Способ получения гамма-глобулина

Способ получения гамма-глобулина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

f;a

gпфдамт,,:;.-ОП ИСАЙ И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ пц649436

Союз Ооаетских

Соииалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ,фФ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 01.03.77 (21) 2457507 28-13 с прпсосдинснисм заявки ¹ (23) Приоритет (43) Опубликовано 28.02.79. Б1оллетень ¹ 8 (45) Дата опубликования описания 28.02.79 (51) М. Кл-

А 61К 37/06

С 07G 7/02

Государстаеииый комитат (53) УДК 615.45:543.

544 6 547 .962.4 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

М. А. Тельнова, Т. С. Котова, С. В. Беляев и В. М. Степанов (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАММА-ГЛОБУЛИНА

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается получения гамма-глобулина, который применяется в медицине и ветеринарии для профилактических, диагностических и лечебных целей.

Известен способ получения гамма-глобулин путем адсорбции сырья, содержащего фермент, на ионообменном материале— аминосилохроме при рН 7,0 — 8,0 с последующей десорбцией солевым буфером (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокого качества продукта.

Целью изобретения является повышение качества продукта и расширение сырьевой базы.

Эта цель достигается тем, что в качестве источника сырья используют плазму и сыворотку крови, десорбцию проводят ацетатным буфером при рН 4,0 — 5,0 в статических условиях и элюат обрабатывают сульфатом натрия или аммония.

Способ осуществляют следующим образом.

Материалу на основе двуокиси кремния — силохрому придаются свойства анионообменника путем обработки /-аминопропилтриэтоксисиланом, далее его уравновешивают 0,01 М фосфатным буфером рН 7,5.

Плазму или обессоленную сыворотку вводят в контакт с влажным адсорбентом, что обеспечивает в данин|к условиях практически полную сорбцшо гамма-глобулина.

Для десорбции гамма-глобулина с аминосилохромом используют буферные растворы, оптимальным является применение буфера с рН ниже изоэлсктрической точки гаммаглобулина. Целесоооразно применение

0,1 М ацетатного буф ра с рН 4,5. Процесс проводят в статических условиях, операцию

1п отделения растворов от сорбента осуществляют простой дскантацией. Последующее осажден пе гамма-глобулиновой фракции сульфатом натрия пли аммония позволяет сконцентрировать и дополнительно очистить гамма-глобулпн. Из полученного таким образом чистого препарата гамма-глобулина, содержащего соли, последние можно удалить известным способом — диализом через полупроницаемую мембрану, после чсго, если это необходимо, препарат гамма-глобулина высушивают лиофильно.

Пример 1. В стакан емкостью 50 мл к 2 г сухого аминосилохрома 0 — 80 (для его уравновешивания) добавляют 40 мл

0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. Буферный раствор через 5 мпн удаляют декантацией, на влажную поверхность анионообменника наносят 0,7 мл белковой фракции плацентарной сыворотки крови человека и перемешивают 15 мин прп 20 С. Сорбент

649436

Формула изобретения

Способ получения гамма-глобулина путем адсорбции сырья, содержащего фермент, на ионообменном материале — аминосилохромс при рН 7,0 — 8,0 с последующей десорбцией соленым буфером, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения качества продукта и расширения сырьевой базы, в качестве источника сырья используют плазму и сыворотку крови, десорбцию проводят ацетатным буфером при рН 4,0 — 5,0 в статических условиях и элюат обрабатывают сульфатом натрия или аммония.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

No 551339, кл. С 07Ci 7/02, 1976.

Редактор М. Дмитриева Техред С. Антипенко Корректор T. Добровольская

Изд. М 196

Заказ 83/6

Тираж 680

Подписное

Сапунова, 2

Типография, пр. промывают многократно (10X10 мл) исходным буфером, далее десорбируют гамма-глобулиновую фракцию 50 — 60 мл ацетатного буфера рН 4,5 (5X 10 мл). После этого аминосилохром промывают 60 мл (6X10 мл) 1 М НС1 до исчезновения поглощения при 280 нм в промывных водах деионизированной водой до рН 5,6. К 50 мл гамма-глобулиновой фракции с оптической плотностью при 280 нм, равной 0,120 опт. ед./мл, добавляют 45 мл 35,8%-ного рас-.вора сульфата натрия до конечной концентрации 17 /о. После 1,5 ч перемешивания осадок отделяют центрифугированием, супернатант (47 мл, 0,075 опт. ед./мл) отбрасывают, а осадок растворяют в 1 мл

0,01 М фосфатного буфера, рН 7,5. При этом получают солевой раствор гамма-глобулина. Общая продолжительность выделения гамма-глобулина составляет 3 ч. Далее раствор диализуют известным методом против того же буфера и получают 1 мл гамма-глобулина с 2,22 опт. ед./мл, что составляет 37о/о к общему белку, содержащемуся в гамма-глобулиновой фракции. Полученный препарат не содержит примесей по данным диск-электрофореза в полиакриламидном геле и иммуноэлектрофореза.

Пример 2. В стакане емкостью 300 мл к 50 r сухого аминосилохрома добавляют

1 л 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. Буферный раствор затем удаляют декантацией и на поверхность анионообменника наносят 50 мл лошадиной противостолбнячной плазмы крови. После перемешивания в течение 20 — 30 мин при комнатной температуре сорбент промывают многократно 3 л (10X300 мл) 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5 и десорбируют гамма-глобулиновую фракции 4 л (16X250 мл) 1 М ацетатного буфера рН 4,5. Аминосилохром промыва1от после этого 3 л 1 М НС1 до исчезновения поглощения при 280 нм в элюате и деионизированной водой до рН 5,6.

К 2 л гамма-глобулиновой фракции прибавляют 600 r сульфата аммония до

30%-ного насыщения. После 2 ч перемсшивания осадок отделяют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 15 мин. Супернатант — 1 л 985 мл (сумма опт. ед. 440) отбрасывают, а осадок растворяют в 50 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5.

При этом получают солевой раствор гаммаглобулина. Длительность процесса выделения гамма-глобулина составляет 5 — 6 ч.

Затем проводят диализ известным методом против того же буфера и получают 50 мл раствора гамма-глобулина с 8.0 опт. ед./мл.

Выход гамма-глобулина составляет 47% к общему белку, содержащемуся в гаммаглобулиновой фракции. Полученный препа5

40 рат не содержит примесей по данным дискэлектрофореза 11 иммуноэлектрофореза.

П р и м с р 3. В стакане емкостью 300 мл к 50 r сухого аминосилохрома добавляют

1 л 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. Буферный раствор декантируют и на поверхность анионообменника наносят 80 мл лошадиной противостолбнячной сыворотки крови. После перемешивания в течение

30 мип при комнатной температуре сорбент промывают 4,5 л (15ХЗОО мл) 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5 и гамма-глобулиновую фракцию десорбируют 6 л (20X

Х300 мл) 0,1 М ацетатного буфера рН 4,5.

Затем аминосилохром промывают 5 л (12X

Х400 мл) 1Н НС1 до исчезновения поглощения при 280 нм в промывных водах и деионизированной водой рН 5,6. К 5 мл гамма-глобулиновой фракции добавляют

1,5 кг сульфата аммония до 30 /о-ного насыщения. После 2 ч перемешивания осадок отделяют центрифугированием при

6000 об/мин в течение 15 мин. Супернатант — 4 л 980 мл (сумма опт. ед. 950) отбрасывают, а осадок растворяют в 80 мл

0,01 М фосфатного буфера рН 7,5, получая при этом солевой раствор гамма-глобулина.

Общая продолжительность процесса выделения гамма-глобулина составляет 6 ч.

Далее проводят диализ известным методом против того жс буфера и получают 80 мл раствора гамма-глобулина с 9,6 опт. ед/мл, что составляет 52% к общему белку, содержащемуся в гамма-глобулиновой фракции.

Полученный препарат гамма-глобулина не содержит примесей по данным диск-электрофореза и иммуноэлектрофореза.

Предлагаемый способ позволяет получать гамма-глобулин из природного сырья плазмы и сыворотки крови, сокращает длительность процесса и обеспечивает высокое качество целевого продукта.