Способ получения антибиотика
Иллюстрации
Показать всеРеферат
4 ( Р 1.:. а.
СПИ ИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
САН (,и655326
Союз Советских
Социалистических
Республик
К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный и патенту (22) Заявлено 02.02.76 (21) 2319154/28-13 (23) Приоритет — (32) 30.10.75 (51) М. Кл. -
С 12D 9/00 осудорствеииый "о" итет (31) 627391 (33) CILIA
Il0 делам изодретеиий (43) Опубликовано 30.03.79. Бюллетень М 12 (53) УДК 615.779.925 (088.8) и открытий (45) Дата опубликования описания 30.03.79 (72) Авторы изобретения
Иностранцы
Хироси Кавагучи, Кодзи Томита, Кей-ичи Фудзисава и Хироси Цукиура (Япония) Иностранная фирма
«Бристоль-Мейера Компани» (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА он но он снами, 1 сион
1 сн
1 сннн, 1
CHOK ! снзок
Изобретение относится к области микробиологии.
Предложен способ получения антибиотика общей формулы
5 где R — CH>CH>CONH, СН,CONH, CHg(CHg) gCONH) КНг, 15 отличающийся тем, что штамм Pseudomonas sp. D 946 — В 83 АТСС 31086 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при рН 5,5 — 9,5 и темпера- 20 туре 10 — 32 С с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде производных солей.
Штамм Pseudomonas sp. D 946 — В 83 представляет собой психрофильную почвен- 25 ную бактерию, которая была выделена из образца индийской почвы. Культура этого организма включена в Американскую Типовую коллекцию культур (Вашингтон
Д. С.) и коллекцию микроорганизмов как
АТСС 31086.
Штамм Pseudomonas sp. D 946 — В 83
АТСС 31086 представляет собой строго аэробную, не образующую спор грамотрицательную бактерию. Клетки имеют форму палочек и производят униполярный множественный жгутик. Штамм представляет собой психрофильный организм, развивающийся при температуре 4 С, но не выше
41 С. Он производит флуоресцентный пигмент в глутаматной среде и в растворе снятого молока.
Морфологические признаки. Штамм Pseudomonas sp. D 946 — В 83 представляет собой подвижные не образующие спор грамположительные палочки, клетки прямые, иногда изогнутые вдоль длинной осп и производят униполярные растущие пучком жгутики.
Культуральные признаки. Питательный агар с дрожжевым экстрактом. Обильный рост 0,5 — 1,5 мм в диаметре через день, рассеянный, круговой и в некоторой степени рельефный, гладкий. Мицелий непро655326
t3 0
6О зрачный, беловатый, впослсдствип цвет его переходит в темно-желтый. Слегка вязкий.
Диффундирующий пигмент не образуется.
Питательный бульон и бульон на дрожжевом экстракте. Обильный рост. Мутный.
С течением времени может происходить образование осадка и иногда образование пленки.
Агар с дрожжевым эксграктом. Рост только на поверхности. В анаэробных условиях роста исТ.
Ограниченно растет при 4 С, умеренный до обильного наблюдается рост при тсмпер атуре от 10 до 32 С, плохо р астст при
37 С и совсем не растет при 41 С. рН среды от 4,5 до 11,00, предпочтительным является рН 5,5 — 9,5.
Добавление NaCl влияет на рост; при добавлении 12% NaC1 нет роста, умеренный рост наблюдается при добавлении 5%
NaCl или менее.
Штамм Pseudomonas sp. D 946 — В 83 производит диффундирующий флуоресцентный пигмент в некоторых средах.
Антибиотик получают выращиванием штамма Pseudomonas sp. D 946 — В 83
АТСС 31086 в аэробных условиях на питательной среде, содержащей: источники yr лерода, например, глюкозу, фруктозу, маннозу, глицерин; способный к ассимиляции источник азота, например, рыбную муку, соевую муку, пептоны; неорганические соли, например, соли натрия, калия, аммония, кальция, фосфата, сульфата, хлорида, бромида, нитрата, карбоната.
Температура выращивания 28 — 30 С. рН среды 5,5 — 9,5, предпочтительно 7,0. Выращивание осуществляют в течение 3 — 5 дней.
Если фсрментацию проводят в чане, то получают вегетативный прививочный материал в питательном бульоне путем инокулирования бульонной культуры косой или почвенной культурой или лиофилизированной культурой организма. После получения активного прививочного материала его асептически переносят в среду чана для ферментации.
Хорошо развившийся на косом агаре штамм Pseudomonas sp. D 946 — В 83 используют для инокулирования затравочной среды, содср>кащей, %: глюкозы 3,0; рыбной муки 2,0; соевой муки 0,5; пептона 0,2;
СаСО 0,6. Перед стерилизацией устанавливают рН 7,0. Затравочную культуру инкубируют при 28 С в течение 48 ч íà ротационной качалке и 22 мл культуры персносят в 100 мл ферментационной среды, находящейся в 500 мл колбе Эрленмейра, в которой находится, %: глицерина 2,0; льняной муки 2,0; арахисовой муки 1,0; рыбной муки 2,0; (NH4)>SO4 0,3; СаСОз
0,5. Количество антибиотика достигает максимального значения через 3 — 5 дней при
28 С. Антибиотическую активность в фер5
l5
>5
10 мснтациопном бульоне опрсдсл поТ мс одом определения диффузии в системе «бума>кный диск — агар» с использованием
Bacillus subtilis РС1 219. Получают антибиотика 1500 — 2000 мкг/мл.
После получения бульона оптимальной активности устанавливают рН 2, основной водорастворимый антибиотический комплекс отделяют от мицелия и растворяют в водной фсрмснтационной среде, Бульон фильтруют и фильтрат, содержащий антибиотик, нейтрализуют до рН 7 и пропускают через катионообмснную смолу (амберлпт в аммониевой форме). Затем смолу промывают водой н разбавляют NH4OH, а антибиотик элюируют со смолы подходящим элюснтом. Лктивныс порции элюснта объединяют, концентрируют и выпаривают или лиофилизируют с получением антибиотика. При помощи TO11Kocлойной хроматографии получают сырое твердое вещество, которое содержит три активных компонента А, А и В, а также два неактивных компонента С и D.
Антибиотик разделяют на компоненты А, А>, В, С и D при помощи катионообменной смолы типа Амберлит G-50 в аммониевой форме. После растворения антибиотика в воде его обрабатывают смолой, промывают водой, разбавляют гидроокисью аммония и элюируют подходящим элементом. 20 н. гидроокись аммония позволяет получить компоненты А и В, дальнейшее элюирование колонны более концентрированным раствором гидроокиси аммония позволяет получить компоненты С и D. Чтобы получить очищенный компонент А, необходимо осуществить дополнительное хроматографирование на колонке фракции А с целью разделения компонентов А> и A.
Антибиотичсское вещество А представляет собой белое аморфное основание, растворимое в воде, слегка растворимое в метаноле и этанолс и практически нерастворимое в н-бутаноле, ацетоне и других органических растворителях.
Антибиотик А способен образовывать соли при взаимодействии с кислотами. Фармацевтически применимыми являются нетоксичные соли таких органических и неорганических кислот, как хлористоводородная, серная, фосфорная, уксусная, стеариновая, пропионовая, винная, малеиновая, бензойная, янтарная и т. п.
Лнтибиотик А дает положительную реакцию с нингидриновым и антроповым реагентами, но отрицательные реакции с реагсптамп Tollens, РеЫ1пд и Sakaguehhi.
Удельное вращение (плоскости поляризации) компонента А в виде основания составляет (cr)» =78,5 .
Образец антибиотика А после осаждения из этанола был подвергнут элементному
655326 анализу, согласно которому вс1цсство имсст формул CI;H»N>OgXC>H OH)(H>0.
Вычислено, %.. С 44,24; I-! 8,52; М 9,11;
О 38,13.
Найдено, /о . С 44,25; Н 8,08; 9,11; О (по разнице) 38,56.
Ди-Х-ацстат антибиотика А получают в виде бесцветных игл, т. пл. 149 — 150 С, мол. вес. 481 (осмометрическим методом) .
Вычислено, /о. С 45,68; Н 7,47, N 8,41;
0 38,44.
С1зНззКз011H2O.
Найдено, /,: С 45,673; Н 7,49; N 8,19;
О (по разнице) 38,59.
Антибиотик А представляет собой слабоосновное вещество и имеет способные к гиг1-оз iuiilo груп 1ы, имсющиc значения рК, 6,90 и 9,40 в воде. ПриблизитсльHый молекулярный вес антибиотика, на основании вычислений по данным титрования, составляет 398.
Антибиотичсский компонент A., подобно компоненту А, описанному выше, представляет собой белое аморфное основное вещество, которое растворимо в воде, слабо растворимо в метаноле и этаноле и практически нс растворимо в и-бутаноле, ацетоне и других традиционных расгворителях. Оно способно к образованию солей при взаимодействии с кислотами и фармацевтически применимых солей. Компонент А дает положительную нингидриновую реакцию и положительную антроновую реакцию и отрицательные реакции при взаимодействии с реагентами Tollens, Fehling H Sakaguchi.
Для основания А, (а), =79,1 (c 0,43, H.0) .
Образец антибиотика А., выделенный в виде àðáî.íàòà, .бы.л идентифицирован как
С1зНззКзОз X / Í2COç.
Вычислено, /,: С 44,79; Н 7,75; N 9,50;
О 37,96.
Найдено, 01g. С 44,35; Н 7,83; Х 9,21;
О (по разнице) 38,61.
Антибиотик В аналогичен по внешнему виду и растворимости антибиотикам А и
А. и представляет собой белое аморфное основно= вещество, которое растворимо в годе, слегка растворимо в метаноле иэта олс и практически не растворимо в и-бутанолс, ацетоне и других традиционных органических растворителях.
Антибиотик В способен к образованию солей при взаимодействии с кислотами.
Даст положительные реакции с нингидрином и антроном и отрицательные реакции с реагентами Tollens, Fehling u Saliaguchi.
Удельное вращение антибиотика В в виде основания составляет l ) ri =85 (с, 1,0, вода).
Образец антибиотика В при осаждении из этанола был ид нтифицирован как
С14НззХзОз Х СгНзОНМН20, :3
Зо
Вычислено, ю/О С 42,95;
0 39,35.
Найдено, о/о.. С 42,69; Н 7,78; 8,86; О (по разнице) 40,67.
Ди-Х-ацетат антибиотика В получают в виде бесцветных призм, т. пл. 159 — 162 С, мол. вес 484 (методами осмометрии).
Вычислено, /о. .С 44,53; Н 7,27; М 8,66;
О 39,54.
С 1QH)gN QO I I Нз О.
Найдено, /о С 44,96; H 7,44; N 8,52;
О (по разнице) 39,08.
Антибиотик В представляет собой слабое основание и имеет способные к тптрованию группы со значениями рК,, 7,15 и 9,35 в воде. Как было вычислено из данных тнтрования, приблизительный молекулярный всс антибиотика составляет 409.
Биологически нсактив ый а..тибиотч ".ский компонент D представляет собой белое аморфное oeHQBHo" всгцсство, которос растворимо в воде, слабо растворимо в метаноле и этанолс и практически нсраствор11мо в н-бутанолс, ацетоне и других традиционных органических растворителях.
Вещество D способно образовывать соли при взаимодействии с кислотами.
Компонент D дает положительHûе реaêцип с нпнгидрином и антроном, но отрицательные реакции с реагента ми Tollens, Fehling u Sakaguchi.
Удсльнос вращение компонента D в виде основания составляет (я) „1 =72,5 (c 1,0, вода) .
Образец компонента D, выделенный в виде карбоната, был идентифицирован как
С I Н -Uta08YH CO»
Вычислено, /о.. С 38.70; Н 7,25; Х 10,42;
О 43,63.
Найдено, /о. С 38,86; Н 6,93; М 10,14;
О (по разнице) 44,07.
Компонент D представляет собой слабое основание и имеет три способныс к титрованпю группы с величинами рК, 6,95 (2 эквигалента) il 9,68 в воде.
Три-Nl-ацстат компонента D получают в видс бесцветных призм, т. пл. 159 †1 С.
Эта соль оказалась идентичной ди-N-ацетату компонента В.
Определение сто кт ры коз:понснтов Л т(В
Мягкий кислотный гидролиз компонентов
А и В дает такое жс дезацпльнос соединсHIIC С1зН,;ХзОз, КОТороС II3C HTII IHO :,омпоненту D, полученному хроматографическим разделением сырого комплекса антибиотика. Обшее U-ацетплированпе антибиотика дало три-М-ацетат (CINCH> N>OI I), который был 11дент11фнцирован Iiati ptt-!Ч-ацстат компонента В.
Кислый гидролиз компонента В в метанольном р чстворс хлористоводородной кислоты (насьпценный раствор, тсмпсратура начала стенания флсгмы, 24 ч) приво655326 дит к получению агликона и амипосахара совместно с компонентом D. Агликон выделяют в виде кристаллического сульфата, т. пл. 263 — 264 С, который был идентифициРовап как СоН)оМ О4Нд$04. 5
Вычислено, /o. С 25,90; Н 6,52; N 10,07;
$11,52, Найдено, %: С 26,10; Н 6,47; N 9,93;
$11,29.
ЯМР-спектр, снятый при 220 MHrN, 10 о-гексаацетата этого вещества совместно с данными масс-спектрального анализа, полученными при использовании 1х1-ацетил-оTMS N-ацетил-диизопропилидена и гексаN-о, N-aöcòèл производных агликона, поз- 15 воляет предположить 1,4-диамино-2,3,5,6тетра-ольную структуру для агликоновой части.
Ди-iN-ацетат агликопа получают в впдс бесцветных игл, .. пл. 114 — 115 С. 20
Вычислено, %. С 45,45; Н 7,63; N 10,60.
CioНдоМдОо
Найдено, %: С 45,37; Н 7,97; iU 10,57.
Лминосахарный фрагмент, полученный после описанного кислого метанолиза ком- 25 понснта В, очищают хроматографированием на Амберлитс G-50 и разделяют на аи р-формы метилгликозида, причем а-форма — основной продукт. К-ацетилированием а-метилгликозида получают вещество в 20 виде бесцветных призм, т. пл. 185 — 186 С.
Вычислено, %: С 45,95; Н 7,28; N 5,95.
СдН 7ХОо.
Найдено, %: С 45,93; Н 7,43; N 5,88.
Масс-спектр этого Х-ацетильного произ- 35 водного дает пик при m/å 204 (М вЂ” 31), соответствующий потери молекулой гликозидной метоксильной группы. Таким образом, свободный аминосахар должен иметь формулу CcH!aNOs. 40 а- и р-формы мстплгликозпда идентифицированы как метил-4-амико-4-диокси-а- и
P-D-глюкопиранозид соответственно в результате снятия ИК- и ЯМР-спектров их тетра-N, о-ацетилпроизводных. ИК-спектры 15 искусственных образцов этих сахаров, выделенных из 4-трехалосамина, соответствуют ИК-спектрам экспсримснтальных образцов.
Кислый гидролиз компонента D даст те 50 же самые агликон и аминосахар, что были выделены из гидролизата компонента В.
Компонент С, полученный хроматографическим разделением сырого комплекса антибиотика, подвергают гидролизу. в среде метанола, содержащего 1 í. HCI, при температуре стскания флегмы в течение 3 ч.
Агликоновый фрагмент идентичен этой части в других компонентах антибиотика, и фрагмент сахара идентифицирован как ме- 60 тил D-глюкозид с помощь1о тонкослойной хроматографии, ЯМР- и хроматографии.
В опытах in vitro показано, что антибиотик и и: дпги1дуальнь." аптиб отичсские компоненты Л,,Д- и В обладаю1 гцироких4 (i5 спектром антибактериальной активности.
Антибиотик и активные компоненты ингибируют большинство аминогликозидустойчивых организмов. Обнаружено, что компоНсНТ А. является более активным по срав1ic!ninî с компонентом В, но менее активен чем А.
Минимальную ингибирующую концентрацию А и В определяют по отношению к большому количеству бактерий способом двукратного разбавления агара в чашках с питательным агаром. Для этой цели используют иноколумрепродуцирующее устройство. Количество прививочного материала поддерживают таким, чтобы îíî составляло разбавление в 10" раз оставленной на ночь культуры испытуемых организмов в сердце-псгтонном бульоне (Direc).
Удельные активности компо ентов А и В умеренные или достаточно слабые в отношении зна гений минимальной ингибиторной концентрации (МИК), причем компонсн А в 2 — 4 раза более активен, чем В.
Однако они имеют широкий спектр антибактериальной активности против грамположительных и грамотрицательных бактерий, включающих многие аминогликозидустойчивые организмы и штаммы.
Установлено, что антибиотик с чистотой
30 — 40% ингибирует Е. coli А 20365 при концентрации 12,5 мкг/мл, К. pneumoniae
D-11 при концентрации 1,5 мкг/мл, и Ps.
acropinosa А 9930 при концентрации
25 мкг/мл.
Влияние рН на МИК.
Влияние рН среды на МИК компонента
А изучают методом двойного разбавления агара с использованием среды питательного arapa при рН 6,0, 7,0, 8,0 и 9,0. Результаты показывают, что активность компонента А увеличивается в среде с щелочным рН и уменьшается в среде с кислым рН.
Влияние среды на активность компонентов Л и B изучают по отношению к 8-ми испытуемым организмам. B качестве испытуемых сред используют питательный агар, сердце-псптонньш агар и Мпе!1ег-Hintoorap. рН среды устанавливают 8,0. Наибольшая активность in vitro проявляется при использовании в качестве испытуемой среды питательного агара.
Активность и токсичность компонентов
А и В оценивают !n vivo при экспериментальном заражении мышей. В качестве патогенных бактерий используют S. aureus
snith, Е. coli № 1 Ш и Ps. aегоginosa
А 9930. Мышей заражают 100 40оо дозой патогснов в 5% -ной суспензии желудочного муцина свиней, единичное подкожное введение антибиотика осуществляют немедленно после бактериального заражения (О ч) и двойную дозировку антибиотика вводят через 0 пли 3 ч после заражения.
Для каждого дозировочного уровня исполь1О
Таблица 1
Активность, мкг,мл
0 0
33
0
1,600
1,650
1,700
1,800
6,7
7,5
7,8
7,9
7,9
8,1
8,1
Таблица 2
20 н.
ХН4ОН, Вес твердого вегцсства, r
Еомпонснт антибиотика (сырой!) 1,3 (Активности нет) А, о о
2,7
А-, В (небольшое количество)
7,8
4,4
3,3
5 зуют группы в 5 мышей, и животных наблюдают в течспие 5-ти дней для определения средней защитной дозы LD;p.
Компоненты А и В проявляют ак-,ивность in vivo против всех трех испытуемых бактерий.
Остру)о токсичность компонентов А и В определяют на мышах при подкожном и внутривенном применении. Мышей наблюдают в течение 15-ти дней. Внутривенная (i. .) и подкожная (s. å.) 1 агав компонента
А составляет 2500 мг/кг и 1000 мг/кг соответственно. Компонент В значительно менее токсичсн, чем А, и не вызывает смертсл; ного исхода при дозировках вплоть до
2000 мг/кг как при внутривенном, так и при подкожном применении в течение 15дневного периода наблюдения.
Компонент D, хотя он и является биологически неактивным, представляет собой ценное промежуточное вещество в полусинтстическом получении биологически активных компонентов А, А, В. Так, например, свободная аминогруппа промежуточного вещества D (после соответствующей защиты других реакционноспособных функциональных групп) может быть подвергнута
N-ацилированию в соответствии со способами, известными per se, с образованием (после удаления любых защитных групп)
N-бутирильного производного А, N-ацетильного производного В и N-пропионильного
IIpOH3B0jIHOI о А .
Пример 1. Ферментация в чане.
Штамм D 946-В 83 культуры Pseudomonas на косом агаре используют для инокулирования 100 мл затравочной среды № 83В (3% глюкозы, 2% рыбной муки, 0,5% соевой муки, 0,2% пептона и 0,6%
СаСО,) в 500 мл колбах Эрленмейра. Колбы инкубируют при 28 С в течение 3 дней на ротационной мешалке (250 об/мин), и используют 1 л затравочной культуры для инокулирования 300 л ферментационной среды № 100 (2% глицерина, 1% Pharman1edia, 2% рыбной муки, 2% муки льняного семени, 0,3% (NH4)zSO4, 0,6% СаСОз).
Ферментацию в чане проводят при 30 С, перемешивании со скоростью 140 об/мин, при скорости аэрации 200 л/мин. Активность бульона определяют методом «бумажный диск — пластина агара» с использованием В. subtilis РС1 219 в качестве образца для анализа и ВИ 2183 А — в качестве стандарта для анализа. Полученные результаты представлены в табл. 1.
Пример 2 (экстракция). Созревший бульон фильтруют при рН 2. Фнльтрат (19 л), который содержит около 30 г антибиотика А, доводят до рН 7 и перемешивают с 13 л Амберлита LRS-50 (NH4+-форма). Смолу отделяют, промывают 10 л воды и 5 л 15 í. NH4OH, затем перемешивают с двумя 4-литровыми порциями 2 н, NH4OH для элюирования. Активные,элюа5
Време, ч рН бульона ты объединяют, концентрируют в вакууме и затем лиофплизируют с получением
18,6 г белого твердого вещества (около
700 мкг/мг). Это твердое вещество растворяют в воде и пропускают через колонку с
Амберлитом G-50 (NH4+-форма, 400 мл).
Колонку промывают 2,2 л воды и 3 л 4 н.
ХН4ОН и затем элюируют 20 í. NH4ОН.
Э IIoaTbI собирают по фракциям и исследуют методом биологического анализа на пластине с В. зцЬИ(з, а также методом тонкослойной хроматографии (система
$-117, нингидрин).
Соответствующие фракции объединяют, концентрируют в вакууме и лпофплизируют с получением твердых веществ. Результаты представлены в табл. 2.
Пример 3. Получение компонента А.
Сырой образец компонента А (2,7 г), полученный в примере 2, растворяют в воде и пропускают через колонку с Амберлитом
G-50 (NH4+, 80 мл). Колонку элюируют
20 н. NH4OH и каждые 15 мл элюата собирают при помощи фракционного сборника. Фракции исследуют методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и рсакцнсй на нингпдрпн, а также биологическим анализом. Саответс1вующие фракции объединяют, концентрируют в вакууме и лиофилизируют с получением твердых веществ.
Результаты представлены в табл. 3.
Чистый препарат компонента А идентифицирован как (-!5H1)NIaOsX / Н СОаВычислено, %: С 43,45; Н 7,53; N 9,81.
Найдено, %: С 43,22; Н 7,52; N 9,49.
655326
Таблица 3
Вес твердого вещества, мг
Компонент антибиотика (сырой) Номер фракции
Таблица 5
Вес твердого вещества, мг
28 — 53
54 — 72
73 — 95
801
1,597
189
А (примеси) А
10н. )х1 Н,О Н, мл
Компонент антибиотика (сырой) А-+-В (небольшое количество) O †3,OOO
301 вЂ,200
1,201 вЂ,900
1,901 â€,400
1, 638
Пример 4. Получение компонента В.
Сырой образец компонента В (3,3 г), полученный в примере 2, растворяют в воде и пропускают через колонку с Амбер- 15 литом G-50 (NH4+, 130 мл). Колонку элюируют 20 н. NH4OH, и каждую порцию элюата — по 15 мл — собирают фракционным сборником. Фракции исследуют методом тонкослойной хроматографии и реак- 20 цией на нингидрин, а также биологическим анализом, Соответствующие фракции объединяют, концентрируют в вакууме и лиофилизируют с получением твердых веществ. Результаты представлены в табл. 4.
526
А2
0,57
0,48
Таблица 4
Вес твердого вещества, мг
Номер фракции
Компонент антибиотика (сырой) 30
Форм ла изобретения
1 — 59
60 — 151
152 — 160
2,792
366
 —,примеси
В он
«,т нн снон но он
В+примеси (небольшое количество) 1
CHGH
I сн,он
40 где К вЂ” CHgCHgCONH, СНзСОИН, СНз(СН,),СОКН, ИН,, отличающийся тем, что штамм Pseudom0nàs sр. Д 946 — В 83 АТСС 31086 выращивают в аэробпых условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при рН 5,5 — 9,5 и температуре 10 — 32 С с последующим выдсле50 нием целевого продукта в свободном вид или в виде производных солей.
Составитель С. Малютина
Техред Н. Строганова
Корректоры: Л. Брахнина и О. Тюрина
Редактор Н. Хубларова
Заказ 187/16 Изд. ¹ 225 Тираж 548 Подписное
НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5
Типография, «р. Сапунова, 2
Чистый препарат компонента В идентифицирован как С14НюИзОзХ /2НзСОз.
Вычислено, %: С 42,02; Н 7,30; N 10,14.
Найдено, %: С 41,92; Н 7,43; N 9,93.
Пример 5. Получение компонента С и компонента D.
Колонку, используемую в примере 2, далее проявляют 1,4 л 20н. КН,ОН, в результате чего не происходит элюирования биологически активного вещества. Затем колонку проявляют 10 н. NH4OH, и элюаты исследуют методом тонкослойной хроматографии с опрыскиванием нингидриновым реагентом. Соответствующие фракции объединяют, концентрируют в вакууме и лиофилизируют с получением твердых веществ. Результаты представлены в табл. 5, Пример 6. Получение компонента А .
В ходе процесса очистки компонента А, описанного в примере 3, выделяют активный компонент из предыдущих фракций, который обозначен как компонент А2. Его отделяют от компонента А системой для тонкослойной хроматографии S-117 и S-122.
Результаты представлены ниже:
А
$-117 0,49
S-122 0,39
Способ получения антибиотика общей формулы