Штамм 129-продуцент гуанилрибонуклеазы

Штамм 129-продуцент гуанилрибонуклеазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

K АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<> 651027 (6l) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 120876(21) 2399771/28-13 с присоединением заявки И (23) Приоритет

Опубликовано 010379,бюллетень K 9

Дата опубликования описания:070379 (5l) N. Кл.

С 12 К 1/02

С 12 I3 13/10 (осуларстаенмый комитет

ccc(оо делам изобретений и открытий (Я) УДК 663. 1 (088.8) (72) Авторы изобретения

T.Â. Иахова, Г.И. Хомякова, С.A. Коновалов и P.Â. Зуева

P3) заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский биотехническйй институт (54) ИТМй Actinomyces aureoverticiIIatus

129-ПРОДУЦЕНТ ГУАНИЛРИБОНУКЛЕАЗИ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма актиномицета, продуцирующего гуанилрибоиуклеазу, используемого в пище- Ь вой проььыленности для понижения содержания нуклеиновых кислот прн производстве пищевого белка.

Известен штамм актиномицета, продуцирующего внеклеточную гуанилрибо- Ж нуклеазу (гуанил-РНК-азу) Actinomyсев aureoverticiIIatus 1306 (1j.

Этот штамм характеризуется уровнем биосинтеза внеклеточной гуанилрибонуклеазы при культивировании глубин- lS ным способом в пределах 500-600 сп. ед/мл культуральной жидкости, отделенной от мицелия.

Исходным штаммом является штамм

Actinomyces aureoverticiIIatus -38, Ж продуцирующий фермент при глубинном культивировании (2).

Недостатком указанного штамма является его низкая активность, которая составляет 10-13 тыс. ед/мл филь-25 трата культуральной жидкости.

Цель изобретения — получение нового штамма актиномицета aureoverticiIIatus, отвечающего требованиям ферментного производства, т.е. обладаю- З0

I щего повышенной способностью к биосинтезу внеклеточной гуанил — РНК— азы.

Итамм Actinomyces aureoverticiIIatus-129 nony eH a результате селекции с применением мутагенного фактора химической природы н хранится в коллекции ВНИИГенетики и селекции промьиаленных микроорганизмов, Р 373.

Способ получения активного штамма Actinomyces aureoverticiIIatus

129 заключается в подготовке материала для селекционной работы, в выделении моноконидиальных культур, изучении их естественной изменчивости по признаку образования фермента и отборе лучших штаммов, служащих затем исходными культурами для проведения последующих экспериментов.

Дальнейший этап-применение метода воздействия химического мутагена нитрозометилмочевнны на конидии отобранной моноконидиальной культуры из рассева исходного штамма Actinomyces

aureoverticiIIatus 38, выделении большого количества вариантов н рассеве лучшего мутанта.

Таким образом штамм Ас11потусее

aureoverticiIIatus 129 выделен после обработки кониднй исходного штам3 651027 ма нитроэометилмочевиной в концентрации 1% в течение 2 ч. Полученный мутант Actinomyces aureovert.iciIIatus 129 проверен по ферментативной активности при хранении и пересевах на агаризированной питательной среде следующего состава (Ъ): мука пшеничная, гидролиэованная а -амилазой, 3, растворимый крахмал, гидролизованный с -амилазой — 4, сульфат аммония - 0,6, калий фосфорнокислый одноэамещенный — 0,05, мел — 0,6, 10 калий хлористый — 0,25; агар-агар—

2,0.

Культивирование штамма 129 в глубинных условиях проводили на жидкой питательной среде того же состава, 16 только беэ агара.

Рост штамма Actinomyces aureoverticiIIatus,129 на указанно. среде в условиях глубинного культивирования на качалке при 180 об/мин и

28-30 С очень интенсивный, штамм о имеет вид густой кашеабраэной массы.

Максимальное образование фермента в культуральной жидкости наблюдается после 72 ч культивирования продуцента. Общая РНК-азная активность, определяемая спектрофотометрическим методом по измерению поглощения кислоторастворимых продуктов распада

РНК (6 мг/мл), составляют 25-30 тыс. ед/мл фильтрата культуральной жидкости, при этом активность гуанил-РНКазы после прогрева в кислой среде составляет 22,50 - 27,60 тыс. ед/мл.

Показатели активности исходного штамма не превышают 10-13 тыс. ед/мл. 36

Полученный штамм имеет следующую характеристику.

Морфологические признаки.

Твердая среда, содержащая осахарен- 4 ные о(-амилазой пшеничную муку и

40 крахмал, соли. Мицелий имеет вид ,счень тонких, разветвленных гиф. Стенки клеток мицелия прямые. Иирииа клеток мицелия варьирует от 0,71 до

0,93 мкм. Спороносцы с примитивными 46 спиралями с 0 5 - 1 завитком, длинные или короткие, расположены моноподиально. Споры продолговатые,овальные, с гладкой оболочкой.

Культурально-физиологические 50 признаки.

При выращивании на такой среде колонии мутантового штамма Actinomyces

aureoverticiIIatus 129 круглые, края волнистые, с радиальной складчатос- 58 тью кремового цвета, s центральной чаати слегка приподнятые над субстратом со скудным воздушным мицелием розового цвета. Диаметр гигантской колонии на 10 сутки роста 10-12 мм .

Нижняя поверхность колонии гладкая, красного цвета, среда не буреет, .пигмент,в среду не выделяется, на агаризированной среде Чапека с 3% сахароэы колонии круглые, оранжевого цвета, край колонии волнистый, с радиально-поперечной складчатостью, воздушный мицелий слабо развит, светло-морковного цвета, диаметр колонии 8 мм, На крахмал-аммиачной среде колонии круглые„ малинового цвета, поверхность бархатистая, диаметр колонии 6-8 мм, среда не окрашена. На

МПА образует небольшие колонии кремового цвета диаметром б мм с радиальной складчатостью, воздушный мицелий скудный,.неокрашенный, не буреет. На сусле-агаре образует маленькие колонии диаметром 5 мм, поверхность бугристая, воздушный мицелий слабо развит, в центре розового цвета,по краям - кремового. На картофельно-пептонном агаре образует колонии оранжевого цвета дкаме-ром 12 мм, воздушный мицелий розового цвета, край волнистый, поверхность бархатистая, вокруг колонии образуется бурое кольцо. На пептонно-кукурузном агаре растет в виде небольших колоний (7 мм) бежевокремового цвета с радиальной складчатостью, скудный воздушный мицелий, среда не буреет. На ломтике моркови рост отсутствует; на ломтике картоФеля рост очень слабый; мясо-пептонную желатину разжижает в верхнем слое.

Молоко не свертывает и не пептонизирует. Нитраты не восстанавливает.

Отношение к углеводам: крахмал гидролизует интенсивно. Глюкозу и фруктозу гидролизует с образованием щелочи, остальные сахара — с образованием кислоты.

Предлагаемый штамм Actinomyces

aureovert.iciIIatus 129 позволяет получить внеклеточную РНК-азу микробного происхождения, используемую в пищевой промышленности для улучшения вкусовых достоинств пищевого белка. При этом активность штамма Actinomyces aureoverticiIIatus 129, продуцирующего внеклеточную гуанил-РНКазу, составляет 25-30 тыс. ед/мл, что в 2-3 раза выше, чем у исходного.

Формула изобретения

Итамм Actinomyces aureoverticiIIatus 129 — продуцент гуанилрибонуклеазы. Хранится в коллекции ВНИИГенетики и селекции промышленных микроорганизмов, 9 373.

Морфологические признаки.

Мицелий на твердой питательной среде, содержащей осахаренные О(.-амилазой пшеничную муку и крахмал, соли, имеет вид тонких, разветвленных гиф. Стенки клеток мицелия прямые, шириной

0.,71-0,93 мкм. Спороносцы с примитивными спиралями с 0,5 — 1 завитком, длинные или короткие расположены моноподиально. Споры продолговатые, овальные с гладкой оболочкой.

Культурально-физиологические признаки.

651027

Составитель М. Ларина

Редактор Б. Федотов Техред И.Асталош КорректорО. Билак

Тираж 527 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 736/27 филиал ППП Патент, r. ужгород, ул. Проектная, 4

На твердой питательной среде, состоящей из осахаренной . -амилазой пшеничной муки и крахмала, а также соли, колонии круглые, кремовогo цвета, край волнистый, с радиальной складчатостью. Мицелий воздушный, развит слабо, розового цвета„

Диаметр гигантской колонии на десятые сутки роста 10 — 12 мм. Нижняя поверхность колонии гладкая, красного цвета. Среда нз буреет, пигмент в среду не выделяется.

Агаризированная среда Чапека с 3Ъ сахарозы.

Колонии круглые, оранжевого цвета, край колонии волнистый,с радпальпопоперечной складчатостью. Воздушный мицелий слабо развит, светло- lopKGBного цвета, диаметр колонии 8 мм.

Крахмало-аммиачная среда.

Колонии круглые, малинового цвета,поверхность бархатистая, диаметр колонии

6-8 мм, среда не окрашена.

Мясо-пептонный агар.

Колонии небольшие, кремового цвета, диаметр 6 мм, с радиальной складчатостью. Воздушный мицелий скудный, не окрашенный, среда не буреет.

Сусло-агар.

Образует колонии диалетром 5 r;a поверхность бугристая, воздушный мицелий слабо развит,в центре розового цвета, по краям- кремового.

Картофельно-пептонный агар., Колонии оранжевого цвета, диаметр

12 мм, воздушный мицелий розового цвета, край волнистый, поверхность бархатистая, ьвокруг колонии образуется бурое кольцо.

Пептонно-кукурузный агар.

Колонии небольшие, диаметр 7 ю г бежево-кремового цвета, с радиальной складчатостью, воздушный мицелий скудный. Среда не буреет.

На ломтике моркови рост отсутствует. На ломтике картофеля рост слабый. Мясо-пептонную желатину разжижает в верхнем слое.

Молоко не свертывает и не пептониэирует.

Нитраты не восстанавливает, Отношение к углеводам. Крахмал гидболизует интенсивно. Глюкозу и фруктозу гидролизует с образованием щелочи, остальные сахара - с образованием кислоты.

Активность штамма Ас11повусев

aureovert1ciIIatus 129, продуцирующего внеклеточную гуанил- РНК-аэу, по сравнению с известными в 2-3 раза выше и составляет 25-30 тыс. ед/мл.

25 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9 412?49, С 12 D 13/10, 1972.

2. Прикладная биохимия и микробиология„ т. 12, вып. 5, с. 645649, 1976.