-5-изотиоцианата нейтрального путем взаимодействия хроматографически чистого 5-аминофлуоресцеина с тиофосгеном в среде ацетона в присутствии реагента, удаляющего хлористый водород, образующийся в процессе реакции. В качестве такого реагента используют углекислый кальций )1) .

Синтез проводят следующим образом.

Суспенэию в ацетоне .иэ 5-аминофлуоресцеина, тиофосгена и углекислого кальция, взятых в молярном соотношении 1!1,1:3,5, кипятят в течение

3 ч. После этого теплую смесь отфильтровывают от выпавших солей кальция, которые, однако, содержат значитель" ное количество целевого продукта.

Для извлечения его иэ осадка последний зкстрагируют ацетоном, вновь фильтруют и прозывают горячим ацетоном. Смесь ацетоновых растворов упаривают под вакуумом и затем прибавляют петролейный эфир до помутнени .

Смесь выдерживают в течение ночи, т ри

633879

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 6709/25 Тираж 784 Подписное ,филиал ППП Патент, r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4 этом все примеси осаждаются в виде вязкого масла, которое отфильтровывают, а к фильтрату добавляют дополнительное количество петролейного эфира. Выпавшие желто-оранжевые крис» таллы отфильтровывают н сушат. Выход технического флуоресцеин-5-изотиоциа- 8 ната составляет 52,7Ъ от теоретичес- кого.

Пля получения целевого продукта в качестве микРобиологического краси теля его дважды перекристаллизонына- )0 ют иэ смеси ацетон/петролейный эфир (выход при этом не указан, по нашим данным выход составляет 30-353, основное содержание 95%) .

Для известного способа характерны сложность технологического процесса нследствие значительной адсорбции углекислым кальцием целевого продукта и необходимости извлечения его из образовавшегося хлористого кальция с последующей вакуумной отгонкой растворителя, использование для обработки и выделения целевого продукта пожаро- и нзрыноопасных,соединений в значительном количестве (ацетона и петролейного эфира), сравнительно небольшой выход технического целевого продукта (52Ъ) .

Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта, упрощение технологии и снижение пожароопасности процесса.

Предлагаемый способ получения флуоресцеин-5-изотиоцианата нейтрального состоит во взаимодействии 5-аминофлуоресцеина с тиофосгеном в при- 35 сутствии реагента, связывающего хлористый водород, а именно в присутствии амидов или третичных аминов и выделении из полученной при этом реакционной массы целевого продукта 40 путем обработки ее водой.

Отличительными признаками способа являются использование в качестве реагента,связывающего хлористый нодород, амидон или третичных аминов и выделение цепевого продукта путем обработки полученной реакционной массы водой.

Hp и м е р 1. В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 6,9 r хроматографически чистого 5-аминофлуоресцеина и

35 мл диметилформамида. K полученному раствору при энергичном Раэмешинании постепенно прибавляют 4,2 мл тиофосгена, на допуская повышения температуры а е 50 С

Полученный раствор нагревают до

60-65ОС и выдерживают при этой температуре 2,5 ч, после чего охлаждают до комнаткой температуры и выл. ают при размешинании и 350 мл холодной воды. Выпавший ярко-оранжевый осадок отфильтровывают, промывают водой, ацетоном н небольшом количестне и сушат в вакуум-эксикаторе над хлористым кальцием. Получают 5,5-6,0 r флуоресцеин-5-изотиоцианата, что coc" тавляет 70-75Ъ от теоретического, считая на исходный 5-аминофлуоресцеин.

Пример 2. В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 4,60 г хроматографически чистого 5-аминофлуоресцеина и

25 мл пиридина. К полученному раство" ру при энергичном раэмешинании постепенно прибавляют 2,8 мл тиофосгена, не допуская повышения температуры выше 50 С.

Полученный раствор нагревают 2,53 ч при 60-65 С, после чего охлаждают до комнатной температуры и выливают при размешивании B 300 мл холод ной воды. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой, ацетоном и сушат в вакуум-эксикаторе. Получают

3,2-3,4 г продукта, что составляет

60-65% от теоретического, считая на исходный 5-аминофлуоресцеин.

ПолученнЫй флуоресцеин-5-изотиоцианат нейтральный является хроматографически чистым, имеет содержание оснонного вещества 95-96Ъ и выдерживает испытание на микробиологическую пригодность в качестве флуоресцентного метчика белка.

Способ получения флуоресцеин-5

-иэотиоцианата нейтрального взаимодействием 5-аминофлуоресцеина с тиофосгеном н присутстнии реагента, свя-. зывающего хлористый водород, с дальнейшим выделением иэ полученной при этом реакционной массы целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целеного продукта, упрощения технологии и снижения пожароопастности процесса, в качестве реагента, связывающего хлористый водород, используют амиды или третичные амины и реакционную массу обрабатывают водой.

Источники информации, принятые но внимание при экспертизе:

l .&insheirne .З,3apodic V,Ви сМн Ие .J, Anat.В осИЕа,57, 227, 1974.