Вакцина для профилактики и лечения краснухи у рыб
Иллюстрации
Реферат
Союз Советских
Социалистических
Республик
<>649380
ОПИСА
ИЗОБРЕТЕН И Я
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 09.06.77 (21) 2496750/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М Кл. А 01 К 61/00
С 12 К5/00
Государственный комитет по делам изабретекий и открытий (43) Опубликовано 28.02.79. Бюллетень ¹ 8 (53) УДК 639.331.7 (088.8) (45) Дата опубликования описания 26.03.79 (72) Автор изобретения (71) Заявитель
Е. Ф. Осадчая
Украинский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (54) ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ
КРАСНУХИ У РЫБ
Глицерин
Солевой раствор Хенкса
10 — 25
Остальное
Изобретение относится к биологии, а именно к ихтиопатологии.
Известна противовирусная вакцина длч борьбы с вирусом — возбудителем краснухи карпов, включающая антиген, полученный из внутренних органов больных краснухой рыб, которые содержали вирус, и формалин, используемый для инактивации вируса (1).
Однако при использовании этой вакцины невозможно проконтролировать наличие вируса в используемом материале и его количество.
Целью .данного изобретения является повышение терапевтического эффекта.
Для достижения этой цели предлагаемая вакцина дополнительно содержит гидроокись, алюминия, глицерин и солевой раствор Хенкса, при этом используют культуральную жидкость, содержащую рабдовирус ГТ-82 с титром от 105 до 107
ТЦД„0, а компоненты берут в следующем соотношении, вес.
Вируссодержащая культуральная жидкость, содержащая рабдовирус ГТ-82 с титром от 105 до 10 ТЦДао 10 — 50
Гидроокись алюминия 10 — 25
Формалин 0,3 — 0,5
В иммуногенной вакцине используется
40 вес. % рабдовируса ГТ-82 (в составе впруссодержащей культуральной жидкости) с титром 105 — 10 ТЦД5p, для пролонгирования его действия в организме рыб в качестве депонента применяют 20 вес. %
1о 6 0-ного раствора гидроокиси алюминия.
Инактцвирован вирус 0,3 вес.,p формалина и в качестве стабилизатора используют
20 вес. % стерильного глицерина, который предварительно разводят в 19,7 вес. % со15 левого раствора Хенкса. Готовый препарат сохраняют в холодильнике при 4 С в течение 6 месяцев.
Для приготовления противовирусной вакцины против этой болезни используют
20 метод получения вируса — выращивание его на перевиваемых однослойных клеточных культурах, на которых можно не только обнаружить вирус, но и определить прп помощи титрации его количество. Выра25 щивают в термостате при 26 С однослойные перевиваемые клеточные культуры рыб (EPC) на минимальной среде Игла (МЕ,Ч). В эту культуру вносят вирус, выделенный от карпов, больных острой форЗ0 мой краснухи, после чего культуры инку649380
Способ Из расчета введения на 1 кг
Впд и возраст рыб
25 в брюшную живой полость массы
Карп ремонт, производители
0,3 с кормом корма (1000
Карп сеголетки, годовики, 2-х лет
50 бируют в тормостате при 26 С до появления дегенерации клеток. После появления цитопатогенного действия на клетках (ЦПД) сосуд с зараженными культурами замораживают при — 20 С. Через 2 — 3 дня размораживают и в вируссодержащей культуральной жидкости определяют титр вируса. Если он превышает 10 ТЦДзв, то жидкость используют для приготовления вакцины. 1х данной вируссодержащей жи1кости, взятой в количестве 40% к общему объему, добавляют 20 вес. % 6%-ной оуспензии гидроокиси алюминия для адсорбции вируса, после чего вносят 0,5 вес. формалина (продажного), чтобы инактивировать вирусы, и с целью, депонирования добавляют 20 вес. стерильного глицерина, разбавленного 19,5 вес, % стерильного солевого раствора с рН 7,2 — 7,3.
Пример получения вакцины. Для при готовления 1 л вакцины выращивают однослойные перевиваемые клеточные культуры ЕРС в больших матрацах на минимальной среде Игла (МЕМ) в термостате при 26 С.
После образования монослоя питательную среду из матрацев удаляют и вносят музейный штамм вируса (ЧГТ-82) из расчета 5 ил на каждый матрац. Просматривают их ежедневно под малым увеличением микроскопа. После появления цитопатогенного действия с активностью (75% пораженных клеток) .матрацы с культурами замораживают в холодильнике при — 20 С, где и сохраняют. Выход вируссодержащей культуральной жидкости 150 — 200 лл с каждого матраца. Проверяют титр вируса в вируссодержащей жидкости и, если он !
Формула изобретения
Вакцина для профилактики и лечения краснухи у рыб, включающая вируссодержащую культуральную жидкость и формалин, отличающаяся тем, что, с целью повышения терапевтического эффекта, она дополнительно содержит гидроокись алюминия, глицерин и солевой раствор Хенкса, при этом использована культуральная жидкость, содержащая рабдовирус ГТ-82 с титром от 10 до 10 ТЦДзо, а компоненты берут в следующем соотношении, вес. %: превышает 10 ТЦД O, данную жидкость используют для приготовления вакцины.
К 400 мл вируссодержащей культуральной жидкости добавляют 200 лл
5 6% -ной суспензии гидроокиси алюминия и адсорбируют в течение 24 ч при комнатной температуре с периодическим встряхиванием. Через 24 ч добавляют 5 л л продажного формалина и опять инактивируют
10 при комнатной температуре в течение 24 ч с периодическим встряхиванием, после чего в формалинизированную вирусную су спензию вносят 200 мл глицерина, смешанного с 195 л л солевого раствора, и выдер15 живают при комнатной температуре с периодическим встряхиванием в течение
10 суток. После этого вакцина считается готовой.
Данная вакцина проверяется на сте20 рильность, иммуногенность и безвредность для здоровых карпов.
Пример использования вакцины. Ориентировочная доза введения вакцины в брюшную полость карпам старших воз25 растных групп 1 лл на 1 кг живой массы.
Годовикам карпа вакцину скармливают вместе с кормом из расчета 0,4 л на 1 кг корма.
При введении данной вакцины в организм карпов создается иммунитет, который предохраняет их от заражения вирусами, вызывающими краснуху. Следовательно, в хозяйствах не будет возникать эпизоотии этой болезни, сопровождающиеся заболеванием и гибелью рыб.
Допустимые пределы вакцины показаны в таблице
ОптиМинималь- „Максимальмальная, ная, ил ная, ил,ил
Вируссодержащая культуральная жидкость, содержащая рабдовирус ГТ-82 с титром от
10з до 10 ТЦД о 10 — 50
Гидроокись алюминия 10 — 25
Формалин 0,3 — 0,5
Глицерин 10 — 25
Солевой раствор Хенкса Остальное
Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:
1. Гончаров Г. Д. Противовирусная вакцина для профилактики краснухи карпов. — Доклады АН СССР, «Новая серия», т. 78, № 3, 1951, с. 56 — 57.