Штамм 147-а -продуцент кислотоустойчивой -амилазы и глюкоамилазы

Штамм 147-а -продуцент кислотоустойчивой -амилазы и глюкоамилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ИА73нт(< ЩМ1

Союз Советскнк

Социалистичесинк

Республик

ОПИСАН""ЙЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

/

«« 659617

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свил-ву— (22) Заявлено 20.0477 (21) 2479129/28-13 с присоединением заявки №вЂ”

{23) Приоритет (51) М. Кл.

С 12 К 1/02

С 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

Опубликовано 3004.79.Бюллетень № 1b (53) УДК ь 68 . 1 3 (088. 8) Дата опубликования описания 3004.79 (72) Авторы изобретения

Г.И.Квеситадзе, Л.Л.Квачадзе, М.Д.Павленишвили, Т.И.Алексидзе и В.В.Коридзе (71) Заявитель

Институт биохимии растений AH Грузинской CCP (54) ШТАММ Дэре<. <Иихф niger 147 — А

ПРОДУЦЕНТ КИСЛОТОУСТОЙЧИВОИ а< -АИИЛАЗЫ И ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

Изобретение относится к ферментной промышленности, в частности, к получению нового штамма — продуцента амилолитических ферментов, кислотоустойчивой оь -амилазы и глюкоамилазы.

Для получения амилолитических ферментов в настоящее время используют отдельные представители A5pergiEГцб< A.or

При культивировании этих микроорганизмов получают сб -амилазу некислотоустойчивого характера и кислотоустойчивую с6 -амилазу в следовых количествах, глюкоамилазу и трансглюкозилазу, которая, как известно, образует олигосахариды с ос -1,б связью и тем самым затрудняет ферментативный гидролиз природных крахмалов.

Кислотоустойчивая сс, — амилаза

AapevgiPPuS полностью сохраняет активность при рн 2,,0 и 30-ти мин инкубации при температуре 30, в то время как кислотоустойчивая

îf,-амилаза этих же грибов при рН 3,0 в тех же условиях полностью и необратимо теряет активность.

Из известных штаммов наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является плесневый гриб дбрЕГф< Ии б n iger штамм

475 — продуцент кислотоустойчивой

of-амилазы, глюкоамилазы и трансглюкозилазы (1) .

Недостатком данного штамма яв1О ляется низкий уровень биосинтеза кислотоустойчивой о6 -амилазы (0,65 ед/мл). Кроме того, Ирегф<с<, 0<5 п<фе< 475 образует. фермент трансглюкозилазу, отделение которого связано с большими техническими трудностями.

Целью настоящего изобретения является получение штамма — более активного продуцента кислотоустойчивой о(-амилазы и глюкоамилазы, который при этом не:продуцировал бы нежелательный продукт — трансглюкозилазу.

Новый штамм получен путем ультрафиолетового облучения исходного штамма АбрЕгф< Ииб niger 475.

Исходный и мутантный штаммы хранятся в музее. коллекции культур Института

ЗО биохимии растений AH Грузинской CCP.

«» 59 617

Получен11ый» штамм имеет cлед««ююук» морфологическук» и физиологическук> характеристики.

11ОРфОЛОГИЯ. у пятисуточной культуры гифы тон— кие и тОлстые «разделенные на равные прямоугольные клетки. Конидиеносцы бесцветные, несептиронанные, неветВящиеся размером (330-858)х(6,6. -13,2) мк, средний их размер 660х х9,9 мк. конидиальные голонки радиальные. 10

Конидиальные пузырьки круглой формы диаметром 26,4-66,0 мк, средний диаметр 46,2 мк.

Стеригмы цилиндрические, двурядные, причем первичные .длиннее вто- )5 ричных. Размер стеригм первого порядка 13,2-19,8 мк, н> среднем 15,.2 мк.

Стеригмь1 нтОРОгo порядка размером

4,6-9,9 мк„ в среднем 6,6 мк, Иа стеригмах располо>кены конидии, круглые, диаметром 4,6-11„5 »мк, средний диаметр 6,6 мк.

Органическая среда.

Пятисуточная гигантская колония оская» круглая «Диаметром 9" 10 . c-""и

Конидиальные головки крупные в центре колонии, мелкие по краю. Конидиеношение обильное светло-коричневое, Стерильный край колоний 0,5-1,0 см.

Минеральная среда (г/л)

И ЫО„- 4,0; КН РΠ— 1,0, ИдЯС4-0,5;

ЗО крахмал — 20,0; пшен11-ны»е отруби -4Ъ.

Рост колоний н Виде гомогенной кашицеобразной массы светло-коричневатого цвета. (отношение к источникам углерода.

Гидролизует амилозу, амилопектин и лодобные поли- и олигосахариды с о« -1 „б глюканоной связью, Ha5m«>paeT ся интенсивный рост на среде, содержащей глюкозу, сахарозу и мальтозу 40

В качестве eäèíoTÂeíHÎÃo источника ,углеродаа

Отношение к источникам азота. .11ЗОТ. НИтРата усваивает легче, чем азот аммония. Наиболее интенсивный рост наблюдается на нитратах.

Т а б л и ц а 1 ктивность ферментов, ед/мл наименование штамма кислото- глюкоами устОйчиная»лаза ж -амилаза трансглюкозилаза

0,65 есть

)«+pe1 g1(»8L 1>1ger» 1 47- »,,»SQ8nО1ВЬL»G п1де>» 47 "> от»1он»1е1-1не к источника»«фосфора. усваивает ра-нообразные фосфорные сОедине ния» B ТОМ числе и В трсх валентной форме.

11а среде, содержашей крахмал н качестве источника углерода, синтезирует кислотоустойчиную 00 -амилазу и глюкоамилазу, н этих же условиях протеолитические ферменты синтезиpó10Tñë Б следоных количестВах. .«»ктивность по кислотоустойчивой о! --амилазе — 1,5 ед/мл, по глюкоамилазc — 12,1 ед/мл. и р и м е р 1. штамм АsperglFPug niger

147-s получен путем облучения ультрафиолетовыми лучами н дозе 3,2х х 10 зрг/с« конидий исходного штам3 2

Ма ASper1>1йОб й1фег 475. Культинирона«::«,Р ние мутанта проводили на среде следую.11его состава (г/л):

А(М»»1 ".„ 4,0

Кйр РО уф«-.»04

Крахмс1л 20 0

Пшеничные отруби 4,0 при 30 С на качалке (180 об/мин) н течение 72 час.

Посевным материалом служила суспензия конидий грибов, ныраи енных на скошенном сусло-агаре в течение

20 суток. 1рибы культивировали В колбах объемо»м 750 мл, содержаших

150 мл среды. параллельно вырацивали Абрегф1Ииа п1Оег 475. Данные лабораторной пронерки культуральной жидкости на активность ферментов амилолитического комплекса нами полученного штамма, в сравнении с известнжл АнрегдНЮБ

niger 475 приведены в табл. 1.

Активность сб -амилазы определяли колоримстрическим методом

Рухляденой и Горячевой. Активность глюкоамилазы определяли по Дальквисту, а об активности трансглюкозилазы судили по способности фермента образовывать олигосахара из мальтозы (наличие на хроматограмме пятна изомальтозы и панозы) .

659617

Т а б л и ц а 2

Количества взяТОГО препаратае

Время тесто зеденееяе

Объем форуаНаименование препарата ваг+ хлеба, СЕ час ку 1 кг хлеба

По предлагаемому

535

Па прототипу: амилоризин П10Х

508

Контрольный вариант

2, 36 470

Как видно иэ таблицы, полученный штамм Атрее Яе Г(.ееб ni 5er 147-А, отличающийся о-, 1брбгфеИцб нерве 475 по морфалагическим и биохимическим признакам,.обеспечивает повышенную активность кислотоустойчивой р -амилазы, а также отсутствие нежелательного фермента трансглюкозилазы.

Кислотоустойчивую Ж -амилаэу с успехом можно использовать в тех отраслях пищевой промышленности и медицины, где процесс применения Я фермента сопряжен с кислым значением рН среды, например, в хлебапекарнай промышленности, когда при внесении жидких дрожжей рН среды резко падает. Использование указанного штамма будет эффективно также в спиртовой прожешленности.

При энзиматерапии важную раль играет кислотность желудочного сока, подавляющего активность ферментов, 20 в этих условиях кислатонеустойчывая еее -амилаза полностью теряет активность, в -о время как кислотаустойчивая е6 -аиилаэа сохраняет более

903 энзиматической активности.

П р и и е р 2. 8 мг ферментного препарата кислотоустойчивой ее6 способу: препарат из КЕК ИрегаеьКцб п ДЕп Йт- А

Хлебе выпеченный с добавлением ферментного препарата кислотоустойчивойее(,-амилазы и глюкоамилаэы иэ

AGpevgiе,6иб пеДег 147-А, отличается лучшими вкусовыми качествами, более замедленным процессом черствения и более равномерной структурой пористости, Формула изобретения штамм Aepergj Реев gypper продуцент кислотоустойчивой а, -ямилаамилазы и глюкоамилазы 1в егф» асеев падве

1 47-А пол j÷eííÎÃ0 осаждением зти лавым спиртом .с активностью кисло тоустойчивой о. -амилаэы-250 ед/г и глюкоамилазы-840 epjr вместе с

415 мл воды, 10 г хлористого натрия и 20 г дрожжей интенсивно перемешивают с 740 г муки первого сорта до получения однородного теста, затем ставят в термастат (30 С) на дна час о (перемешивают тесто через каждый

«ac). Полученное таким образом тесто делят на две части и выпекают формовой и подовой хлеб.

Параллельно в аналогичных условиях выпекают хлеб с добавлением амилоризина П-10Х-ферментного препарата, который в настоящее время примеееяетгся в СССР как добавка с целью улучшения качества хлебобулачных изделий, и контрольный варинт — без добавления фегментного препарата, В табл.2 приводятся данные использования ферментных препаратов кислотоустойчивой а ; -амилаэы и глюкаамилаэы Aeperpl;ger 147-А, амилоризина П1ОХ и контрольнога варианта (без внесения фермента}, эы и глюкоамилазы. Хранится а музее коллекции культур Института биохимии растений АН Грузинской СССР.

Морфологические признаки. у пятисуточной культуры гифы тонкие и толстые разделенные еаза равееезее прямоугольные клетки. Конидиеносцы бесцветные, несептированные, неветвящиеся, размерам (330-858)х(б,б13,2)мк, средний размер 660х9,9 мк, Конидиальные головки радиальные.

659617

Конидиальные пузырьки круглой формы диаметром 26,4-66,0 мк, средний диаметр 46,2 мк.

Стеригмы цилиндрические, двурядные, причем первичные длиннее вторичных. Размер стеригм первого порядка 13,2-19,7 мк, в среднем 15,2мк. 5

Стеригмы второго порядка размером

4,6-9,9 мк .в среднем 6,6 мк.

На стеригмах расположены конидии, круглые, диаметром 4,6 — 11,5 мк, средний диаметр 6,6 мк. l0

Культуральные признаки °

Органическая среда. Пятисуточная колония плоская, круглая, диаметром

9-10 см.

Конидиальные головки крупные в центре колонии, мелкие по краю.

Конидиеношение обильное светлокоричневое. Стерильный край колоний

0,5 — 1,0 см.

Минеральная». среда (г/л):

МаN0> 4,0; КН РО4 — 1,0; А1ф504— крахмал — 20,1; пшеничные отруби

4%. Рост колоний в виде гомогенной кашицеобразной массы светло-коричневого цвета.

Отношение к источникам углерода. 25

Гидролиэует амилозу, амилопектин и подобные поли- и олигосахариды с

pG- 1,6 глюкановой связью.

Наблюдается интенсивный рост на среде, содержащей глюкозу или сахарозу или мальтозу в качестве единственного источника углерода.

Отношение к источникам азота.

Азот нитрата усваивает легче, чем азот аммония. Интенсивный рост наблюдается при использовании нитратов.

Отношение к источникам фосфора.

Усваивает фосфорные соединения. На среде, содержащей крахмал в качестве источника углерода, синтезирует кислотоустойчивую сб -амилазу и глюкоамилазу, в этих же условиях протеолитические ферменты синтезируются в следовых количествах.

Предложенный штамм характеризуется повышенной активностью, а также отсутствием нежелательного фермента трансглюкозилаэы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Прикладная биохимия и микробиология™, 1975, т.XI, вып.4.

Составитель М. Ларина

Редактор Н Грязнова Техред С.Мигай Корректор О. Билак

Заказ 2120/6 Тираж 525 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035с Москва, Ж-35 Раушская наб. д.4 5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектйая,4