Способ оценки эффективности очистки объектов внешней среды от кишечных вирусов

Способ оценки эффективности очистки объектов внешней среды от кишечных вирусов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (i i! 654684 союз Ьове ских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 23.02.77 (21) 2459877/28-|3 (51) М. Кл.-"

С |2К 1/00 с присоединением заявки № па делам изобретений (43) Опубликовано 30.03.79. Бюллетень ¹ 12 (53) УДК 576.093 (088.8) и открытий (45) Дата опубликования описания 30.03.79 (72) Авторы изобретения

В. А. Казанцева, С. Г. Дроздов и Г. А. Ширман (71) Заявитель

Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов

Академии медицинских наук СССР (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ОЧИСТКИ

ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ ОТ КИШЕЧНЫХ ВИРУСОВ

Государственный комитет (23) Приоритет

Изобретение относится к области эпидемиологии, а именно способу оценки эффективности очистки объектов внешней среды от кишечных вирусов.

Известен способ оценки эффективности 5 очистки объектов внешней среды от кишечных вирусов путем исследования образцов проб после очистки (11.

Однако известный способ нс обеспечиваег высокой точности оценки эффективности 10 очистки об.ьектов внешней среды.

Целью изобретения является повышение точности оценки.

Эта цель достигается тем, что в исследуемый образец предварительно вносят гуа- 1,-, нидин (зависимый вариант кишечного вируса) и после очистки исследуемый образец высевают на культуру ткани с добавлением гидрохлорида гуанидина.

Способ осуществляют следующим обра- 20 зом.

Гуанидин (зависимый вариант кишечны.; вирусов) получают, используя культуру ткани почек обезьян или перевиваемые линии, чувствительные к кишечным вирусам. В качестве исходного используют любой тип кишечного вируса. Метод заключается в серии последовательных пассажей с нарастающими дозами гидрохлорида гуанидина в питательной среде (от 10 до 150 мкг/мл). 30

На монослой культуры ткани наносят вируссодержащую жидкость в количестве

1 ° 10 — 1 10 БОЕ (бляшкообразующих единиц). Культуру выдерживают при температуре 37 С в течение 60 мин, затем заливают поддерживающей средой — 0,5% гидролизата лактальбумина в растворе Эрла (рН 7,6) с добавлением гпдрохлорида гуанидина в концентрации 10 мкг на 1,0мл среды.

Культуру ткани ежедневно микроскопируют, вплоть до обнаружения разрушения клеток вирусом, при отсутствии такого эффекта в контрольных клетках, куда вирус не вносят. Вируссодержащую жидкость используют для следующего пассажа. В последующих пассажах используют нарастающие концентрации гидрохлорида гуанидина в питательной среде: 20 — 30 — 40 — 50—

60 — 70 — 80 — 90 — 100 — 120 — 150 мкг/мл.

Гуанидин (завпснмый вариант вируса), полученный в последнем пассаже, проверяют на степень зависимости от гуанидина, используя общепринятый метод бляшек. Гуанидин (зависимый вариант вируса) не образует бляшек (т. е. не размножается) под обычным питательным агаром и образует бляшки под питательным агаром, содержащим гидрохлорид гуанидина (120—

150 мкг/мл).

654684

p ä6!! !ее «о.гн !ество I3 аппзи» зависимого варианта вируса получают, исходя из потребностей эксперимента. Титр гуанидин зависимого вируса определяют методом бляшек при содержании в питательном агаре 120 — 150 мкг/мл гидрохлорида гуанидина. До начала эксперимента заготовленное количество вируса хранят в замороженном состоянии пр и температуре = 20" С.

При проведении эксперимента определенное количество гуанидин зависимого варианта вируса вносят в исследуемый объект внешней среды. Осуществляют сбор образцов, отобранных из данного объекта исследования. Количество собранных образцов, объем материала в образце, интервал между сбором и проч. зависят от целей эксперимента. После обработки образцов по общепринятым методикам осуществляют выделение внесенного вируса на культуре ткани с добавлением в питательную среду гидрохлорида гуанидина. Гуанидин подавляет репродукцию всех кишечных вирусов, кроме внесенного гуанидин зависимого варианта. Подсчет количества вирусов в образце осуществляют, используя метод бляшек при добавлении в питательный агар

120 — 150 мкг/мл гидрохлорида гуанидина.

Способ поясняется следующим примером.

П р и м с р. Способ определения эффективности очистки сточных вод. Гуанидин зависимый мутант вируса полиомиелита типа 1, штамм LSC 2ав (вакционный штамм Сэбина) получают в культуре ткани почек обезьян макак резус в серии 22-х последовательных пассажей с нарастающими концентрациями гидрохлорида гуанидина в питательной средеот10до 150мкг/мл.

Техника пассажей следующая: на монослой культуры ткани наносят вируссодержащую жидкость в количестве 1 ° 10 — 1 ° 10

БОЕ. Культуру выдерживают при температуре 37 С в течение 60 мин, затем заливают жидкой поддерживающей средой — 0,5 / гидролизата лактальбумина в растворе Эрла (рН 7,6) с включением гидрохлорида гуанидина в концентрации 10 мкг/мл.

После появления цитопатического эффекта, т. е, разрушения клеток вирусом, вируссодержащую жидкость используют для следующего пассажа. В последующих пассажах концентрация гидрохлорида гуанидина в питательной среде нарастает: 20—

40 — 50 — 60 — 80 — 100 — 120 — 150 мкг/мл.

Рабочее количество гуанидин зависимого мутанта вируса полиомиелита получают в культуре ткани почек обезьян макак резус в присутствии 150 мкг, мл гидрохлорида гуанидина (рабочий объем содержал

1 10 БОЕ/мл при титровании в присутствии 150 мкг, мл гидрохлорида гуанидина, без гуанидина титр вируса был равен

1 10 БОЕ/мл).

Полученный гуанидин зависимый вариант вируса полиомиелита используют для

6О

65 оценки э!рфск! иве!Ос 1 !! очистки сточной Воды на отдельных сооружениях станции аэрации.

Расчетное количество вируса (1,5 10

БОЕ) вносят в объект внешней среды — через канализационную систему населенного пункта в сточные воды поселка. Такое количество вируса оказалось бы в канализационной системе, если 5 — 10!!/! жителей поселка выделяли бы этот вирус.

Образцы проб сточных вод на станции аэрации собирают в двух пунктах: после механической очистки и после всех этапов очистки в течение 7 суток с момента внесения вируса. После специальной обработки образцов осуществляют выделение маркированного вируса и выявляют количество вируса в образцах методом бляшек с включением в питательный агар 120—

150 мкг/мл гидрохлорида гуанидина.

Последующий анализ позволил установить, что при наличии 5 — 10 /! выделителей среди населения вирус обнаруживается в течение 7 суток в сточных водах, прошедших механическую очистку, и не обнаруживается в сточных водах, прошедших все этапы очистки. То есть принятая комплексная система очистки сточных вод на этой станции аэрации эффективна в отношении кишечных вирусов. Предлагаемый способ производителен, так как позволяет вносить достаточное количество вируса в любой объект внешней среды и избирательно выделять его до и после очистки.

Способ обладает высокой точностью, так как позволяет вносить рассчитанное и достаточное для исследований количество вируса.

Предлагаемый способ позволяет вносить вирус в заданный момент времени, при этом исключена возможность неконтролируемого попадания гуанидин зависимого вируса в исследуемый объект.

Зависимость размножения полученного варианта кишечного вируса от гуанидина обеспечивает избирательное выделение данного вируса из объекта внешней среды.

Добавление гуанидина в питательную среду разрешает репродукцию данного вируса и подавляет репродукцию всех других кишечных вирусов.

Зависимость размножения полученного варианта кишечного вируса от гуанидина обеспечивает полную безопасность вируса для человека, в организме которого гуанидин отсутствует, и, следовательно, вирус не может давать потомство в человеческой популяции, поэтому исключено вторичное, дополнительное загрязнение тем же вирусом объектов внешней среды.

Безопасность штамма обеспечивает возможность его внесения в любые объекты внешней среды — большие открытые водные системы, почвы, пищевые продукты.

Учитывая полную безопасность маркиро654684

Ф о р м . л а изобретения

Составитель С. Малютина

Техред Н, Строганова

Редактор Н. Грязнова

Корректоры: 3. Тарасова и Л. Брахнина

Заказ 198/16 Изд. № 248 Тираж 548 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ванного вируса, способ может найти широкое практическое применение для оценки эффективности очистки сточных вод, в том числе на действующих очистных сооружениях, эффективности обеззараживания питьевой воды, в том числе на станциях водоснабжения, эффективности методов пастеризации пищевых продуктов на предприятиях пищевой промышленности, для оценки эффективности новых способов очи- 10 стки объектов внешней среды, для расшифровки процессов самоочистки, происходя1цих в природе, например, для изучения влияния факторов разведения воды в открытых водных системах, инсоляции, влия- 15 ния промышленных стоков на выживаемость кишечных вирусов в сточных водах и в воде открытых водоемов.

Способ оценки эффективности очистки объектов внешней среды от кишечных вирусов путем исследования образцов проб после очистки, отличающийся тем,что, с целью повышения точности оценки, в исследуемый образец предварительно вносят гуанидин зависимый вариант кишечного вируса и после очистки исследуемый образец высевают на культуру ткани с добавлением гидрохлорида гуанидина.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. )Курнал гигиены, эпидемиологии, микробиологии, иммунологии, 11,3, Прага, 1967, r. 259 — 264.