Способ диагностики иммунологического бесплодия

Способ диагностики иммунологического бесплодия

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

лой, имеющей 3 мм в наружном диаметре) микроскопически выявляется аутоиммунный орхит на стороне операции (безорганиэвция сперматогенного эпителия, слушивание поповых клеток, образование 5 многоядерных сперматид в семенных ка:нальцах всего органа, а также инфильтрация интерстициальной ткани клетками пламацитарно-лимфоидного ряда). Ппя определения сенсибилизации лимфоцитов к антигенам сперматозоидов из селезенки, удаленной непосредственно после забоя подопытных оперированных и контрольных крыс, не подвергавшихся экспериментальным воздействиям, готовятсуспензию лим- 15 фоцитов. Лимфоциты иэ периферической гепаринизированной крови человека получают иэ интерфаэы после центрифугирования лри 1800 об/мин в течение 30 мин на фикоп-верографиновом градиенте. Попу- ченные взвеси клеток отмывают дважды охлажденной до 4 С средой 199, определяют процентное содержание живых клеток по тесту с трипановым синим. Используют суспензии, содержащие 90-95% живых клеток, их концентрацию доводят до

4х10 клеток/мл. Суспензии сперматозоь ядов получают из эпидидимисв крысю а также из свежих эякулятов мужчин-донорг в, трижды отмывают средой 199 и концентрацию доводят до 8х10 спермаЬ тоэоидов/мл. Равные обьемы суспензии (по 0,3 мл) сливают, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин и помещиот в холодильник при 4 С на 90 мин,"

По истечении этого срока пробирки осторожно встряхивают, каплю суспензии помешают в камеру Горяева, подсчитывают 200 лимфоцитов при 450-кратном увеличении микроскопа и определяют процентное содержание лимфоцитов, к которым прилипло 3 и более сперматозоидов. Раздельно подсчитывают число лимфоцитов, установивших контакт с определенными участками {головка, хвост) сперматозоидов.

В селезенке оперированных крыс через неделю после начала опыта появляются лимфоциты, к поверхности которых присоединено головками 3 и более сперма50 тозоидов. Их число составляет 3,8%.

Такие пимфоциты отсутствуют в селезенке контрольных крыс. У крыС с аутоиммунным посттравмвтическим орхит ом от55 мечена положительная реакция кожной гиперчувствительности замедленного типа в ответ на внутрикожное введение антигенов сперматозоидов. Это позволяет рассматривать появление в лимфоидных органах оперированных крыс лимфоцитов, контактирующих с головками сперматозоидов, как показатель вовлечения иммунологических механизмов в патогенеэ упомянутого посттравматического орхитв.

В крови фертипьных мужчин лимфоциты, контактирующие со сперматозоидами, не обнаружены, тогда как у бесплодных мужчин, страдающих варикоцеле Ш степени, они выявлены у 12 иэ 15 исследованных больных. Процентное содержание лимфоцитов, присоединивших к себе 3 и более сперматозоидов, составило у этих больных 3,38% и варьировало от 0,5 до 7%.

При этом у 4 мужчин, больных варикоцеле, лимфоциты оказались сенсибипизированы и к антигенвм головки сперматозоидов (содержание их составило 3,2%) и к антигенам хвоста сперматозоидов (0,08%), тогда как у остальных 8 больных варикоцепе они были сенсибипизированы только к внтигенвм головки сперма-. тозоидовов.

На основании этих результатов можно заключить, что у 12 из 15 мужчин, страдающих варикоцеле И степени, имеет место иммунологическое бесплодие, которое связано с развитием иммунной реакции на антигенный материал, головки сперматозоидов у 8 из них и нв антигецы головки и хвоста сперматозоидов у 4-, что следует учитывать при лечении этих больных, в частности при десенсибилизации соответствующим антигенным материалом сперматозоидов.

Предложенный способ диагностики иммунологического бесплодия, так же, квк известный метод, дает отрицательные результаты у фертильных мужчин и, следоватепьно, может быть использован для диагностики иммунологического бесплодия как у больных, страдающих варикоцеле, посттравматическим HJIH инфекционным орхитом, так и у клинически здоровых мужчин и женщин, состоящих в бесплодном браке, То, что у контрольных крыс и фертильных мужчин лимфоциты, устанавливающие контакт со сперматозоидами, не выявляются, делает достаточным для диагноза — иммунологическое бесплодиевыявление даже небольшого числа таких лимфоцитов (0,5-1%).

Способ позволяет судить не только о сенсибипизации лимфоцитов к антигенам сперматозоидов и степени этой сенсибипизации, но и о том, к каким внтигейам сперматозоидов лимфоциты сенсибилизированы, что важно для оценки иммупологического механизма, ответственного за развитие патологического процесса в семеннике ипи организме, а следовательно, и для выбора метода эффективного лечения.

Формула изобретения

Способ диагностики иммунологического бесплодия путем совместной инкубации лимфоцитов и антигена с последующим опре638328 6 делением сенсибилизации лнмфоцитов, о т л и ч а ю я и и с я тем, что, с целью упрошения и повьппепия точности диагностики, лимфоциты инкубируют с живыми аллогенными сперматозоидами в течение

60-90 мин прн наличии контакта лимфоцитов и сперматозоидов диагностируют иммунологическое бесплодие.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.3. Яе згос) ГерМ К jtgV.21, 1970, р. 23-28.

Составитель Смирнова

Редактор Т. Фадеева Текред Э. Чужик Корректор Н, Тупица

Заказ 7169/2 Тираж 66 1 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4