Способ отделения -форм бактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(643534 (61) Дополнительное к авт, свил-ву (22) Залвлено 30.09.77 (21) 2528363/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (51) М. Кл

С 12 К 1/04

Опубликовано 25,01.79. Бюллетень №3

Дата опубликования описания 25.01.79 (53) УДК

576.8.093.1 (088,8) С. В. Прозоровский, И. A. QBGHGBR-KIIoKoEB, H. C. Тартаковский н О. В. Полковникова 1 ;; (.,,;-; 1.

Научно-исследовательский ордена Трудового Красного Знамени . институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Й. Ф. Гамалеи (71) Заявитель

Изобретение относится к области медицинской микробиологии.

Известен способ определения L-форм бактерий, путем посева исследуемого материала на диагностические питательные среды с последующим учетом BblpocUlHõ колоний (1). 5

Однако извесгный способ не обеспечивает высокой чувствительности и быстроты определения, Цель изобретения — повышение чувствительности и ускорения способа, 1Î

Это достигается тем, что исследуемый материал предварительно подвергают изопикническому центрифугированию в градиенте плотности изотоничного вещества, и посев осуществляют на среды, не содержащие L трансформирующего 35 агента.

Кроме того, в качестве изотоничного вещества используют фиколл, урографин.

П р и и е р. Выделение 1.— форм из смыва ротовой полости здоровых людей. 2О

В предварительных опытах было показано, что L-формы гетерогенны по плотности и образуют в градиенте плотности фиколла gea слоя, 2 имеющие плавучую плотность 1,04Щ01 г/см и

1,10+0,01 г/см, причем во втором слое присутствует более 90% жизнеспособных клеток

1=форм. Плавучая плотносгь бактериальных клеток в градиенте плотности фиколла равняется

1,15+0,01 г/смз. При ультрацентрифугированин смеси бактерий и L— - форм происходит распределение клеток на фракции, имеющие соответствующие плотности.

Фиколл 400 растворяют в дистиллированной воде и автоклавируют i.ðè 110 С 10 — 15 минут.

Линейные градиенты плотности готовят, исходя из 50% (r/r) раствора фиколла в специальном смесителе при комнатной температуре. Иа градиент с плотностями от 1,01 до 1,21 г/см, объемом 4 мл наслаивают 1 мл исследуемого материала и центрифугнруют на центрифуге

Beckman L- 6S в роторе SW 50 при 4 С в течение

5 час при 40000 оборотов в минуту. После центрифугирования фракции (по 0,5 мл) отбирают при комнатной температуре различными способами: верхние фракции, содержащие 1 — формы, с 5-ой по 10-ую отсасывают пипеткой сверху, нижние фракции, содержащие бактериалы ые клетки, с

Сос(ч?????ель С. {?)ал?зг?(на (ехред Э Цуж)()с Корректор П. (упнца

Реда-<тор П, Разумова { ?(()ae 527 Подписное

{4{1!(ИП(И (Ос) дарссвеннОГО комитета СССР ()о пенам пз(»Г!Рете?»?(й и Открь(()?й

1{ 3(335, Москва, Ж-35, Pay?((c? ая наб., д. 4/5

Заказ 7944/26.Фнг!(>ал ПП{! "i{a)YI?T", г. У!Хеopof!, уп. Проектнаа, 4

1-OH HO 4. ?(IO Ги!I3V ц)!Т(»;„1 ((ро(с (л(,!BBHJIH fj(lia

itBifTf)H(P5"жнОЙ !И)ООИРки, (T(3()PBH!!Зlе фP!(и?1)иi

ВНОСЯТ В (1!ИЗИ!Г)>1ОГИЧ СКИП ))BCTBO() И ВЫС; В" И)т i!a

Д)(З(ИОСГИЧСС(СУ(0 !тцтат!»т!?»1?3!1() ОГ)(»ДУ {3(»3 )(ЕИИ?11"))

Лина. П(3И ВЫСBBC (f?)pGKJ(H!! j)TjOTHOCTb К() ГО(. ЫХ соотВетстиует цлзиучс((плот((ос)и 1--форм Г5!-а и 7-ая) наол(от(а(от 1)ост ти! и!",Цых коле!П1ий исстз«»?(?(ьных (. QopM. П(>»и Вы! ВВ ци)((?и(х (1)!)Р>1»цци с .-Ой ПО 4-У)о,, JIB ч ц?Псах Вы{)астзьат Оэ(стс()изт(!!ные KoJioHHH. (з ко(тп)олы(ь(х Оиьттах исследус- О мьГЙ мат(Рт!3?(BbtccBB1oT цз ст)е!(В(с ()сии((и?(лином

И бЕ3 НЕГО. (Та Ча((ИТЗХ ОС3 Ptf! ??()HОТГ((СЗ 0{?ИЛЬ)(Б>(1(@Ц ТЕ»1!ИГН(Ы(Ы((РОС). ЦЕ ЦОTB Of! Jf P T 0 (3»(1()?)У)((И(.1.

КО (ОНИИ { — (i)OP) ((?ЕДЧЗГ?)Е>11,(?(MQT()П Bb!??BJ(CI<(a? 1 (! 0{11.? Р

1 Рздиеите ппотности цозиоляст быс(,)0 д()саит((»уть

»(у!л?!его )тдспр!1?(я { --()()p!»j Oт ра!.т:1")H?, и (»1(3>хс! бь(ТЬ (тт)ИМЕ)(СИ для ВЫДЕЛеиия I.. (1!О?)ь(ИЗ ;;."(ест .?

ВЕРЦЬ(Х ?(СОЧ»(!И(С()В! TiPH ДИЗ(11()СТИ?СС 3a6С)?(Е»ВЗни((, В зксиер(тмецталы{ых 1(се?(е??Овз цсях! В тех слу<(зях, ко(>да з(!ЗИОГН?еные McTo!?bl Hc л(Заол (о(0?ТИГ({)У)((О(Г(!! )()J)MB(И) 3З ((PИСУТСТВИЯ В НИЗКОМ

—,!!! {)(1! )зн тета(зпьиои цои /".!j!I(!(I, о) о р ь! у?! 3 и 3 о б р е т е 1? и я

» ! .,110„ 0 (» 01(РЕ )r!! Гииfт({ — (()ОР)((3;1(СJЕ!)ИH ЦУ„

Те»(1 »ГО!,.,BB И,CJIBfi)!ЕМО(О М(1 »Г>иа(!З Ha f!I)!?j ЦГ)СТИ

Ч! (.K?f! Hif (ат ЛЫ((И: (,!3(Ь! С 110с!((»((»!10(В(ИХ(уиатОМ

Вы()осl((их к(3лои)(Й! 0 т и и ч и к) щ и Й с я тем, ?Г(0! с. Целью Г(оцьш(еиия чуВОТВИ(ет!ы(()сти и ус(сорсиия cjtîcoáa, исследуемый материал (т()едвз{зительио иодас !)Г(((от и30цикии (ес(соы б пОнт Г>и(()3 ГН{)ОВЗЦИГО В t I)i(ÄHCI(TC ц?(От)1()с)и Изотоl!ИЧИОГО ВС.

1??!)CTB, И ЦО(; B ос;!HIBCTBЛЯ(О Т ? (З С )ЕД(>(, Jf Со{(Е(!3из и!не { — трансФорм)1()ун)(1(е1х) агента, >), Сиос(?{) Ио л.(, о тл и ч а!О иl и и с jt тем, Чт(» В IСЗЧЕ! П! Иаотоии!В?01 0 ВЕ!?)СС: Ва ИС(!ОЛЬ.! » ÞT

ГГ)И КОЛЛ, У)ЗГИ {) З({Л{!!.

1 (:TO (HHKH (IH(jlOL 13(H(H, J)Ptfti(IT!>IC BO BHHi -.IB.

«!! C ((РИ 3KCilс(УГИЗЕ !!, 1 имзкои 8, (3, (!„ЗГзц f Я "?»(" 1(стВО (1!!(Со{3 (ЗВО)ЗТЗСЕЗ!) И (.— (f?)()p(!!(bj баКТЕВИИ, М.! ((4!с()и)?ииа 19{»7 с 214.-219