Способ контроля процесса ферментативного разрушения клеточных стенок микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСА НИ-Й изоьгЕТЕНИя ц639938

Союз Советских

Сациаг;истических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ -Ф4, Р1 ж (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 08.08.77 (21) 2516642 28-13 с присоединением заявки Ме (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.12.78. Бюллетень М 48 (45) Дата опубликования описания 30.12.78 (51) Л1. Кл."С 12К 1 00

Государственный комитет

СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 663.18.576.

8.093.1 (088.8) (72) Авторы изобретения С. А. Коновалов, С. П. Воротило, А. Т. Айсаков и Г. Ф. Сухопаров (71) 3аявитсль Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ ПРОЦЕССА ФЕРМЕНТАТИВНОГО

РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ СТЕНОК МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности, а именно к способам контроля, процессов разрушения клеточных стенок микроорганизмов с помощью специфических ферментов литического действия.

Известен способ контроля процесса ферментативного разрушения клето шых стенок микроорганизмов в условиях постоянной температуры, давления и рН с последующим измерением продуктов ферментолиза.

-!

Однако для этого характерны большие погрешности при определении продуктов ферментолиза.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Для достижения поставленной цели измерение продуктов ферментолиза осуществляют путем добавления щелочи и по количеству израсходованной щелочи судят о полноте разрушения клеточных стенок микроорганизмов.

В основе способа лежит изменение физико-химических параметров опытной среды, в данном случае параметра рН, при протекании процесса ферментативного лизиса.

Изменение этого параметра обуславливается следствием разрушения компонентов клеточной стенки микроорганизма и перехода в опытную среду продуктов ферментативного гидролиза. Поскольку конкретным условиям лизиса клеточных стенок— температура, давление, характеристика активности литического комплекса и т. п.— постоянно отвечает определенная величина кислотности или параметра рН, оптимальная для протекания процесса ферментолиза, то для стабилизации этих условий (при неизменной температуре, давлении, активности литического комплекса и т. д.) требуется введение в опытную среду титрующего агента. Повышение интенсивности процесса фермснтативного лизиса сопровождает15 ся образованием продуктов ферментолиза и вследствие этого повышением расхода титранта. Окончание процесса определяется по прекращению подачи титранта.

Таким образом, процесс ферментолиза характеризуется постоянным по величине расходом титранта.

Пример 1. В примере приведены показатели процесса ферментативного лизиса микробных клеточных стенок.

В реактор с мешалкой загружено 200 кг сухих дрожжей (БВК) и 1600 л водопроводной воды. После перемешиванпя в течение 30 мин при 80 С смесь охлаждают до

50 С и введением 1 н. раствора щелочи

3п (NaOH) в реакторе устанавливают вели639938

Степень лизиса клеток, установленная при микроскопировании, о/о

50

90

100

Расход щелочи на титрование от начала процесса, л

2,1

3,5

5,0

6,5

7,1

Формула изобретения

Составитель С. Воротило

Редактор М. Дмитриева Тетсред И. Рыбкина

Корректор О. Данишева

Заказ 2209/14 Изд. № 770 Гиракк 526 Подписное

НПО Государственного комнте ".а СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунов, 2 чину рН 7,0, оптимальную для процесса ферментолиза, т. е. действия комплекса литических ферментов. Процесс ферментолиза начинается:после загрузки в реактор

2 кг ферментного препарата с активностью 5

300 тыс. ед./г. По истечении б ч ферментолиза в контрольной пробе при микроскопировании отмечено окончание процесса разрушения клеточных стенок дрожжей. По ходу процесса ферментолиза, проходившего 10 при атмосферном давлении и температуре

50 С, осуществляли стабилизацию рН реакционной среды путем непрерывной и автоматической подачи раствора щелочи, т,е. титранта. 15

Пример 2. В ферментер с мешалкой загружено 100 кг сухихдрожжей рода Candida

guiIIiermondii и 800 л водопроводной воды.

После перемешивания в течение 30 мин при

30 С смесь охлаждают до 50 С в водном 20

Результаты отражают функциональную зависимость между степенью массового разрушения клеточных стенок микроорганизмов и расходом титранта, служащего для стабилизации величины рН. 25

Приведенные примеры показывают методическую простоту способа контроля процесса, исключение фотометрических преобразований результатов измерений и возможность реализации контроля посредством общепромышленных расходомеров.

Таким образом, способ контроля процесса ферментного разрушения клеточных стенок микроорганизмов обеспечивает по сравнению с известными способами возможность количественного контроля процесса лизиса, исключающие использование фотометрических анализаторов с характерными растворе 1 н. щелочи (МаОН) в растворе установили вели пину рН 7,0, оптимальную для процесса фермсптолиза. Процесс ферментолиза начинается после загрузки в реактор 1 кг фермецтпого препарата с активностью 300 тыс. ед./г. Ilo истечении 3 ч фсрмсптолиза в контрольной пробе прн микроскопнровании отме епо окончание процесса разрушения клеточных стенок дрожжей. 110 ходу процесса ферментолиза, проходившего,при атмосферном давлении и температуре 50 С, осуществляли стабилизацию рН реакционной смеси посредством непрерывной автоматической подачи раствора щелочи.

Показатели процесса, свидетельствующие о прямой зависимости между расходом титрапта (1UaOH) и степенью массового разрушения клеточных стенок дрожжей, следующие: для них пОгрешиостями, а также возмо;кность использования для контроля процесса ферментолиза простых промышленных приборов (расходомер).

Способ контроля процесса ферментатпвного разрушения клеточных стенок микроорганизмов в условиях постоянной температуры, давления и рН с последующим измерением продуктов ферментолиза, о т л ич а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности определения, измерение продуктов ферментолиза осуществлгпот путем добавления щело ьи и по колнчесгву израсходованной щело ш судят о полноте разрушения клеточных стенок микроорганизмов.