Штамм 541-р/47-продуцент глутаминовой кислоты

Штамм 541-р/47-продуцент глутаминовой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Coae c .x

Соцмалмстичвсимк

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДИТВЛЬСТВМ (6!) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 27. 12.76 (21) 2435532/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) ПриоритетОпубликовано30.03.79.Бюллетень №12

Дата опубликования описания 02.04.79 (iii 654681

2 (51) М. Кл.

С 12 D 13/06

С 12 К 1/02

Гасударственный кемнтет

СССР ее делам нзебретеннй н еткрмтнй (53) УДК 668.394 (088. 8) Р. Ю. Аре, M. E. Бекер, Э. С. Вернер, М. Э. алунде, H. В. Заринь, Г. К. Лиепиныш, Э. А. Линде, В. Т. Лука, С. Э. Селга, Т. Э. Стурис, Р. A. Хелманис, Ю. О. Якобсон, H. П. Шурупова, 3. Т. Чыныбаева и А. Б. Мамадалиев (72) Авторы изобретения

Институт микробиологии им. Л. Кирхенштейна

АН Латвийской CCP (71) Заявитель (54) ШТАММ Согsnebocterkum т цгЬжисощ

541-P/47-ПРОДУНЕНТ,- ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается по. лучения новоГо штамма, используемого при получении глутаминовой кислоты.

В настоящее время широко известны штаммы различных родов — продуцентй глутаминовой кислоты. Так, известен способ получения глутаминовой кислоты на основе мутантных штаммов Gopwhebacteт йнтт дЬАсеписотп, устойчивых к биотину, использующий в качестве основного сырья->© мелассу. Выход глутаминовой кислоты составляет до 40 г/л за 48-66 час (1).:

Из числа известных наиболее близок к заявляемому штамм Сог пеЬос егым

P N« АТСС-13032 (2J °

Выход глутаминовой кислоты при использовании аналогичной питательной среды известного штамма достигает

35 г/л.

11елью настоящего изобретения являет20 ся создание штамма — продуцента глутаминовой кислоты, обеспечивающего увеличение выхода целевого продукта, а также расширение спектра ассимилируемых веществ.

Согласно изобретению, поставленная цель достигается за счет того, что штамм СогжеЬастЕгмтп g Cutamicurn

541-P/47 обладает следующими признаками:, Морфологияэ

Клетки мелкие, короткие палочки, неподвижные.,Скопление не образуют. Спор не образуют. Клетки грамположительны.

Размер клеток (0,5-0,8) х (1,0-1,5)мк.

Мясо-пептонный агар.

Колонии мелкие, круглые, в центре выпуклые, непрозрачные, края ровные, поверхность гладкая, блестящая,яркожелтые. Рост при посеве уколом в столбиках агара — вблизи поверхности. На жидких мясо-пептонных средах поверхностную пленку не образует. Мутность равномерная, образует осадок.

Физиологические признаки.

Отношение к кислород: аэроб, максимум роста при 29-30 С, рН 6,8-7,8.

65468) Т аблица1.

Состав питательной среды при выращивании посевного материала

5,0

5,0

Сахар пищевой

Мочевина

1,0

1,0

Магний сернокиспый

0,05

0,05

Калий фосфорнокиспый однозамещенный

0,1

0,1

Калий фосфорнокиспый двузамещенный

0,1

0,1

Мепасса, содержащая 200 мкг биотина на .1 кг

2,0

2,0

Картофель: на ломтиках картофеля образует мелкие колонии с желтым пигментом.

Жепатину не разжижает.

Отношение к источникам азота. 5

Использует нитраты, мочевину, соли аммония.

Отношение к источникам углерода: ассимилирует сахарозу, глюкозу, фруктозу, пактозу, мапьтозу, ксилозу, маннозу, трегапозу, глицерин, .этаноп, маннит, гпуконовую кислоту, лимонную кислоту, янтарную кислоту, салициловую кислоту, уксусную кислоту, крахмал, гидропизаты . крахмала.

tj

Ассимилирует биотин, тиамин, тиазопьную и пиримидиновую части тиамина, пгидрокси — бензопьную кислоту.

Индол не образует.

Сероводород не образует.

Реакции на уреазу и каталазу положительныее.

Дозировку мелассы осуществляют по содержанию в ней биотина. Концентрация биотина в посевной среде должна составить 3,0-3,5 мкг/и. рН среды (7,0-7,2) устанавливается с помощью 25%-ной BMMHB÷íîé воды.

Мочевину стерипизуют отдельно под давпением 0,3 атм. 3 раза ипи иным способом, например фильтрацией.

Стерильный раствор мочевины добавляют к питательной среде после ее стери-лизации.

Штамм выделен из донных сапропе левых отложений озер Латвийской CCP.

Поспе выделения готовят суспензию концентрацией 10 бактерий в 1 мп, об9 лучают ее в качающихся чашках Петри.

Дпя облучения используют лампу БУФ-ЗО. доза облучения 1930 эрг/мм в мин, г время облучения - 5 мин.

Штамм идентифицирован по определителю:

BergåUç Момаб о 2еЬм-пипаОче Вас1ег оСо уу, Ид. ЫЖоп ВцИ1воге,,1974.

B дальнейшем изобретение поясняется примером.

Осуществляют выращивание посевного материала в колбах на качалке ипи в малом инокупяторе. Полученный посевной материал (1 стадия) используют дпя засева посевных ферментеров (2. стадия); содержимое последних —.дпя засева основных ферментеров.

Засев питательной среды в посевных ферментерах производят посевным материалом, выращенным в колбах на качалке ипи в малом инокупяторе.

Односуточный инокулят дпя засева среды для:выращивания посевного материала должен содержать 5,0г10-8,0;10 клеток продуцента в 1 мп, что соответствует 6,0-7,0 мг сухой биомассы.

Односуточная культура посевного материала из посевного ферментера содер« жит 6»8 г сухой биомассы в 1 л среды..35468 1

Таблица2

Состав питательной среды при основной ферментации

8,5-9,5

Сахар пищевой ипи сахар-сырец

Мочевина

Магний сернокиспый

Марганец сернокиспый

LIHHK сернокиспый

Калий фосфорнокиспый однозамешенный

Калий фосфорнокиспый двузамещенный

Мепасса, содержащая 200 мкг биотина на 1 кг

0,8

0,05

0,01

0,01

0,1

0,1

1,5

Таблица 3

Ативность биосинтеза Ь-глутаминовой кислоты штаммом

Согмне Ьас1ег1от д Манас,0в 541=Р/47 на различных средах

Сахар пищевой

60,0

Глюкоза

45,0

Гидропизат крахмала

45,0

Выращивание посевного материала о проводят при температуре 29-30 С;

В начале ферментации в среду вводят

50% от общего копичества сахара и мо25 чевины; оставшиеся 50% используются дпя дробной подкормки в течение всей ферментации . рН среды — 6,8 ... 7,8

Посевной материал вводят в количестве 5-6% от объема среды. о

Температура ферментации 29-30 С.

Во время ферментации поддерживают рН в пределах 6,8-7,8 путем добавления стерильного раствора 40%-ной мочевины.

Через 10-12 час основной ферментации в среду вводят дипудин в количестве 80100 мг/ll а через 18-20 час — тиамин в количестве 100-150 мкг/л ипи его пиримидиновую часть. Йпя ограничения

Исходная кульпура в тех же условиях образует L -глутамииовую кислоту в среднем до 35 г/л, в то время как предпродолжительность каждой стадии — 2226 час. вспенивания используют нормальные апканы (С „. — С>4) в количестве 0,020,08% от объема питательной среды ипи другой пеногаситець.

Интенсивный биосинтез гпутаминовой киспоты начинается на 18-20 час ферментации и продолжается 68-70 час.

В конце ферментации купьтурапьный раствор содержит 60 г/и гпутаминовой кислоты.

Выделение глутаминовой кислоты или глутамата натрия осуществляют одним из известных способов, например, путем прямой кристаллизации из осветпенных упаренных растворов или путем сорбции на ионообменных смолах. лагаемый штa Cor неЬас1ег1огн я ЫЬмпнсца541 Р/47 дает выход на

i30-60% выше.

654681

Составитепь М. Ларина

РедакторН. Грязнова Техред Н. Бабурка Корректор И. Муска

Заказ 2247/2 Тираж 525,- Подписное

LIHHHHH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формупа изобретения

Штамм Согsnebactewjum д ц с щ сцщ

541-P/47- продуцент g -гпутаминовой киспоты. Хранится в коллекции института микробиологии имени A. Кирхенштейна 5

AH Латвийской ССР.

Морфопогические признаки. Клетки мелкие, короткие палочки, неподвижные.

Скоппений не образует. Размер клеток (0,5-0,8) х(1,0-1,5) мк, клетки грамположите льны.

Мясо-лептонный агар. Колонии выпуклые в центре, непрозрачные, края ровные, поверхность падкая, бпестяшая, яркожептые. Рост при посеве уколом в стопбиках агара вблизи поверхности. На жидких мясо-пептонных средах поверхностную ппенку не образует. Мутность равномерная, образует осадок.

Физиологические признаки.

Картофепь; на ломтиках картофеля образует мелкие копонии с желтым пигментом.

Желатину не разжижает.

Отношение к источникам азота. Использует нитраты, мочевину, соли аммония

Отношение к источникам угперода.

Ассимилирует сахарозу, гпюкозу, фруктоэу, лактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, трегапозу, глицерин, этанол, маннит, глуконовую кислоту, пимонную киспоту, янтарную кислоту, салициловую кислоту, уксусную кислоту, крахмал, гидропиэаты крахмала.

Ассимилирует биотин, тиамин, тиаэольную и пиримидиновую части тиамина, pl-гидрокси-бензольную киспоту. Индоп

I не,образует.

Сероводород не образует.

Реакции на уреазу и каталазу положи тепьные.

Отношение к киспо оду: аероб, макси» мум роста при 29-30.С, рН вЂ” 6,8-7,8, Предпагаемый штамм дает выход кислоты на 30-60% выше, чем известный.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.,Авторское свидетельство СССР

34 328164 кп. С 12 3) 13/06, 1970.

2. «Микробиологический синтез„М 6, 1965.