Способ приготовления питательной среды для культивирования микроорганизмов

Способ приготовления питательной среды для культивирования микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

3CEOeeSHA5

«4тВЪт " УЛЯ

465

Союз Советскик

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

<1Ц 659619

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) дополнительное к авт. сви1(-ву— (22) 3> ><8021.04,72 (2т) 1778614/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет

Опубликовано 300479.Бюллетень № 16

Дата опубликования описания 3004.79 (81) M. Кл.

С 12 К 1/06

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (53) УД 615.45:.

:577.47 (088.8) (72) Авторы изобретения

В.В.Гашинский, В.Г.Бордонос и И.П.Билько (73) Заявитель киевский медицинский институт им.акад.А.А.Богомольца (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Настоящее изобретение относится к микробиологическим исследованиям, в которых используют плотные питательные среды, и может быть применено в диагностических и научных целях.

В микробиологической практике для получения платных питательных сред обычно используют следующие вещества: агар, силикагель, желатин, крах- 1@ мал, кровь, сыворотку крови, пектат натрия, метилцеллюлозу, белок и желток куриного яйца )1-41.

Большинство этих веществ в силу различных причин (отсутствие уни-версальности непрозрачность, вы.сокая стоимость и др.) не нашли широкого применения.

Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности @ и достигаемому результату является способ приготовления питательной среды, для культивирования микроорганизмов, заключающийся в одновремен-ном получении полиакриламидного N геля и пропитке его питательным субстратом (получение полиакриламидного геля ведут в присутствии питательного субстрата) с последующей стерилизацией (51 .

3О

Описанный способ имеет следующие недостатки: получаемые питательные среды содержат токсические вещества, стерилизация этих сред затруднена, при их приготовлении могут быть использованы не любые питательные субстраты; питательные среды имеют кислую реакцию (рН 3,5-4), что ограничивает возможность их использования.

С целью получения универсальных питательных сред, предложен способ приготовления питательной среды, предусматривающий получение полиакриламидного геля, являющегося основой1: среды, и последующую пропитку его питательным субстратом до или после стерилизации.

Питательные среды на полиакриламидной основе млкробиологически инертны, пригодны для культивирования различных классов микроорганизмов при рН 1-14, высокопрозрачны, прочны, эластичны, имеют гладкую поверхность, стерилизуются без изменения своих свойств, могут храниться в течение длительного времени.

659619

Предлагаемый способ приготовления питательной среды осуществляют следующим образом.

Для достижения поставленной цели в качестве основы для плотных питательных сред используют пластины полиакриламидного геля„

Для полулег»ия геля используют: тетраметилзтилдиамин, метилен-бис-акриламид, акрилаглид, персульфат аммония, дистиллированную воду.

Готовят 3 раствора: й, В, С.

Приготовление раствора й:5 мл тетраметилзтилдиамина добавляют к

995 мл дистиллированной воды.

Приготовление раствора В: к 350 мл дистиллированной воды, подогретой до 60 С, добавляют 7,35 г метилен-бис-акриламнда. После фильтрации через ватно-марлевый фильтр к данному. раствору добавляют 280 r акриламида, который -тщательно размешивают. Полученный раствор повторно фильтруют через ватно-марлевый фильтр и добавляют к нему дистиллированную воцу до 1000 мл.

Приготовление раствора С: в 25

1000 мл дистиллированной воды растворяют 1,4 г персульфата аммония.

Растворы и и В могут храниться

О в посуде из темного стекла при 4 С в течение 6-8 месяцев. Раствор С в 30 таких же условиях сохрайяет свою активность в течение 25-30 суток.

Получение пластин полиакриламидного геля осуществляют следующим образом. 35

Иэ основных растворов готовят рабочую смесь путем последовательного смешивания одного объема раствора ь, двух объемов раствора В и четырех объемов раствора С. 40

Приготовленную таким образом рабочую смесь заливают в щель заданной толщиныг например, 2,5-3 мм, образованную двумя чисть»гли стеклами на подставках плошадью от 1 см до 1 м

B более H оставляют при естественном или искусственном освещении на 1520 мин. За зто время происходит полимериэация рабочей смеси. После полимеризации верхнее стекло снимаютг а оставшуюся на нижнем стекле пласти- 50 ну полчакриламидного геля делят на более мелкие пластины заданной формы и размеров, например, на круглые пластины диаметром 7,5-8 см. Последние снимают со стекла и помещают 55 в дистиллированную воду на 1.,5-2 час для отмывания (c трехкратной сменой воды).

С целью использования пластин полиакриламидного геля в качестве основ 9) для плотных питательных сред, отмытые в дистиллированной воде пластины пропитывают питательной средой. Для этого пластины помещают в жидкую питательную среду, например, мясопептонный бульон» Yà aвыдерживают в ней 1 — 1, . час при комнатной температуре или 30 мин в термостате прн

37 С. За это время происходит полное насыщение пластин питательной средой (состав жидких питательных сред определяется видом исследуемых микроорганизмов).

После насыщения пластин питательной средой заданного состава их помещают в чашки Петри, стерилизуют паром под давлением или текучим паром {режим стерилизации определяется составом питательной среды), засевают исследуемыми микроорганизмами.

Выращивание микроорганизмов осуществляют по общепринятым методикам.

Пластины полиакриламидного геля для микрокультивирования микроорганизмов готовят толщиной 1,5-2 мм, разрезают на блоки заданной формы и размеров, например, квадратные, площадью примерно 1 см, отмывают в дистиллированной воде, стерилизуют паром под давлением, пропитывают стерильной жидкой питательной средой и используют для микрокультивирования.

Эффек тив ность питатель ных сред, где в качестве плотной основы были использованы пластины полиакриламидного геля, испытывалась на музейных культурах следующих видов микроорганизмов: Staphylococcus.aureus

209Р, E.co(i iJ"117, Е.со11 К3.2, Sh.

sonnei, Sh. f 8exneri, B. proteus гг 1, B.prîtåus ш1rabiEis 56=10, В.рУос»raneum 165, B.cereus 8035, В. mesentericus 1027, B. subtifis 83, В. megatherium 654, MyccpRasma oraL?i, Мусорг,аяша pneumoniae, Yycop(asma

fermentans

Изучались характер роста, форма и размеры колоний, количество биомассы, выживаемость, морфологические тинкториальные,биохимические и серологические свойства исследуемЫх микроорганизмов.

С целью приготовления питательных сред для выращивания 51аяЬ ЬОСОСcuB ou пь 209,Есор.» М-17,Е. соР» К-12, 5h. sorrr»e», Gh.Áå nå»-»,З. рийеггь и k,Ç.

pl o

Бб,З.се еиВ 80Ъ5,5. rr»eserrte r» cue 1027, В.91»Ы»6В.83,В.r»leuc»ther»um 654 использовался мясо-пепт он ный бульон . ,Цля приготовления питательных сред для выращивания МусОр» авг»»а orа 8», Mgcoyfosrr»c» рпеи »пап»ае, Mr)copfasmo»

1ептг»ег»г.а»па использовались следующие компоненты: триптический перевар сердечных мы»гц крупного рогатого скота с аминным азотом 160 — 170 мл — 7 вес.ч. i свежая нормальная лошадиная сыворотка без консерванта -2 вес.ч., свежий 25Ú-ный дрожжевой экстракт вес.ч., пенициллин — 500 ед на

1 мл среды.

659619

Выживае микроорган посева 0,5

100 клеток организма, ненциально среды с по

Посевная дода

КОЛОНИЕОбРоа

Э У«ОЩЙХ ЕДH H HLI, Среднее количество

ВЫРОСШИХ колоний

100

100

100

Б.f«I&g< 94fl< «off /// Озф

Б «"« . & О П П f. f

"а

/—

&h, f„Cxffefа«

З. г/««Ос а neff щ j«5

100

100

Формула изобретения мость исследуемых видов изучалась мл взвеси, содержащей исследуемого вида мйкровзятОгО э фазе экспо

ro рос-.à., на изучаемые следующей ннкубацней.

ВИД H щтамм микроорганизма

5+C«Phg СОСОССЦВ аи«аЕ05 209 P

E. СО8«М- «.7

E ccfPf К- «2

Э.сеген 3 8«/Ь5

З.п«ебе««-ег«cf/5 1027

"5. &U Qt« Ef f ЭЬ

Основными преимуществами полиакриламидного геля является то, что полиакриламидный гель как ;интетический препарат имеет известный и постоянный состав, не содержит посторонних примесей и веществ, задерживающих рост микроорганизмов, его легко получать. Полиакриламидный гель является высокопрозрачным препаратом, не требует осветления перед использованием.

Прн росте на сред-х с полиакриламидной плотной основой микроорганизмы не врастают в среду и не спаиваются с ней, что позволяет легко смывать их с поверхности среды и увеличивает вйход биомассы микроорганизмов,, свободной от примесей питательных сред.

Высокие диффузионные свойства полиакриламидного геля позволяют пропитывать его растворами, биологическими жидкостями и жидкими питательными средами любого заданного состава.

Упругость и зластичнОсть геля поз воляют рассевать микроорганизмы общепринятыми способами„

Термостабильность полиакриламидного геля позволяет стерилизовать его общепринятыми методами термической стерилизации.

Перечисленные качества полиакриламидного геля позволяют рекомендовать его использование в микробиолоgHHHflH Заказ 2120/6

Филиал ППП Патент, г.

Каждый опыт ставят в трех повторностях с последующим выведением средних величин по общепринятым методикам.

Результаты выживаемости исследуемых видов микроорганизмов представлены в табл. ги fee« o! практике в качестве Основы для плотных питательных сред.

Способ приготовления питательной среды для культивирования микроорганизмов на Основе полиакриламидного геля и питательного субстрата, включающий операцию стерилизации, о тл и ч а ю шийся тем, что, r. целью полуечения питательных сред, ОблаДающих уннверсальнОстью приме нения, предварительно полученный полиакриламидный гель отмывают водой с последующей пропиткой его питательны« субстратом до или после стерилизации.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Козлов Ю.A. ПнтатЕльные среды в медицинской микробиологии. И,, Иедгиз, 1950.

2. Иейнелл Дж., Ыейнелл Э.

Экспериментальная микробиология, м., Мир *968.

3. Тимаков В.Д., Гольдфарб Л.И.

ОСНОВЫ ЗКСПЕРИМЕНтадаьиой МЕДИЦИНСКОЙ микробиологии И., Иедгиэ, 1958.

4. Бабьева H.Ï., агре H.С, Практическое руководство по биологи« почв. Изд.Иоск.университета, 1971, с.134.

5 Патен- CffR 9 3046201 кл. 195-100, 1962.

Тираж 52 * Иожпиоиое

Ижооиож, а.ииоеитиаи,4