Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВХОРСИОМУ СВйДЕПЙЬСТВУ

1п 644484

Союэ Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 05.02.76 (21) 2323969/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30,01.79. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 30.01.79 (51) М Кл

Л 61K 35/12

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 615А5:

: 612.398.145. .1(088.8) оо делам изобретений открытий (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к технологии получения препаратов ДНК и может быть использовано в качестве лекарственного препарата при лечении некоторых заболеваний. 5

Известен способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем экстракции из животного сырья с последующим лиофильным высушиванием полученного экстракта (11. 10

Однако известный способ не обеспечивает получения быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения. 15

Целью изобретения является получение быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения. 20

Это достигается тем, что экстракт подвергают пристеночному замораживанию с толщиной слоя 8,0 — 10,0 мм при температуре от 0 С до — 40 С и лиофилизируют втечение 38 — 40 ч при равномерном повыше- 25 нии температуры от — 20 до +20 С.

Пример 1. 50 г замороженной зобной железы теленка мелко нарезают и гомогенизируют при 8000 об/мин в 10 объемах стандартного цитратно-солевого раствора 30

2 (CCLI) с рН 7,2 в гомогенизаторе Поттера.

Центрифугируют 10 мин при 2,5тыс. об/мин на рефрежераторной центрифуге. Надосадок сливают, а процедуру отмывки осадка ядер повторяют трижды.

К осадку добавляют в соотношении 1: 20 по объему раствор ССЦ и додецилсульфат натрия (SDS) до концентрации 1 /о и ставят на депротеинизацию на качалку на

3 ч. После этого добавляют смесь хлороформ+-изоамиловый спирт (в соотношении

10: 1) и депротеинизацию продолжают еще 30 мин, Затем центрифугируют и осаждают в 2-х объемах охлажденного спирта.

Часть ДНК растворяют в 0,14 М раствора NaC1 и проводят полную физико-химическую идентификацию. Если основные параметры соответствуют требованиям, всю

ДНК растворяют в растворе CCLI с рН 7,2 и ионной силой 0,01 с концентрацией

2 мг/мл, разливают в стерильные мерные флаконы объемом 500 мл, ставят в вертикальный замораживатель для пристеночного замораживания при — 40 С на 10 мин и переносят в кассету, охлажденную до — 20 С для лиофилизации при заданном режиме: от — 20 до +20 С в течение 38 — 40 ч.

После высушивания препарат ДНК снова подвергают физико-химической иденти644484

Составитель С. Малютина

Текред С. Антипенко

Корректоры: Л. Орлова и О. Тюрина

Редактор Г. Лановая

Заказ 2647/13 Изд. № 146 Тираж 680 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 5К-35, Раушская наб., д 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 фикацип и сравнивают с исходными результатами. Указанный режим обеспечивает полную сохранность исходных свойств препаратов ДНК. Так например, молекулярный вес (полимерность) ДНК уменьшается на 25 — 30 /о, параметры, отражающие состояние вторичной структуры биополимера, т. е. нативность системы водородных связей, остаются почти неизменными.

Пример 2. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стерильные флаконы объемом 100 мл в количестве 30 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 8 — 10 мм. Режим лиофилизации от — 20 до +20 С в течение

38 — 40 ч. При данных условиях обеспечивается почти полная сохранность исходных свойств первичной и вторичной структур препарата ДНК. Так, молекулярный вес (полимерность) ДНК составлял 20 — 21 млн.

Пример 3. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стерильные флаконы Объемом 50 мл В количестве

15 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 8 — 10 мм. Режим лиофилизации от — 20 до +20 С в течение 38 — 40ч.

Физико-химические свойства препарата

ДНК: молекулярный вес колеблется в пределах

20 — 22 млн.

П р и мер 4. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стерильные флаконы объемом 100 мл в количестве

15 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 5 — 6 мм. Режим лиофилизации от — 20 до +20 С в течение 38 — 40 ч.

Используемая толщина пристеночного слоя приводит к резкому снижению полпмерпости (от 25 до 4 — 5 млн.).

Пример 5. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стериль5 ные флаконы объемом 100 мл в количестве

40 — 50 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 12 мм и более. Режим лиофилизации от — 20 С до +20 С в течение

38 — 40 ч. Используемая толщина присте10 ночного слоя не обеспечивает полного высыхания слоя ДНК. Физико-химические свойства ДНК остаются исходными, но такой препарат не пригоден для хранения.

Предлагаемый способ обеспечивает полу15 чение быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения.

Формул а изобретения

Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем экстракции из животного сырья с последующим лиофильным высушиванием полученного экстракта, о тл и25 ч а ю щи йс я тем, что, с целью получения быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения, экстракт подвергают пристеночному

30 замораживанию с толщиной слоя 8,0—

10,0 мм при температуре от 0 С до — 40 С и лиофилизируют в течение 38 — 40 ч при равномерном повышении температуры от — 20 до +20 С.

35 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Каталог Serva feinbiochemica, 1975 г., с. 51, Мв 18560.