Способ получения пептидов

Способ получения пептидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских 1

«i)639446

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕН Ия

К Й АТЕ НТУ (61) Дополнительный к натенту— (22) Заявлено 05.05.76 (21) 2366254/23-04 (23) Приоритет — (32) 04.06.75;

08.07.75 (5 ) Ч.Кл е С 07 С 103/52

А 61 К 37/02

Государственный комитет

СССР по долам изобретений и открытий (31) 583947;

594159 (ЗЗ) CIIJA (53) УДК 547.964.4 07 (088.8) (43) Опубликовано 25.12.78. Бюллетень Ле 47 (45) Дата опубликования описания 31.08.79 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Недампарамбил А. Абрахам, Ганс Вели Иммер, Вернер Роберт Нельсон, Казимир Сестандж (Канада) Иностранная фирма

«Эйерст Маккенна энд Харрисон Лимитед» (Канада) (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ

Изобретение относится к способу лолучения,новых пептидов — аналогов саматостатина, биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

В пептидной химии широко используют методы замыкания дисульфидного .мостика в лептидной цепи путем окисления соответствующего линейного пептида иодом или роданидом (1).

Целью изобретения являетоя способ получения новььх пептидов, обладающих цен5 ными .фармакологическими свойствами.

Это достигается предлатаемым способом получения лептидов общей формулы

9 ц (дГЩ )C0-Ъцо-Мг1-Phe — ТЪе — Тгр Lys — Т1и--Phe Thr — Ser-МИН(ЯС) Щ g где К вЂ” Н вЂ” Gly — Gly — Ala — Gly — NH; — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu )—

Н вЂ” Gly — Gly — Gly — Ala4Gly — NH или Н вЂ” >0 — NHCH(R ) CH>S — Trt (II), — Leu — Gly — Gly — Ala — Ыу — КН; где R — Н или СООН; К4 — BOC tGly-—

R — Н или СООН; — Gly — А1 а — Gly — NH; В ОС вЂ” Яу — Gly— или R — Н или NHR3 где R3 — ацил — Gly Ala — Gly — NH или ВОС вЂ” 1 eu— или бензоил; К вЂ” Н; — G1 у — (з1у — А l а — 61у — N Н; или R1 — Н вЂ” Ala Gly — NH; К вЂ” 15 или К вЂ” Н; R4 — H или 1ЯНКз где Кз

COOAlk, где Alk — лрямоцепочечный или имеет вышеуказанное значение; разветвленный алкил С1 — С 4. или R2 — COOAlk; К4 — BOC Ala—

Способ заключается в том, что линей- — Gly — NH; ный пептид формулы окисл.яют:иодом или роданидом с полуTrt — SCH>CH (R4) СΠ— Lys (ВОС) — Asn — 2o чением соответствующего циклического ди— Phe — Phe — Тгр — 1.ys (ВОС) — сульфид4того ктроизводното формулы

8СН2СНЯ"1QO- Lqa(BOO)-А5п-Phe-Phe-Trp-Lgg(BOO) Thr (But)-Fhe4PIu-(ри4>-чет 6ие)639446

65 где яг и я4 имеют вышеуказанные значения, с последующим удалением всех оставшихся защитных групп соляной кислотой.

П р и:м е р 1. Трифтора цетат метилового эфира аланил-гли цина (Н вЂ” Ala —,Gly—

ОМе СР3СООН) .

10 г ВОС вЂ” Ala — Gly — ОМе (45 лгмолей) растворяют в 100 мл. холодной (ледяная баня) трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают 1 час,при 0 С и отгоняют растворитель, сстаток,растворяют в метаноле, добавляют к диэтиловому эфиру и выпавший в осадок продукт отфильтровывают.

П р и и е р 2. Метиловый эфир трет. бутилоксикарбонил - глицил-аланил - глпцина (В О С вЂ” Ы у — A I a — G l y — ОМе) .

К холодному (ледяная баня) раствору

Н вЂ” А}а — G!y — ОМе СНЗСООН (45 молей) и диметилфомамиде (50 мл) добавляют -этилморфолин (рН 8), затем охлажденный раствор 18 г ВОС вЂ” Gly — ОТср (45 л1л4олей) в диметилформамиде (50 мл). Раствор выдерживают на ледяной бане 2 дня. Растворитель отгоняют, продукт чистят хроматографией на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь этилацетат (метанол) пиридин (98: 1: 1). Продукт кристаллизуют из смеси этилацетата .и петролейного эфира и получают вышеуказанное соединение, т. пл. 98 — 100 С, ЯМР (ДМСΠ— де); 1,25 б (ЗН), 1,4 б (9Н), 3,68 б (ЗН).

П р и и е р 3. Три фторацетат метилового эфира глицил-аланил.гли цина (Н вЂ” Gly— — Аl а — Gl у — ОМе СгзСООН) .

6,4 г (20,1 ммолей) ВОС вЂ” Gly — Ala— — Gly — ОМе,:растворяют в,холодной (ледяная баня) трифторуксусной кислоте (120 мл) и .раствор перемешивают при 0 С

1 час. Расвворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле, IIIðîävêò осаждают добавлением диэтилового эфира и отфильтровыва ют.

Пр.и мер 4. Метиловый эфир трет. бутилоксикарбонил - глицил - глицил-аланилглицина (BOC — Gly.— G}y — Ala — Gly— — — О.Че) .

К холодному (лед|яная,баня) раствору

6,4 г (20,03 ммоля) Н вЂ” Gly — Ala — Gly вЂ”â€” ОМе СНЗСООН в диметилформамиде (30 мл) при перемешивании дооавляют

N-этилморфолин (2,8 мл), затем раствор

8,5 г (24 ммоля) .BOC — Gly — OTcp в диметилформамиде (20 мл). Раствор выдержи;вают на ледяной бане 2 дня. Растворитель оттгоняют, остаток растворяют в метаноле и продукт осаждают диэтиловым эфиром, кристаллизуют из этилацетата, получают вьипе указанное соединение, т. пл. 103—

105 С и 141 С (диморфность); ЯМР 1,25 б (ÇH), 1,38 б (9Н), 3,65 б (ЗН) .

П р и M ер 5. Гидразид трет. бутилоксикарбонил-глицил-глицил - аланил - глицина

l0

Зо

45 (В ОС вЂ” Иу — «Ы у — Al a — G ly — NH— — NHã) .

К холодному (ледяная баня) раствору

2,5 г (6,7 ммолей) ВОС вЂ” Gly — Gly — A!a—

Gly — ОМе в метаноле (50 мл) при перемешиьании добавляют 2,5 мл гидрат гидразина. Раствор перемешивают при 0 три часа и при комнатной температуре в течение .ночи. Осадок отфильтровывают,,промывают метанолом, сушат, получают выше указан ное соединение; аминокислотный анализ:

G!y 3; Ala 0,99.

Пример 6. Метиловый эфир трет.бутилоксикарбонил - глицил - глицил - аланилглицил-S-тритил-цистеинил-N -трет.бутилоксикарбонил-лизил — аспарапинил - фенилаланил-фенилаланина. (ВОС вЂ” Gly — Gly— — Ala — Gly — Cys (Trit) — Lys — (ВОС)— — Asn — Phe- — Phe — ONe) .

К раствору 1,57 г (4,2 лжоля) ВОС— — Gly — GLy — Ala — G}y NH — МНг в диметилсульфоксиде (25 мл) и диметилформамиде (25 мл) „îáà.â.ëÿþò 2,04 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (5,15 мл) при — 10 С, Смесь охлаждают до — 12 С и добавляют 0,61 мл (5,2 ммоля) трет.бутилнитрита. Выдерживают при — 10 С 15 мин, охлаждают до — 15 С и к смеси добавляют вначале 1,8 л л (рН 8) N-этилдиизопропиламина, затем раствор 4,5 г (4,18 смолей)

Н вЂ” Cvs (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe— — Phe — ОМе и вновь 0,72 мл N-этилдиизолропиламина в диметилформамиде (25 мл).

Смесь перемешивают один час при — 10 С и в течение .ночи при комнатной тем пературе. Упаривают, остаток растворяют в метаноле, продукт осаждают водой и кристаллизуют 13 метанола, получают вышеуказанное .соединение; аминокислотный анализ:

Lys 1,07; Asn 0,97; Gly 3,27; А!а 1,0; Phe

2,08; цпстеиновая кислота 1,35.

Пример 7. Гидразид трет.бутилоксикарбонил-глицил глицил-аланил - глицил-Sтритил-цистеинил-N - трет.бутилоксикарбо,нил-лизил - аспарагинил - фенилаланил - фенилаланина. (ВОС вЂ” Gly — Gly — Ala — G}y— — Cys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe— — ХНМНг) .

К холодному (ледяная баня) раствору 0,9 г (0,66 моля) ВОС вЂ” Gly— — Gly — Аlа — Gly — Cys (Trit) — Lys (ВОС)— — Asn — Phe — Р}1еОМе в диметилформамиде (25 мл) добавляют 1,5 мл гидрата гидразина. Раствор перемешивают 18 час при комнатной температуре. Растворитель отгоняют, остаток .растирают с метанолом .и сушат над пятиокисью фосфора, получаюг ьышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys 1,10; Asn 1,00; Gly 3,33; Ala

1,0; Phe 2,14; цистеиновая кислота 1,35.

Пример 8. Трет.бутилоксикарбонилглицил-глицил,аланил- глицил-S - тритил цистеинил-N- - трет.бутилоксикарбонил-лизилас парагинил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-N - трет.бутилоксикарбонил-ли639446

ВОС 61у-С1ч — YiQ G?(9 <(lS -(- 9-: — Thr (3u )- Fhe — Thl (2u j —,.Ег (Ва ) — Ä>> — " 1

З5

50 зил-О-трет.áyтил-трео>гил — (ре11?1лал! анил-Отрет.бутил-треонил — фенилала»ил - О-трет.— бутил-треонил-О-трет.бутил - серпл - S-тритил цистеин. 1ВОС вЂ” Gly — С(1.,! — A .a — Gly—

Cys (Гг(1) — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe—

Trp --- Lys (ВОС) — Thr (Вп ) — Phe— — Т11г (Bu ) — Ser (Bu ) — Cys (Trit)OHj.

К раствору 800 мг (0,59 ялоля) ВОС— — Gly — С11 — А! а — Gly — Cys (! г1?) — Lys— (.ВОС) — A n — Phe — Phe — АНИН в диметилформамиде (12 мл), охлажденному до — — 20 С, добавляют 1,85 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (О 795 л л, 1,475 лгмо гя). Смесь охлаждают до — 15 С и добавляют 0,081 лгл (0,71,и,?10 гя) третбутилкитрит, раствор !перемешивают 15 лин.

Раствор 816л(л (0,59 члголя) H — Trp — Lys— (BOC) — Thr (Bu ) — Phe — Thr(Bu )—

SeI — (Bu ) — Cys (Trit) — OH и 0,354 лл (2,06 >!(моля) N-этилдиизопропиламина в диметилформамиде (6 ?гл) охлаждают до — 15 С и добавляют к реакционной смеси, которую перемешивают при — 15 С 1 час и при 25 С 18 час. Растворитель отгоняют, остаток растирают с ледяной лимонной кислотой, отфильтровывают, промывают водой и метанолом, сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Хуз

К этому соединению добавляют холод.ную концентрированную соляную кислоту (23 лл) на бане с ледяной водой в атмосфере азота при силь?1ом перемешивании в течение 10 лгин., затем добавляют ледяную уксусную кислоту (300 лл) и раствор лиофилизуют. Остаток растворяют в воде и снова лиофилизуют, оста-ок растворяют в

0,01 н. водном .растворе ацетата а м мония и вносят в колонку с карбоксимет?1лцеллюлозой (Ватман СМ-23, 2,5Х30 сл). Продукт элюируют 0,06 н.,растВОрОм ацетата аммония (буфер) . Очищенное вещество лиофилизуют и получают вышеуказанное соединение в .виде белого ocàäêà в виде его укоусной соли; ië„„,. МеОН 282 лгк (в 5260), 289 мк (В 4730); аминокислотный анализ:

Lys 2,28; Asn 1,05; Thr 1,95, Ser 0,98> Cys

2,34, Gly 3,00, Ala 1,05, Phe 3,12. Повторная лиофилизация соединения дает соединение в виде свобо1ного основания, ампнокислотный анализ: Lys 2,10; Asn 1,04; The 1,80;

Ser 0,95; Суз 2,17; Gly 3,00; Ala 1,07; Phe

2,99.

Лналогично v0?I(?>0 получить вьппеукаiIIPHvIeH?IR Вместо Йода родан по методу Хиски .и Смита.

Пример 10. Метиловый эфир трет.бутилоксикар бонил-лейцил — глицил-глицил1О

25!,9!; Asn 0>9:I;;hr 1,6; Ser 0,49; Gly 2,82;

Aia 1,00; Р11е 2,80.

>Пример 9. Циклический дисульфид глпцпл-глицил-аланил - глицил - цистеинилЛИЗИЛ - аСПаРаГИНИЛ - фЕНИЛаЛЯНИЛ - фЕНИЛала ппл1-Т!риптофил — лизил — треонил-фенилаланил-треонил-серил-цистеина. (Н вЂ” Gly— — Gly — Л! а — Иу — Суз — 1 ys — Asn — Phe— — Cys — ОН).

0,871 г (0,32 лглголя) ВОС вЂ” Gly — Gly— — Ala — Gly — Cys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn— — Phe — Phe — Trp — Lys (ВОС) — Thr (Bu )— — Phe — -Т11 г (Bu ) — Ser (Bu ) — Cys (Trit)—

QHi >аст;>0>>я10т >I >1е >яногл > су>сной кислоте (50.!1л) и по каплям дооавляют к 0>5%ному раствору иода в метаноле 150 .ил, (30 л,"(о.геи) при перемешиванип 1 час прп комнатной температуре. Смесь .продолжают перемешивать еще 45 минут, затем охлаждают на льду и добавляют 1 н. раствор о ?пл гппосульфита натрия в воде для разрушения избытка йода (бесцветный раствор). Растворитсль отгоняют, остаток растирают с водой, сушат и сухой продукт растирают с изопропиловым эфиром, получают циклический дисульфид гексадскапсптпда формулы аланил-глищша (ЛОС вЂ” — Lcu — Ыу — Gly-— Лlа — Gi!, — ОМе).

2 г (5,35 язго.гни ) раствора BOC — Cily —à — ((1у — A l a — G i y — О t e ь —,p n ô т 0 р > 1 c; c í 0 i i

1>.пслоте (20 .1(л) перемсп1;isaiо — при и С В тече?п(е ч са. Раствор>итель Oтгсняют, остаток,растирают с эф ром, оса.:ок собирают и С1 IllaT> ПОЛУЧа!От ТЕТРЗПС1>ТПД (РОРМ> ЛЫ

xi — Сг1у — uiy — Лlа — (!у — - Ме, В Впдс тр1(1тору? c с»ОА с0;111. 5,30 !

П(ЕППИда. °,0(г (>>u .«.!10.гя! !1 .> — L U — 1-1

1,35 г (10 лд(оля) l-оксибснзтрпазо1а, 2.27 г (. -.) 1 1 — :; — - Д1

11 ?глолеи,! диц?1к1огекс .1карбодим11,;,а и

0,68 г (-э > плмор(ро.(ина В ди 1етплформам1!де (20 .> .I) пер! и! iii>isàþò 1>pii 0 С 2- час.

Осадок отфильтровываю:, фиlhTpaT добав I5ilo I к д?1эт11.1овояу эфир1 (200 л.г) . ВыlIaBllIIIII ОСВДОК ОТДСЛ>Я10Т П КРИСТаЛЛПЗУIO". из смеси мета»0.1а и изопропп.10ВОГО эфп;)я, получаlот указа>нное Выше сосдп пенис: т. пл, 190,5 — 193o С, Гс) == — — > 5,2" (С = 1, д етилформамид) .

Пример l i. Гпдразпд трет.бутилоксикарбонил-лейцил - глпцил — г,1ицил-аланил-гликина. (ВОС вЂ” Leu — Giy — Gly — Ala— — Gly — NH 1 1Н,) .

2 г (4 из(оля) раствора ВОС вЂ” 1 еп— — Gl.ó — Gly — Лlа — Яу — ОМе и 4,12 м.1 (80 ллолеи) .п1драта гидразина в метаноле

639446

Раствор 0,56 г (0,38 ммоля) ВОС— — Leu — Gly — Gly — Ala — Gly — Cys— — (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe— — ОМе и 0,74 мл гидрата гидразина в диметилформамиде (10 мл) перемешивают при 0 С 12 час и п.ри 25 С 24 час. Раствор до|бавляют к 100 мл диэтилового эфира, .вы45 (И-1.ец-Ц1у-g1g-.Ца-Р,у-Ср-Zijs-Азгг Phe. 71.е-Тг1г--г..:В-Т. г-РЬе-1 Ьг-Яег-С95-О 4 !

55 (50 мл) перемешивают,при 0 С 4 час.

Смесь концентрируют упариванием до 4 лгл и добавляют к диэтиловому эфиру (200 мл) .

Осадок собирают, растворяют в метаноле (4 лгл) и добавляют к диэтиловому эфиру (200 мл). Вы павший осадок отделяют, сушат и получают указанное выше соединение, т. пл. 174 — 176,5 С; (а),",= — 1.2,0 (с = 1, диметилформамид).

Прим ер 12. Метиловый эфир трет.бутилоксикарбонил-лейцил - глицил - глицил-алаHил-глицил-S òðèònë-цистеинил-Х трет,бутилоксикарбонил-лизил — аспарагинил-фенилаланил-фенилаланина (ВОС— — Leu — 01уг — Gly — Аlа — Gly — Cys (Trit)— —.Lys (B0C) — Asn — Phe — Phe — ОМе) .

0,15 мл (1,27 ммо гя) трет.бутилнитрит добавляют к раствору 0,308 г (0,635 ммоля)

ВОС вЂ” Leu — Gly — Gly — Ala — Gly — N>H в днметилформамиде (5 мл) при — 20 С и

2,4 н. хлори етый водород в этила цетаге (0,66 мл, 1,59 ммоля) . Перемешивают

15 мин при — 90 С к смеси добавляют раствор 0,62 г (0,58 ммоля) Н вЂ” Cys (Trit)— — Lys (В ОС) — Asn — Phe — Phe — ОМе и

0,372 мл диизопропилэтиламина в диметилформамиде (6 мл) . Смесь перемешивают при — 20 С .в течение часа:и inри 0 С 24 ч, затем добавляют к 200 мл дгнэтиловому эфиру. Выпавший осадок собирают, раство,ряют в метаноле (5 мл) и добавляют к диэтиловому,эфиру (200 мл). Осадок отфильтровывают, сушат и получают вышеуказанное соединение с т. пл. 238 — 240,5 С.

Пример 13. Гидразид трет.бутилоксикарбонил-лейцил - глицил - глицил-аланил-глицил-S-тритил-цистеинил-N -трет.бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил — фе— нилаланил-фенилаланина (ВОС вЂ” Leu— — GIy — Gly — Ala — Gly — Cys (Trit) — Lys— (ВОС) — Asn — Phe — Phe — КНЯЖН ) .

Раствор 0,23 г (0,081 ммоля) ВОС— — Leu — Gly — Gly — Ala — Gly — Cys (Trit) — Lys (BOC) — Asn — Phe — Phe — Trp —— Lys (BOC) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — Cys (Trit) — ОН в уксусной кислоте (90 мл) по каплям в течение часа прибавляют к раствору 0,5о о-ного иода в метаноле (41,5 мл, 0,81 ммоля). За5

l5

40 павший осадок собирают, растворяют в дпметилформамиде (3 мл) и добавляют K

100 мл диэтилового эфира. Осадок собирают, сушат и получают вышеуказанное соединение, т. inл. 239 †2 С; аминокислотный анализ: 1 уs 1,.G5; цистеиновая кислота О,бб; Asn 0,99; О!у З,GG; А!а 1,11; 0,5

Cys 0,21; Leu 0,96; Рпе 1,86.

Пример 14. Трет.бутилоксикарбониллейцил - гли цил-глпцил-аланил - глицил-Sтритил-цистеинил-N -трет. бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил-триптофил - N -трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-трет.бутил — треонил-фенилаланил-О-трет.бутил - треонил-О - трет. бутил-серил-S-третил-цистеин (ВОС вЂ” 1 eu— — Gly — Gly — Al à — Ыу — 1Суз (Trit) — Lys (В ОС) — Asn — Phe — Phe — Тгр — Lys— (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser— (Bu ) — iCys (Trit) — 0H).

0,03 мл (0,28 ммоля) трет.бутилнитрита добавляют к раствору 0,20 г (0,14 ммоля)

В О С вЂ” Le u — G I y — G l y — A I a — G I y — C ys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — N>H .в диметилоульфоксиде (2 мл) и диметилформамиде (4 мл) и 2,21 .н. хлористого водорода в этилацетате 0,16 мл (0,35 ммоля) охлажденному до — 20 С. Перемешивают

15 мин при — 20 С, добавляют раствор

0,20 г (0,14 ммоля) Н вЂ” Trp — Lys (ВОС)— — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu )

Cys (Trit) — ОН НСООН и 0,08 мл (0,49 ммоля) диизопрапиламина в диметилформамиде (5 м.г). Раствор перемешивают лри — 20 С 1 час и при 0 С 24 час. Затем концентрируют до 2 мл .и добавляют к диэтиловому эфиру (100 мл), осадок собирают, промывают, водой (2Х5 мл), .метанолом (2х5 лгл) и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Zys 1,92; цистеиновая кислота 0,93;

Asp 0,93; Thr 1,38; $ег 0,66; Gly 3,00; Ala

1,02; Cys 0,39; Leu 0,93; Phe 2,70.

П р и;и е р 15. Циклический дисульфид лейцил- глицил-глицил - аланил - глицилцистеинил-лизил-аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил-триптофил - лизил - треонил-фенилаланил-треонил-серил - цистеина тем раствор перемешивают при комнатной температуре 1 час и охлаждают до 0 С.

Вводят 1,62 мл гипосульфита натрия до полного обесцвечивания раствора. Растворитель отгоняют, осадок отделяют, сушат, растирают с эфиром, сушат и облучают циклический дисульфид гептадекапептида формулы

639446

ВОС-Юи-Oty-Ala- Ы -С??в-Lys (30C)-ASn-7he-РЬе-rrp-1.ув(ВОС)l

- Тлг (Зи )-P2ie-Thr (B?? )- )ег {BL? )-Cy>-011

Раствор О., l55 г (0,066 ммолей) циклического дисульфида тептадеканептида в ?кон ц. соляной кислоте (6,87 мл) в атмосфере азота энергично перемешивают при 0 С 8мин, добавляют уксусную кислоту (69 мл) и лиофилизуют. Остаток растворяют,в воде (50 мл) и вновь лиофилизуют, продукт хроматографируют в колонке с химически модифицированны м сшитым декстраном Сефадвкс G — 25 М (ЗХ60 см), уравновешенным в нижней фазе, затем в верхней фазе смеси бутано I: уксусная кислота: вода (4:1:5).

Верхнюю фазу лрпменя?от для десорбцип пептида. Фракции, содержащие чистый лептид, собирают, упаривают и лиофилизуют .из,воды, аолучают вышеуказанное соедине.ние в виде его укоуснокислой соли.

УФ-спектр, Х .,(МеОН): 290 мк (e 5900), 281 мк (в 5540), 275 мк (e 5205), 269 мк (s 4980), 265 мк (е 4625), 259 мк (в 4085) .

Повторная лиофилиза ция этого лродукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде его свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 1,98; цистенновая кислота

1,41; Asp 1,26; Thr 1,92; Ser 96; Gly 3,00;

Аlа 1,01; Leu 0,96; Phe 2,76.

Аналогично можно получить вышеуказанное соединение, применяя вместо йода ролан.

Пример 16. Метиловый эфир трет.бутилоксикарбонил -,глицил-глицил - глицилаланил-гликина (ВОС вЂ” Gly — Gly — Gly—

Ala — Gly — ONe) .

Раствор 3,7 г (10,04 л?моля) ВОС вЂ” Gly— — ОТср, 3,12 г (8,03 ммоля) Н вЂ” Gly — Gly— — Аlа — Gly — ОМе CF, СООН и 1,1 мл Nэтплморфолина в диметилформамиде (15 мл) перемешивали при 0 С 20 час. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат добавляют к диэтиловому эфиру. Осадокотделяют, объсди??я?от с предыдущим и кристаллизуют из метанола, получают вышеуказанное соединение; т. пл. 198 — 201 С. (а) д4 = — — — -3,9 (c= l, диметилформамид).

Пример 17. Гидразид трет.бутилоксикарбонил-глицил -глицил -глицил - аланилглицина (ВОС вЂ” Gly — Gly — Gly — А! а — Gl;,—

— АНИН,).

Раствор ),0 г (2,32 ммоля) ВОС вЂ” Gly— — Gly — Gly,— А1а — Gly — OMe 1 мл (23,2 м.ноля) и гидразингидрата в метаноле (30 мл) перемешиваюг при 0 С 4 час. Упаривают.

Остагок растирают с диэтиловым эфиром, сушат и получа?от вышеуказанное соединение с т,,пл. 221 — 223 С.

Пример 18. Гидразид N S-дитритилцистенил - N-трет.бутилоксикарбонил - лизил-аспарагинил - фенилаланил - фенилаланина (Trit — Cys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn— — Phe — Phe — НХН ).

Раствор 1,25 г (1,0 ммоля) Trit — Cys— (Trit) — 1.ys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — ONe и 0,97 мл (20 ммо.?ей) гидр азингидрата в метано1e (30 мл) перемешивают при 0 С

2 дня. Растворптель отгоняют и остаток кристаллизуют пз смеси этанол/изопропиловый эфир, получают вышеуказанное соединение; ЯМР (ДМ СО 4): б 1,38 (S, 9Н), 7,19 — 7,30 (m 40Н).

Пример 19, N.S-дитритил-цистеииилЬР -трет.бутилоксикарбонил-лизил аспарагпнил - фенилаланпл-фенилаланил - трипто ри.1-Х- -трет.бутплоксикарбонил - лизил-Отрет.бутил-треонил - фенилаланил-О - трет.бутпл-треонпл-О-трет.бутил - серил-S - Трптил-цпстепн (Trit — Cys (Trit) — Lys (ВОС)— — Asn — Phe — Phe — Тгр — 1 ys (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Ви ) — Ser (Bu ) — Су (Trit) ОН) 0.09 мл (0,74 ммоля) Третбутилнитрита доб",sëÿþ1 к охлажденному до — 20 С раствору, содержащему

0,2 г (ОЛ93 ммо.? ?) Trit — Cys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — NHNH в диметилформамиде (10 мл) и 2,6 н. раствора хлористого водорода в этилацетате (0,475 мл, 1,23 ммоля). Перемешивают

15 м пн и ри — 20 С, добавляют 0,7 (0,493 з?з?о гя) раствор Н вЂ” Trp — Lys (BOC) — The (Ви ) — Phe — Т11Г (Bu );— — Ser (Ви ) — Cys (Trit) — ОН - НСООН и

0,3 мл (1,65 .ималя) динзопропилэтиламнна в дпметилформамиде (10 мл). Раствор перемешивают при — 20 С 1 час и при 25" С

24 часа и упарпвают. Остаток растирают с водой, диэтиловым = фиром, холодной 1 н. лимонной кислотой, сушат и получают вышеуказанное соединение. ЯМР (СЭС1з);

6 1,08 и 1,13 (S. 27Н), 1,37 ($,18Н), 7,28 (m, 60Н); аминокислотный анализ; Lys 2,23; цистеиновая кислота 1,10; Asp 1,00; Thr 2,12;

Ser 1,02; Cys 0,64, Phe 3,18.

Пример 20. Формиат S-тритил-цистеинил-N -трет.бутилокси-карбонил - лизил-аспарагинпл-фен, 1а,1."..:ил - фенилаланил-триптофил-Х- -трет.бутилоксикарбонпл - лизилО-трет. бутил-треонил - фениланил-Π— трет.бутил-треоннл-О-трет.бутил - серил - S-тритил-цистенна (Н вЂ” Cys (Trit) — Lys (ВОС)-— Asn — Phe — Phe — Trp — Lys (ВОС) — Thr —— (Bu ) — Phe — Thr (Ви ) — Ser (Bu ) — Cys— (Trit) — ОН НСООН) .

Раствор 0,50 г (0.192 ?ямоля) Trit — Cys— (Trit) — 1 ys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — Trp— — Lys (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu )— — Ser (Bu ) — Cys (Trit) — ОН 6 мл смеси уксусной кислоты/муравьиной кислоты/воды

639446

12,, i -GlÓ-61 1-»11)-А а-G1,У-C S-Lug-М«-Phe Ðhå-T о-1ув-ТЬ -Phe-Ttiг-Бег-Сув-0И »

30 уч „,у 1ц — р„ „вЂ” - G:.Ll-<»S — уз(ВОС) — A=r — Phe — Phe — ."..rp- у

1 11 г (Вц )-Pt.e-Tt„r (Яи ) — ger (Зи ) — Суб — ОН

50 (7:1:2) перемешивают при 25 С 6 час. Растворитель отгоняют и остаток растирают с диэтиловым эфиром, получают вышеуказанное соединение; агминокислотный анализ:

Lys 2,23; цистеиновая кислота 1,38; Asp 1,00;

Thr 2„14; Ser 0,86; Phe 3,24.

Пример 21. Трет.бутилоксикарбонилглкцил-глицил — глицнл — аланил - глицил-Sтритил-цистеинил-N — трет.бутилоксикарбонпл-лизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил - триптофил-N --трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-трет.бутил - треонил-фенилаланил-О-трет.бутил - треонил-О-трет.бутил-серил-S - тритил-цистеин (ВОС) —— — Gly — Gly — Gly — А1а — Gly — Суз (Trit)— — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — Тгр — Lys (ВОС) — Thr (Вц ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — Cys (Trit)i QH).

0,04 мл (0,34 ммоля) Трет.бутилнитрита добавляют к охлажденному до — 20 С раствору 0,076 г (0,176 смоля) ВОС вЂ” Gly— — Ciy Gly — Ala — GIy — МНМН в сМеси диметилсульфоксида (1 мл), диметилформамид (2 мл) и 2,5 н. раствора хлористого

Раствор 0,285 г (0,103 млоля) ) ВОС— — G1 y — Gly — Gl y — А! а — С1у — Су» (Trit)—

Li s — (ВОС) — Asn — Phe — Phe — Trp — Lys— (ВОС) — Thr (Вц ) — Phe — Thr (Bu )— — Ser (Bu") — Cys (Trit) — ОН в уксусной кислоте (200 мл) добавляют к раствору

0,5-ного йода в метаноле (52 мл, 1,03 ммоля) в течение 60 мин, продолжают перемеРаствор этого циклического дисульфида гептадекапептида (0,1 млоля) в конц. соляной кислоте (10 мл) перемешивают при 0 С 10 мин. в атмосфере азота. Добавляют 100 мл уксусной кислоты и лиофилизуют. После повторной лиофилизации из воды (100 мл) остаток хроматографируют на колонке с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс

G — 25, 3 Х 50 см) суспендирова иным в нижней фазе смеси бутанол/уксусная кислота/вода (4: 1: 5). Для десорбции используют верхнюю фазу, получают почти чистый гептадекапептид. с! истые фракции объединяют, упаривают и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в

«иде уксуснокислой соли.

УФ-спектр, Л,„,„(МеОН) 283 лгк (в 6702), 289 мк (e 6350). Повторная лиофилизация

25 водорода в этилацетате (0,176 мл, 0,44 ммоля). После перемешивания .при — 26 С в течение 15 мин к смеси добавляют раствор

0 385 г (0,16 ммолей) HCys (Trit)

Lys (В ОС) — Asn — Phe — Phe — Tr p — 1.у» (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — Cys (Trit) — ОЕХ . НСООН и 0,12 мл диизопропилэтиламина в диметилформамиде (5 мл). Раствор перемешивают при — 20 С 1 час, затем температуру поднимают до 0 С и перемешивают 1 час, затем перемешивают еще 20 час п1?и 20 С. Растворитель упаривают и остаток добавляют к диэтиловому эфиру (100 мл). Осадок собирают, промывают водой, метанолом и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys 2,30; цистеиновая кислота .1,42; Asp 1,00; Thr 2,72; Ser 1,00;

С1у 3,84; Аlа 1,00; Phe 3,34.,П р и м е,р 22. Циклический дисульфид глицил-глицил-глицил - аланил-глицил - цистеинил - лизил-аспарагинил-фенилаланилфенилаланил - триптофил — лизил - треонилфенилаланил-треонил-серил - цистеина шивание 60 мин при комнатной температуре. Раствор охлаждают до 0 С и добавляют 1 н. 2,06 ммоля раствора гипосульфита натрия, для обесцвечивания. Растворитель отгоняют, маслянистый остаток добавляют к воде (100 мл), Выпавший осадок отфильтровывают, сушат и получают циклический дисульфид гептадекапептида формулы продукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 2,0; цистеиновая кислота 1,42; Asp 1,09; Thr 1,89;

Ser 0,91; Gly 3,64, Аlа 0,98; Phe 2,95.

Аналогично можно получить вышеуказанное соединение применяя вместо иода родан по методу Хиски и Смита.

Пример 23. N,S-дитритил-цистеинилN- -трет.бутилоксикарбонил-лизил-аспараги ил - фенилаланил-фенилаланил - триптофил-N - -трет.бутилоксикарбонил - лизил-Отрет.бутнл - треонил - фенилаланил — Отрет.бертил - треонил-О-трет.бутил - серил2-третилтиоэтиламид, ((Trit) — Cys (Trit)— — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — Тгр — 1.ys (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — ХНСН..С Н.S — -Тг11).

639446

Раствор 0,230 г (0,083 ммоля) ВОС вЂ” 1,еа-6 .g- С t ч-Мц- Gl у — C S (Tr;t)-1ð l3GC,, — Asn-71; е,-ТЪе - Тгр- - -:в(ЯОС)L

-Thr (Su ) Phe Tbr(Bu )-Ser (Ви")-Ъ11С11. СН.>-Тг t

3 2

Раствор 0,80 г (0,637 ммолей) пидразида пентапептида Trit — Cys (Trit) — Lys (ВОС).—— Asn — Phe — Phe — NHNH> в cyieм д нмети1форма миде (9 мл) и охлаждают до — 20 С. Добавляют к нему 2,4 н. распвор х,;орнстого водорода в этилацетате (0,691 ммол-2), 3аTPM 0,0872 мл (0,764 ммоля) трет.бутилннтрита. Смесь перемешивают

15 л ин при — 15 С. Р,аствор 0,852 г (0,637 ллоля) Н вЂ” Trp — Lys (ВОС) — Thr (Bu )— — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — ХНСН СН,S — Trit в димепилфор мамиде (8 л л), содержащий 0,272 мл (1,59 ммоля)

N-этил-днизопропиламина, охлаждают до — 15 С и по каплям добавляют к реакционнойй смеси. Перемешмва ние продолжают при — 15 С 1 час и при,комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток ipBctHрают с водой, фильтруют, промывают вюдой, сушат пад пяпиокисью фосфора. Остаток хроматографируют в колонке с силикагелем (163 г), продукт элюаруют хлороформом, содержашим 3% мета иола и 0,3% лиридина. Ч>истый продукт к ристалл изуют из омеои метанола с изоп ропиловым эфиром и получают вышеуказанное соединен не с т. пл. 163—

180 С (разл.).

Найдено, %: С 69,24; Н 7,09; М 8,9.

C>49Н>8oNI6OioSz.

Вычислено, %: С 69,85; Н 7,04; N 8,76.

П р,и.м е!р 24. Форм иат S-трипил цистеинил - N -трет.бутилоксикарбонил - лизиласпарагинил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-М- -трет.бутилоксикарбонил - лизил-О-трет. бутил-треоныл - фенилаланил-Отрет.бутил-треонил-О-трет.бутил - серил - 2тр итилпиоэт иламида (Н вЂ” Cys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe — Phe — Тгр— — Lys(B0C) — Thr (Bu ) — Phe — Thr {Вп )— — Ser (Bu ) — NHCH)CH;S — Trit . HCOOH) .

Раствор 0,909 г (0,355 ммоля) ундекапептида Trit — Cys (Trit) — Cys (ВОС1 — — Asn — Phe — Phe — Trp — Lys (ВОС)— — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Вц ) — Ser (Bu )— — NHCHqCHqS — Trit в омеои 20 мл уксусной кислоты (муравьиной к ислоты) воды (7: 1: 2) перемешивают в течение, ночи при комнатной температуре. Раствор итель отгоняют, остаток .распирают с водой, полученный осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат над питиокисью фосфора, получают вышеуказанное соединение; амянокислотный ачализ: l ys 2,03; Asp 1,00; Ser

0,87; Phe 2,9:; цистевнювая кислота 0,90;

Thr 1,85.

Пример 25. Трет.бутилоксикарбоннллейцлл-глици1-глвцил-аланил — глицил — STpHTH;I - ццстепи "-N- - трет.бутилоксикарбонил-лизил-аспарапинил - фенвлалан ил - фе10 нилаланил - триптофил-N - трет.бутилоксиE карбонил - лизил - О-трет.бутил - треоиилфенилаланил-О-трет.бутил-треонил-О- трет.бутил — серил - 2 - тритилпиоэтиламид ((ВОС) — Leu — Gly — Gly — А1а — б1у— — Cys (Trit) — Lys (ВОС) — Asn — Phe— — Phe — Trp — Lys (ВОС) — Thr (Bu )— — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — XHCH CHqS — Trit).

К,раствору 0,066 г (0,136 ммоля) гидразина пентапептида ВОС вЂ” Leu — Gly — Gly— — Л! а — Gly — XHNH, в сухом димет ил форма миде (3 мл), охлажденном до — 20 С, добавляют 2 н. 0.175 мл соляной кислоты в этилацетате, затем 0,,0186 мл (0,13 ммоля) трет-бутилнитрита. Смесь перемешиваю г прп — 15 С 15 мия. К реакционной омесн пю каплям добавляют раствор 0,315 г (0,133 млоля) H — Cys (Trit) — Lys (ВОС)— — Asn. — Phe — Phe — Trp — Lys (ВОС)— — Тпг (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu )— — NHCHzCHqS — Trit в д и метилформамиде (4 мл), содержащий 0,082 мл (0,476 л молей) N-этплдиизопропиламина, охлажденного до — 15 С, перемеш ивание,продолжают при — 15 С 1 чае и при .комнат ной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выпаривают в вакууме, остаток,растирают с охлажденной .Нс льду l!H . ли монной кисlo ToH, фильтруют и про мывают водой.

4 Твердый остаток распирают с мета но1ом и сушат,над пят иокисью фосфор а,,получ";þ г вышеуказанное соединение; аминюкислотный анализ: 1у 1,88; цистеиновая кислота

0,84; Asp 1.00; Thr 1,94; Ser 0,97; Gly 2.78;

45 1 0,89; 1 0,89; Р1

П р и м е.р 26. Циклический дисульфи .1ейци1-глицил - глиц ил - аланил - глицилцистеинил-.1изил - аспарагинил - фенилаланил-фени 1аланил-триптофил-лизил-треонилфенилаланпл - треонил-серил - 2-тиоэтиламида

639446

15 в0С - еи — Ы y — 0; „— Л . 3 — Q1 — Ср — Ьф (ВОС -ASn- РЬе-7 he-ТГр- L s (3 ОС) -Th|,Вц )-Р". -Т .—.т Яц )-Бог(30

) — >fHc H F14 „8

< Н вЂ” С1Ц-61g СЦ-А1п-01ц-Суз — LgS — ASe — Phe-Phe-Тгр — Lgs — Т1 г — Г!, — Тйг-Ser HHCK CHy S ) 45

50 в уксусной кислоте, l.00,èë) медленно добавляют при сильном перемешивании и раствору 0,211 г (0,83 ммоля) йода в 42 мл метанола при комнатной температуре, смесь перемешивают при комнатной температуре

60 мин. Медленно охлаждают до 0 С и добавляют 1 н. раствор гипосульфпта натрия

При сильном перемешивании к циклическому гексадекапептиду в концентрированной соляной кислоте (7 мл) при 0 С, в атмосфере азота, в течение 10 мин добавляют 90 мл уксусной кислоты, и раствор лиойилизуют. Остаток смывают 2",о-ной укй су.сной кислотой в воде и лпофилизуют, 3атем чистят хроматографией на колонке с химически модифициорованным сшитым декстраном Сефадекс G — — 25 М (Зх50 см) уравновешенным вначале в нижней фазе смеси бутанол/уксусная кислота/вода (4: 1;

: 5), затем уравновешенным в верхней фазе. Для десорбции почти чистого гексадекапептида применяют верхнюю фазу. Чи стые фракции объединяют, выпаривают, лиофилизуют и получают вышеуказанное соединение в виде уксусной соли.

УФ-спектр: Х„,„(Me01- 290 мн (в 4290);

282 мк (в 4910), 273 мн (в 4630). Повторная лиофилизация продукта дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ; Lys 2,01;

Asp 1,35; Ser 0,93; Ala 0,99; Phe 2,52; цистеиновая кислота 0,66; Thr 1,98; Gly 3,00;

1 ец 0,96.

П р и и е р 27. Трет.бутилоксикарбонил-глицил-глицил — глицил-аланил-глицилS-тритил - цистеинил-М -трет.бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил — триптофил-N трет.бутилоксикароонил-лизил-О-трет.бутил - треонил-фенилаланил-О-трет.бутил - треонил-О-трет.— бутил-серил-2-тритилтиоэтиламид. (ВОС— — Gly — Gly — Gly Ala — Gly — Cys (Trit) —— Lys (ВОС) — Ass — Phe — Phe — Тгр — 1 уз—

Раствор 0,224 г (0,083 ммоля) BOC—

Gly — Gly — Gly — А1а — Gly — Cys (Trit)—

Lys (ВОС) — Asrt — Phe — Trp — Lys (ВОС)—

Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu )—

NHCHqCHqS — Trit в 160 мл уксусной .кислоты медленно добавляют к сильно перемешиваемому раствору 0,211 г (0,83 ммоля) иода в метаноле (42 мл) при комнатной

40 в воде для разрушения избытка иода (обесцвечивание раствора).

Растворитель отгоняют почти досуха, остаток растирают с холодной водой, фильтруют, промывают водой, сушат над пятиокисью фосфора, промывают эфиром и сушат, получают циклический дисульфид формулы — (В ОС) — Т1|г (Вц ) — Phe — Thr (Bu )— — Ser (Bu ) — ЫНСН.СН,Ь вЂ” Trit)

К раствору 0,0608 г (0,141 л|моля) гпдразидпентапептида ВОС вЂ” Gly — Gly — Gly— — А1а — Gly NHNH2 в сухом диметилформамиде (6 мл) и 2 л|л диметилсульфоксида, охлажденному до — 20 С добавляют 2 н. соляную кислоту в этилацетате (0,176 мл, 0,352 ммоля), затем 0,019 л|л (0,196 ммоля) трет.бутилнитрита. Смесь перемешиваютпрп — 15 С 15 мин. Раствор 0,327г (0,133 ммоля) Н вЂ” Cys (Trit) — Lys(ВОС) — Asn — Phe— — Phe — Trp — Lys(ВОС) — Thr (Bu ) — The— — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — ХНСН,СН28 —— — Trit в диметилформамиде (4 мл), содержащий 0,085 мл (0,494 ммоля) N-этилдиизопропиламина, охлаждают до — 15 С и по каплям добавляют к реакционной смеси.

Продолжают перемешивание при — 15 С

1 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растирают с охлажденной на льду 1 н. лимонной кислотой, фильтруют и промывают водой. Твердый остаток растирают с метанолом и сушат над пятиокисью фосфора, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys 2,31; цистепновая кислота 0,84:

Asp 1,00; Thr 2,26; Ser 1,19; Gly 4,00; Ala

0,84; Phe 3,2.

Пример 28, Циклический дисульфид глицил-глицил-глицил-аланил-глицил — цистеинил-фенилаланил-фенилаланил - триптофил-лизил-треонил - фенилаланил - треоIHJI — серил-2 - тиоэтиламида температуре. После добавления иода перемешивание раствора продолжают при комнатной температуре 60 мин. Раствор охлаждают до О С и медленно добавляют к нему 1 н. раствор гипосульфита натрия в воде для разрушения избытка иода (до обесцвечивания) . Растворитель отгоняют почти досуха, остаток растирают с холод639446

17 формулы

ВОС вЂ” С1Ц вЂ” 1гЗ вЂ” Clg — Л1а — Cl 1 — Cg & — 1-ЦВ ЛОС)-АS - P1Ie—

-Phe — Tr p — 1.ггS 13001 Thr(3u 1 — Fhe — 1 " (5u 1 — Ser 1Вц 1 — 5HQQZI"HZ S (н-Gly-сну ALII,-иу-cys-Lys-Asn-Phe-phe-тгр-Lys-туг-Рьг Thr-Яег-жнсн„сн, S }

) 40

ВО;.— Gl,y с у — л10-cly — I".ys — l узл0с1-Р.в."- ье-11ге — I "i --ф Й г - i

-Т?гг (Bu )-Phe -Тйг (Ви )- Беь (Зи 1 lllCH<

Этот циклический гексадекапептид сильно перемешивают с 7мл концентрированной соляной кислоты при 0 С в атмосфере азота в течение 10 мин. К смеси добавляют 90 мл уксусной кислоты и раствор лиофилизуют. Остаток смывают 2% -ной уксусной кислотой в воде и вновь лиофилизуют. Остаток хроматографируют на колонке с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс G — 25 М), уравновешенным вначале в нижней фазе системы бутанол/уксусная кислота/вода (4: 1: 5), затем в верхней фазе этой системы. Для десорбции почти чистого гексадекапептида используют верхнюю фазу.

Чистые фракции объединяют, упаривают и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли.

УФ-спектр: л.., (МеОН) 288 лгк (е4870), 280 мк (в5575), 274 мк (e5380), 268 лгн (в5185), 265 лгк (в4955). Повторная лпофилизация последнего продукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ:

Lys 1,72; Asp 1,00; Ser 0,73; Ala 0,69;

Phe 2,78: цистеиновая кислота 0,57; Thr

1,69; Gly 3,59.

Пример 29. Трет.бутилоксикарбонилглицил-глицил-аланил-глицил - S - тритилцистеинил-N- -трет. бутилоксикар бонил - лизил-аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил — триптофил - N-- трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-трет.бутил - треонил - фенилаланил - О - трет.ávTHJl-треонил-О-трет.оутил-серил-2 — тритилтиоэтиламид. (ВОС—

0,860 г (0,3 ллоля) ВОС вЂ” Gly — Ыу—

Ala — Gly — Cys — (Trit) — Lys (ВОС) — Asn—

Phe — Phe — Trp — Lys (B0C) — Thr (Bu )—

Phe — Thr (Bu ) — Ser (Bu ) — NHCH>CH S растворяют в 150 мл ледяной уксусной кислоты и по каплям при перемешивании, в течение часа добавляют к раствору 0,5%-ного иода в метаноле (150 мл, 30 лглолей) процесс ведут при комнатной температуре. Смесь

l5

Gly — Сг1у — Ala — Ыу — Cys (Trit) — Lys— (ВОС) — Asn — Phe — Phe — Тгр — Lys— (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu )—

Ser (Вгг ) — ИНСН СНг8 — Trit).

К раствору 800 мг (0,58 ловля) ВОС—

Gly — Gly — Ala — Сл1у — Cys (Trit) — Lys— (ВОС) — Asn — Phe — Phe — NHNHz в

12 лл дпметилформамида при — 20 С до бавляют прп перемешивании 1,85 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (0,795 мл, 1,475 лмоля). Температуру смеси охлаждают до — 15 С, добавляют

0,081 м.. :(0,71 млоля) трет.бутилнитрита и раствор перемешивают 15 мин. Раствор

0,52 г (0,637 ммоля) Н вЂ” Trp — Lys— (ВОС) — Thr (Bu ) — Phe — Thr (Bu )—

Ser — (Вп ) UHCH>CHqS — Trit и 0,354 мл (2,06 лмоля) N-этилднизопропиламина в

6,0 лл диметилформамида охлаждают до — 15 С и добавляют к вышеуказанной реакционной смеси. Смесь перемешивают при — 15 C в течение часа и при 25 С 18 час. Растворптель отгоняют, остаток растирают с ох—.ажденной на льду лимонной кислотой, фильтруют, промывают водой, метанолом, сушат и получают вышеуказанное соединение. Аминокислотный анализ: Lys 2,01;

Asp 0,97; Thr 1.60; Ser 0,65; цистеиновая кислота 0,87; Gly 2,92; Ala 1,00; Phe 2,97.

Пример 30. Циклический дисульфид глицил-глицил-аланил - глицил-цистеиниллизил — аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил — трнптофил-лизил - треонил-фенилаланил - треонпл — серпл — 2-тиоэтиламида. продолжают перемешивать еше 45 мин, охлаждают на льду и добавляют 1 и. водный раствор гипосульфита натрия (6 лгл) для разрушения избытка иода (до обесцвечивания раствора). Растворитель отгоняют, остаток растирают с водой, сушат и сухой продукт растирают с