Способ определения амидазной активности биологических материалов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е 636258

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДИТНЗЬСТВУ (6!) Дополнительное к авт. санд-ву(5%} И. Кл.

С 12 К 1/00 (22) Заявлено 16-03 76 (23} 2335347/28-13 с присоединением заявки Р(о— (23) Приоритет (43) Опубликовано 05.12.78Зтоллетень % @g (45) Дата опубликования описания l0.1$ .78.

Государстооннмй ноинтет

Соеота Инннстров СССР оо делам нзооротеннй н открытнй (53) УДК577.XS (088.8) А. Г. Мат аРламов, A. А. 3анкнн н Л. В

c- < (72) Автори изобретении

Киевский научно-нссдедоватедьский инс и перелнвання крови (73) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ

БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Изобретение относится к технике определения амидазной активности преимущественно глутаминазы и аспарагнназы биологических материалов и может быть использовано в медицине, например в клинической практике при диагностике и прогнозировании.

Известен способ определения амидазной активности биологических материалов, предусматривающий приготовление смеси, содержащей исходный материал, субстрат н буфер, инкубнрование ее, введение химреагентов для окрашивания с последующим колориметрированием полученной смеси и определением активного по величине экстинкции fl) .

Этот способ наиболее близок к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату.

Недостатком способа является то, что он не обеспечивает высокой чувствительности (1 — 2 мкг азота аммиака), процесс определения сложен, трудоемок и длителен.

Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение определения.

Это достигается тем, что в предлагаемом способе определения амидазной активности

f биологических материалов окрашивание осугцествляют водно-ацетоновым раствором фенола, нитропруссита натрия и гипохлоридем калия, после чего смесь выдерживают при температуре 3? — 38 С в течение 30 — 40 мин, а колориметрированне проводят при длине волны б30 — 640 нм.

Способ осуществляют следующим образом.

К 0,2 мл бноматернала прибавляют 0,2 мл

0,5М фосфатного буфера с рН 7,9 — 8,5 и

1О 0,1 мл свежеприготовленного О, l5 М раствора субстрата (глутамина или аспарагина}, доводят общий объем инкубационной смеси до 1 мл бндистиллированной водой и инкубируют 15 — 30 мин прн 37 — 38 С, После тзокончання инкубацин добавляют 2,5мл реактива А, содержащего фенол (кристаллический) г 25 ацетон, мл 250 ннтропруссит натрия, г 0,05 воду (бидйстиллироваи20 ную), мл 250, тщательно перемешивают и добавляют 2,5 мл реактива Б, содержащего l% (по активному. хлору) гипохлорида калия, повторно тщательно перемешивают и инкубируют 30—