Способ получения экстракта желчных кислот

Способ получения экстракта желчных кислот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социапистииесиих

Республик

647599./ "-л

Ф

;ъl

t (61) Дополнительное к авт, свид-ву—

2 (22) Заявлено 03,10,77 (21) 2529081/23-13 (51) M. Кл

Я 01 М 33/16 с присоединением заявки № (23) Приоритет—

Гасуде рстеенный иеиитет

СССР оо делам изобретений и открытий

Опублнковано15.02,79. Бюллетень № 6

Дата опубликования описания 18.02.79 (53) YQK 616-003.

236 (088 8) (72) Авторы изобретения Л. Ф Блюгер, Л. A. М аксим ов а, Б. P. Гецули на и Б, А» Слз ог оль (71) Заявитель

Рижский мецицинский институт (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3КСТРАКТА ЖЕЛЧНЫХ

КИСЛОТ

Изобретение относится к области медидины и касается получения желчных кислот из ткани печени.

Известен способ получения экстракта желчных кислот из ткани печени путем гомогенизации ткани, экстракции этанолом при нагревании, очиогки экстракта(1).

Оцнако известный способ не обеспечивает высокого выхоца и чистоты целевого продукта.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и степени очистки.

Цель цостигается тем, что по предлагаемому способу экстракцию этанолом осуществляют в присутствии гидроокиси аммония, а очистку — смесью хлористого метилена и дистиллированной воды.

Способ осуществляют слецующим образом.

Ткань печени весом в 1,0 г гомогенизируют в О, 1 М фосфатном буфере рН 7,4 в соотношении 1:4. К 1 мл гомо .гената добавляют 20 мл этанола и 0,1мл

25%-ного раствора гидроксида аммония.

Смесь помещают в ультратерл1остат на 15-20 мин при 50-60 C. Полученный экстракт фильтруют, к фильтрату цобавляют 20 мл хлористого метилена и 15мл дистиллированной Воды C,Meñü встряхивают

2-3 мин и оставляют на 10-12 ч при комнатной температуре. Полученная смесь имеет следуюише объемные соотношения компонентов - этанол: гицроксиц «ммония: хлористый метилен: воца — 2:0,01:

:2: 1,5.

H течение этого времени смесь делится на две фракции, которые разцеляют.

Верхняя фракция состоит из этанола, гидроксида аммония и воцы и ооцержит эстрагированные и очи1ценные желчные кислоты, Нижняя фракция содержит хлористый метилен с небольшой примесью этанола, в которолт содержится незначительное количество желчных кислот. К этой фракции добавляют 8 мл цистиллированной воцы, встряхивают и оставляют на 3-4 ч при комнатной температуре.

647599

Составитель С. Малютина

Редактор В. Трубченко Техрец М. Петко Корректор С. Патрушева

Заказ 298/37 Тираж 1089 Поцписное

ЦКИИПИ Госуцарственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., ц, 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгороц, ул. Проектная, 4

В течение некоторого времени смесь цополнительно разцеляется ««а верхнюю и нижнюю фракции. Дополнительная верхня««фракц««я состоит из этанола и Воды и содержит жег««ь«е кислоты". Эту фракцию желчных кислот присоеци««яют к ранее полученной, Общий экстракт желчных кислот выпа " ривают досуха на вакуумном испарителе, Осадок растворяют в О, 3 мл бутанола. В 0 осадке содержатся свободные и коныоги:рованные желчные кислоты.

Качественное определение желчных кислот осуществляют с помощью восходящей тонкослойиой хроматографии на силикагеле.

Для разцеления желчных кислот используют систему растворителей слецующего состава: 2,2,4 — триметилпентан, циизопропиловый эфир, уксусная кислота, изопропиловый спирт, этиле««хлориц,— воца в соотношении 2:1:1:1;1:0,26.

Хроматографию проводят на стеклянных пластинах размером 50х18 см, покрытых слоем силикагеля, толщина слоя 0,25 мм. ?5

На пластину наносят О, 1 мл экстракта желчных кислот, выделенного из ткани печени, Ряцом с опытными образцами наносят 0,02 мл смеси стандартов желч««ых кислот в концентрации 1 мг/мл. После

30 разцеления пластину высушивают на возцухе, затем опрыскивают 0,1 / ным раствором концентрированной серной кислоты ,о в 96 этаиоле. Пятна желчных кислот ицентифицируют в УФ-свете (360 мм).

Для количественного определения со держания желчных кислот в ткани печени методом спектрофлуориметрии участки пятен силикагеля с желчными кислотами

40 (опытные и контрольные) снимаютс пластины,„растворяют в 2 мл концентрированной серной кислоты, инкубируют в о ультратермостате в течение 1 ч прн 60 С, Силикагель осаждают центрифугированием при 1500/ . Нацосацочная жицкость со45 цержит желчные кислоты в концентрированной серной кислоте, Флуориметрию проводят при цлине вол««ы 470 мм. Количество желчных кислот в ткани печени вычисляют по формуле о с

К 3, с гце Ко- концентрация желчных кислот в экстракте, рассчитанная в мкг иа 1 г ткани печени, Э„- показания прибора при исслецовании экстракта, мЛ; .

К вЂ” концентрация желчных кислот в стандартном растворе (20 мкг);

Э вЂ” показания прибора при исслецовании ста««цартов желчных кислот, мА;

Р— вес исследуемой печени, г.

Г1рецл гаемый способ обеспечивает высокий выход (цо 91%) желчных кислот, соцержаших свободные и конъюгирован««ые желчные кислоты, хорошо очищенные от липицных и цругих примесей.

Способ может применяться цля изучения процессов биосинтеза и обмена желч««ьтх кислот у ряда различных животных, а также у человека, и может сыграть большую роль в решении вопросов патогенеза поражений печени и в установлении прогноза исходов поражений печени

Формула изобретения

Способ получения экстракта желчных кислот из ткани печени путем гомогенизации ткани, экстракции этанолом при нагревании, очистки экстракта, о т л и— ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и степени очистки, экстракци«о этанолом осуществляют в присутствии гицроокиси аммония, а очистку — смесью хлористого метилеиа и дистиллированной воцы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.

1 Lipids, 1974, 9, 4, 294-297.