Способ обработки спермы кроликов

Способ обработки спермы кроликов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е ()649425

ИЗОБРЕТЕ Н И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Саветскнх

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-рау†(22) Заявлено 13.01.77 (21) 2439562/30-15 (51).11 Ix,-I з -А 61 9 7/02 с присоединением заявки М— (23) Приоритет—

Гооударстеенный комитет (43) Опубликовано 28.02.79. Бюллетень ¹ 8 (53) УДК 591.463.1 (088,8) по делам изобретений н открытий (45) Дата опубликования описания 11.03.79 (72) Авторы изобретения

В. С. Андреева и В. Н. Помытк0 (71) Заявитель Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ КРОЛИКОВ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к искусственному осеменению кроликов.

Известные способы не дали устойчивых результатов по активности и оплодотворяющей способности спермы пря практического применения ее при искусственном осеменении.

Известный способ получения активной заморо>кенно-оттаянной спермы кролика состоит из следующих операций: приготовление разбавителя, взятие спермы у самца, первичное разбавление спермы, адаптация, вторичное разбавление спермы, эквилибрация, расфасовка спермы, замораживание спермы, оттаивание спермы, определение активности у спермы, определение оплодотворяющей способности за мороженно-оттаянной спермы.

Известен способ получения активной заморо>кенно-аттаянной спермы кролика, состоящий из вышеперечисленных операций и заключающийся в разбавлении спермы

1: 5 разбавителем, состоящим из следующих компонентов: 20 .чл куриного желтка;

1,16 г цитрата натрия; 2,4 г декстрозы;

0,7496 г гликокола; 0,168 г бикарбоната натрия; 0,32 г хлористого калия; 0,01 г лимонной кислоты и до 100 лл дистиллированной воды, хранение ее при температуре 5 С в течение 3 — 4 ч; во вторичном разбавлснии в соотношении 1: 1 тем же разбавителем, содержащем 16о, глицерина, в применении периода эквплибрации в течение 5 ч, в расфасовывании спермы в стеклянные флаконы и замораживании в изопропиловом спирте с сухим льдом со

10 следующей скоростью охран.дения: до — 40 С HHTr градусов H минут> — 52 до — 70 С восемь градусов в мпнуT .. в хранении образцов в . олодильнике

НрН температуре — 90 С в течение 24 ч и оттаивании в водяной бане при температуре +5 С.

Однако, этот способ замораживания не дал устойчивых результатов по оплодотворяемости (из 22 осемененных cBMQK HI>Hнесли пометы всего 3) и ма.".оприемлем для практики из-за трудоемкости процессг заморажигания, который обусловливается cH»»кивании добавлением сухого льда в изопропиловый спирт.

Существующий способ пол, =-ния а ктивной спермы кролика с применением в качестве криофплактического сре. ства 12."„ дп,.етилсульфоксида в сочетанпии с 6,, 649425

После расфасовки спермы концы трубочек заливают растопленным парафином.

Замораживание спермы кролика производят быстрым способом в пара«азота в течение 3 лгин по одной минуте на расстоянии 16, 8 и 1 с,г! над уровнем жидкого азота. После чего сперму погружают в жидкий азот на 1 — 2 лгин и переносят в сосуд Дьюара с жидким азотом на «ранение при температуре — 196 С. Такой способ замораживания способствует равномерному и быстрому снижению температуры со скоростью 50 С (в первую минуту), что лучше сохраняет активность спермы кролика.

Оттаивание замороженной спермы в

«соломинках» производят в термостате при температуре 38 С. Полная активность у спермы кролика при оттаивании в этих условиях выявляется через 25 лгин.

Осеменение самок производят в течение не более часа с начала размораживания спермы. Осеменяют кроликов спермой с активностью не ниже 0,3. При этом доза оттаянной спермы — 1,0 лгл; количество подвижных сперматозоидов в дозе — от

4,5 лглн и более, Замороженная сперма указанным способом сохраняет оплодотворящую способность.

Пример. У свежеполученной спермы определяют активность, густоту, берут пробу на определение концентрации и резистентности.

Определяют объем и разбавляют в первый раз изотоническим разбавителем гликоколом лимонно-кислым в соотношении 1: 3, приливая его двукратно с пятиминутным промежутком в первый раз 1: 1, через

5 лгин добавляют остальную часть.

У разбавленной спермы определяют активность, затем наливают во флаконы изпод пенициллина с этикеткой и, предварительно обернув флаконы ватой толщиной в

1 с.!г, в полиэтиленовом мешочке ставят в холодильник при температуре 5 — 8 С на период адаптации в течение 1,5 ч. Затем спсрму разоавляют вторично охлажденным при той же температуре гипертоническим разбавителем с диметилсульфоксидом в сочетя!!ии с глицерином в соотношении 1: 0,5 к общему ооъему спермы с разбавителем.

Перед разбявлением разбавитель с криофилактичсским средством тщательно перемешивают, набирают в нужном объеме в охлажденную пипетку и осторо кно по стенке флакона медленно приливают к сперме. Перед и после разбавления сперму не встряхивают и не перемешивают с разбавителем до окончания периода эквилибрации, который длится 3 ч. После окончания периода эквилибрации сперму расфасовывают при помощи шприца из полиэтилена с иглой для инъекций в полиэтиленовые трубочки,— «соломинки» размером:

l5

55 длина 26 с.гг, диаметр 3 »ut, объем 0,5 л!.г.

Перед расфасовкой шприц и полиэтиленовые трубки охлаждают в . олодилышке при температуре 5 С. Охлажденный шприц обертывают горолоновым изоляционным слоем толщиной нс менее 1 слн Перед расфасовкой шприц предварительно ополаскигают о«лажденным гипертоническим раствором с криофплактическим средством.

Сперму разливают в трубки по способу

c()coLLIàþ:.öt!«ñÿ сосудов, поместив и«в кассету. Трубки закупоривают расплавленным парафином.

Сперму замораживают быстрым способом в пара«азота в течение 3 лгин по одной минуте на расстоянии 16, 8 и 1 слг над уровнем жидкого азота. Затем сперму опускают в жидкий азот и через минуту переносят на «ранение в сосуд Дюара с жидки«! азотом при температуре †1 С.

Сперму «p,"-!ням в течение месяца и более.

От.."анванпе замороженной спермы производят в термостате при температуре 38 С.

Полная активность спермы кроликов при оттаивании з эти«условиях выявляется через 25 л!ин.

Осеменение оттаянной спермы производят в течение часа с начала размораживан!!я. Осеменяют кроликов спермой с актнвност:;!о 0,3 — 0,5; доза разбавленной спермы олжна составлять 1.0 л!и, количесп юэ подвижны«спермиев в дозе 10 л!лн. и выше.

Использование предлагаемого способа замораживания спермы обеспечивает по сравнен:цо с существуюп!их!и способами следующие преимущества; со«раняет активность у замороженнооттяянной спермы до 0.4 при средней активности 0.25: дает возможность неограниченно использовать сперму ценных производителей; позволяет постоянно использовать самца с равномерно!! нягр .з! .о (r!p» хране!!!!!! его спермы в замороженном состоянии).

Формула изобретения

Способ обработки спермы кроликов, включающий двукратное разбавление спермы, адаптацию. эквилибрацию, «ранение в замороженном виде и оттаивание, о т л ич а о гц и и с я тем, что, с целью со«ранения высокой биологической активности спермнез. первое разбавление осуществля-! от в соотношении 1: 3, а вторичное разбавление — гипертоническим разбавителем

1: 0,5. адаптацн:о проводят в течение 1,5—

2 ч, эквилибрируют в течение 3 — 4 ч, зяморажи!в: о-, сггерму в паря«:кидкого азота в течепис 3,л!ин: !!о одной минуте ня уровнях 16,8 и 1 сл! над повер«ностью жидкого азота, и о-.таивание проводят при температуре 38 С в течение 25 — 30 лгин,