Штамм возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника

Штамм возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 11>649387

Сова Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 21.07.77 (21) 2509660/28-15 с присоединением заяак и №вЂ” (23) Пр иоритет— (43) Опубликовано 28.02,79. Бюллетень № 8 (45) Дата опубликования описания 26.03.79 (51) М.Кл.- А 01 N 15/00

С 12 К 1/00

Государственный комитет по делам изобретений и открытий (53) УДК 632.93:632.4 (088.8) (72) Авторы изобретения

С. Ф. Сидорова, А. В. Хотянович, P. М. Ильина, Н. А. Бексеева, H. В. Быкова и В. И. Попов

Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии и Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (71) Заявитель (54) ШТАММ ВОЗБУДИТЕЛЯ ВЕРТИЦИЛЛЕЗНОГО

ВИЛТА ХЛОПЧАТНИКА VERTICILLIUM DAHLIAE

KLEB 214 (ВИЗР) Изобретение относится к области защиты растений и представляет собой штамм гриба. Хранится в коллекции чистых культур лаборатории почвенных патогенов и вилта хлопчатника (ВИЗР). Штамм пред- 5 назначен для производства препарата «Вертокс» методом глубинного культивирования.

Препарат используется для создания искусственного .инфекционного фона при селекции хлопчатника на вилтоустойчивость. 10

Известно получение инфекционного материала Verticillium dahliae поверхностным способом на стерильных зернах овса и других твердых субстратах. При этом используют природные популяции патогена, выделенные из зараженных вилтом растений хлопчатника, без учета их расового состава (1).

Известен также полупро мышленный способ глубинного получения препарата 20 микросклероциев возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника «Вертокс» (2).

Однако этот способ может быть успешно осуществлен лишь при наличии штамма, обладающего определенными технологичес- 25 кими свойствами: способностью роста и интенсивного образования микросклероциев на жидких питательных средах в условиях глубинной культуры и стабильностью этих признаков в процессе производства целево- з0 го продукта (мпкросклероциев). В свою очередь, препарат микросклероциев, полученный на основе такого штамма, должен сохранять вирулентность при высушпвакии и последующем хранении. Всеми перечисленными свойствами известные штаммы нс обладают.

Производственно ценными признаками предлагаемого штамма V. dahliae К1еЬ являются стабильность его по морфолого-куль туральным свойствам, хороший рост в условиях глубинкой культуры с преимущественным и быстрым образованием микросклероциев в качестве целевого продукта.

Штамм предлагается считать эталоном при производстве препарата микросклероциев глубинным методом для создания искусственных инфекционных фонов при селекции хлопчатника на утойчивость к вертициллезному вилту.

Штамм выделен из пораженных растений хлопчатника сортов группы «Ташкент», собранных в Узбекской CCP.

Из коллекции штаммов, выделенных из больных растений хлопчатника (126 штаммов), методом искусственного заражения были отобраны штаммы, наиболее вирулентные к районированным сортам группы

«Ташкент». Затем посредством моноспорового рассева из штаммов, о т л и ч а ю щ и х649387

Зо

3J

65 с я высокой вирулентностью, был получен ряд клонов микросклероциального типа.

Каждый из этих клонов, в свою очередь, также был оценен по вирулентности.

В результате технологической проверки из их числа был отобран производственный штамм V. dahliae КlеЬ 214, обладающий способностью к преимущественному и стабильному образованию микросклероциев на регламентной среде в глубинной культуре.

Штамм хранится в коллекции чистых культур лаборатории почвенных патогенов и вилта хлопчатника Всесоюзного научноисследовательского института защиты растений.

Морфолого-культуральные свойства.

Конидиеносцы мутовчато-разветвленные, содержат 1 — 3 мутовки, состоящие из 2 — 5 фиалид с заостренными вершинами, иногда прямые по типу Cephalosporium. Конидии продолговато-эллипсоидальные, 3,5 — 8,0 >< . 2 — 4 якл, бесцветные, собраны на концах фиалид в слизистые головки. Мицелий септированный, бесцветный, с возрастом на нем образуются темно-окрашенные (меланизированные) покоящиеся структуры — микросклероции.

Штамм способен расти на общепринятых для грибов средах: агаризованной среде Чапека, сусло-агаре, картофельно-глюкозном агаре. На агаризованной среде Чапека образует округлые, плотные, с ровным краем колонии, плоские или со слегка поднимающимся центром.

Воздушный мицелий сероватый, слабо развитый. На 7 — 10 сутки роста при 24—

26 С колонии приобретают черную окраску вследствие образования сплошного слоя микросклероциев. Окраска обратной стороны колоний черная. Пигмент в среду не выделяется. Штамм отличается интенсивным и быстрым образованием микросклероциев.

Поверхность колонии угольно-черная, сухая; складчатость слабо выражена.

В глубинной культуре на регламентной среде — 2о/о мезга картофельная сухая (крахмал 1 — 2о/о ) 0 Зо/о — ХаХОз 0 1 о/о

КН РО4 по 0,05 /о КС! и MgSO4 7Н О гриб формирует все характерные для него морфологические структуры: конидии, мутовчатые или моноподиальные конидиеносцы, микросклероции. Растет в виде однородного пушистого мицелия, вначале бесцветного, а с возрастом, по мере образования микросклероциев, приобретающего черную окраску. Микросклероции начинают формироваться через 60 — 72 ч после начала роста гриба и составляют к концу технологического цикла (96 †1 ч) до 50 /о общей биомассы гриба (воздушно-сухой вес).

Физиологические свойства.

Из источников углерода усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, фруктозу, галактозу, арабинозу, лактозу, маннозу, хуже— рамнозу, ксилозу; скудный рост отмечается на средах с сорбозой, сорбитом, маннитом, инозитом. Гидролизует крахмал, целлобиозу. Из источников азота использует нитраты, аммонийные соли (при поддержании рН среды не ниже 6,0) и различные органические соединения азота.

Вирулентные свойства.

Штамм обладает повышенной вирулентностью как к старым восприимчивым сортам средневолокнистого хлопчатника типа

108-ф, так и к новым возделываемым сорт а м группы «Т ашкент».

Пример. Исходный штамм Verticillium

dahliae КlеЬ 214 (ВИЗР) выращивают в пробирках на агаризованной среде Чапека

7 †.10 суток и используют для инокуляции посевных колб со 100 ял питательной среды, содержащей 2 /о мезги картофельной сухой (крахмал 1 — 2 /,), 0,3 /, NaNO3, О,lо/, КН РО4 и по 0,05о/о КС1 и MgSO4 7Н О, рН 6,5 — 6,8. Посевной материал выращивают 48 ч на качалке (18 — 220 обl,яин) при

24 — 26 С. При необходимости получения инокулома в больших количествах посевной материал выращивают на аналогичной среде в бутылях емкостью 5 л. Производственное выращивание гриба ведут в ферментерах емкостью 0,1 — 3 яз с рабочей средой—

2 /о мезга картофельная (крахмал 1 — 2%), 0,3/о ХаХОз, 0,1% КН РО4, по 0,05/о КС1 и MgSO< 7Н О. Культивируют при 24—

26 С с непрерывным перемешиванием и аэрацией в течение 96 †1 ч. Образование микросклероциев начинается на 72 ч роста культуры.

Биомассу отделяют одним из известных способов и сушат при температуре не выше

50 С. Выход сухого препарата 15 — 16 кг с 1 лз питательной среды. В 1 г стандартного препарата содержится 8 — 10 млн. инфекционных единиц (микросклероциев).

Препарат сохраняет инфекционность не менее 6 месяцев.

Полученный на основе предлагаемого штамма 214 препарат «Вертокс» испытывался в различных научно-исследовательских институтах Средней Азии для создания искусственных инфекционных фонов при выведении вилтоустойчивых сортов хлопчатника. При внесении препарата

«Вертокс» в количестве 30 — 40 кг/га перед посевом поражение вилтом сортов группы

«Ташкент-1» .достигало 73 — 78 о/о.

Формула изобретения

Штамм возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника Verticillium dahliae КlеЬ

214 (ВИЗР) хранится в коллекции чистых культур лаборатории почвенных патогенов и вилта хлопчатника (ВИЗР), предназначен для производства препарата «Вертокс» методом глубинного культивирования.

Используется для создания искусственного инфекционного фона при селекции хлопчатника на вилтоустойчивость.

649387

Составитель М. Мирзаев

Техред С. Антипенко

Редактор M. Дмитриева

Корректор С. Фт".н

Заказ 57/178 Изд. ¹ 175 Тираж 968 Подписно ..

НПО Государств нного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, К-35, .Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

Морфолого "культура льные свойства.

Конидиеносцы преимущественно мутовчато-разветвленные, содержат 1 — 3 мутовки, состоящие из 2 — 5 фиалид с заостренными вершинами. Конидии продолговатоэллипсоидальные, 3,5 — 8,0 X 2 — 4 мкм, бесцветные, собраны на концах фиалид в головки. Характерно наличие меланизированных покоящихся структур — микросклероциев. На агаризованной среде Чапека (рН

6,0 — 6,5) образует округлые, плотные, с ровным краем колонии, плоские или со слегка поднимающимся центром. Воздушный мицелий сероватый, слабо развитый, колонии приобретают черную окраску вследствие образования сплошного слоя микросклероциев. Штамм отличается интенсивным и быстрым образованием микросклероциев.

В глубинной культуре на регламентной среде — мезга картофельная сухая — 2% (крахмал 1 — 2%), NaNOg,— 0,3%, КНзРО4—

0,1%, КС1 и MgSO4 - 7Н О по 0,05% — гриб образует все характерные для него морфо- 25 логические структуры: конидии, мутовчатые или моноподиальные конидиеносцы, микросклероции. Микросклероции начинают формироваться через 60 — 72 ч роста гриба и к концу технологического цикла, составляют 30 до 50% общей биомассы гриба (воздушносухой вес).

Физиологические свойства.

Из источников углерода усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, фруктозу, галактозу, арабинозу, лактозу, маннозу, целлобиозу, крахмал, хуже — рамнозу, ксилозу; скудный рост отмечается на средах с сорбозой, сорбитом, маннитом, инозитом. Из источников азота использует нитраты, аммонийные соли (при поддержании рН среды не ниже 6,0) и различные органические соединения азота.

Вирулентные свойства.

Обладает повышенной вирулентностью как к старым восприимчивым сортам средневолокнистого хлопчатника типа 108-ф, так и к возделываемым сортам группы «Ташкент», т. е, относится к расе 2.

Стабилен по морфологическим и вирулентным свойствам в условиях глубинной культуры. Выход сухого препарата микросклероциев составляет 15 — 16 кг с 1 л1з питательной среды. Титр препарата 8 — 10д1лн, микросклероциев на 1 г.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Соловьева А, И. Вредители и болсзн.. хлопчатника и других культур и борьба с ними. В сб. научных работ Союз НИХИ.

Ташкент, 1951.

2. Авторское свидетельство СССР № 430154, кл. С 12 К 1/06, 1973.