Способ получения вакцины против клещевого энцефелита

Способ получения вакцины против клещевого энцефелита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСЖОМУ Сви ИТИЗЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Р.ес публик

oi>660389 ( и ь (»"* (6! ) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 230377 (21) 2465987/28-13 с присоединением заявки Йо (23) Приоритет (51)М. Кл а

С 12 К 5/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 28.0280. Ькзллвтеиь Н9 8 ($3) УДЫ 615. 45 з

:615.371. .372 (088.8) Дата опубликования описания 28.0280 (72) Авторы изобретения

Л.Б ° Эльберт, А.В. Гагарина, В.П. Грачев, С.Г. Дроздов, Г.Л. Крутянская, М.К. Ханина, Н .Л. Кондратьева и И.Д. Сперанская (7!) Заявитель

Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов

АМН СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ BAKUHHH ПРОТИВ КЛЕЩЕВОГО

ЭНЦЕФАЛИТА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения противовирусной вакцины. 5

Известен способ получения вакцины против клещевого энцефалита путем выращивания вируса-возбудителя в монослое культуры эмбрионов кур с последующей инактивацией вируса !0 формалином и его осветления малоскоростным центрифугированием вирусосодержащего материала jl).

Однако известный способ не обеспечивает высокой иммунологической активности, чистоты и стабильности вакцины.

Целью изобретения является повышение иммунологической активности, чистоты и стабильности вакцины.

Эта цель достигается тем, что выращивание вируса проводят в объеме питательной среды 0,15-0,20 мл/см поверхности монослоя, содержащей (в вес.Ъ): 25

Натрий хлористый 0,64-0,68

Калий хлористый 0,035-0,045

Натрий фосфорнокислый двузамещенный двуводный 0.167-0.171 30

Калий фосфорнокислый одноэамещенHHA 0,0073-0,0077

Магний сернокислый семиводный О, 008-0, 012

Глюкоза 0,08-0,12

Феноловый красный 0,0018-0,0022

Натрий кислый углекислый 0,045-0,055

После инактивации вируса его выделяют в процессе равновесного зо- наль ного ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы от 8 до 60 вес.т с добавлением стабилизаторов, отбирают фракции от 33 до

47% сахаровы,затем их объединяют и разводят.до 1 10-1:30 исходного объема .

Способ осуществляют следующим образом.

Во взвесь клеток, трипсинизированных 9-10 дневных эмбрионов кур, вносят в виде суспензии мозга зараженных белых мышей вирус клещевого энцефалита штамм Софьин или любой другой, подходящий для изготовления вакцины.

Инфицированную клеточную взвесь разводят до концентрации 3 млн/мл

660389 питательной средой, состоящей из

О, 5Ъ гидролизата лактальбумина и

ЗЪ сыворотки крупного рогатого скота в солевом растворе Хенкса и высевают в 1-5-литровые круглые стеклянные бутыли, которые затем инкубируют при температуре 37 С в роллерной установке при скорости вращения 10-12 об/мин.

Через 20 ч, когда образуется плотный клеточный монослой, питательную среду удаляют, культуру ткани промывают. буферным солевым раствором следующего состава (вес. Ъ) NaCB

0,66) КС8 0,04р Ба НР04 2Н О 0,169 у

КН 2Р04 О, О О 75; MgS04 7Н 0 О., 01; глюкоза О, 1 у феноловый красный О, 002;

NaHCOg О, 05; рН 7, 7-7,8.

Затем в бутыли заливают поддержив аюшую питательную среду в к оличестве 0,15-0,2 мл на 1 см поверхности клеточного монослоя. Среда состоит из аминокислот и витаминов соответственно рецептуре среды

199 Паркера, человеческого альбумина в концентрации 0,1 - и солей соответственно составу указанного буферного солевого раствора, рН среды 7, 7-7, 8. 25

Через 40-48 ч инкубации при 37 С в роллерной установке в бутыли вно-. сят стеклянные бусы, встряхивают до полного разрушения клеточного монослоя и затем переносят содержимое в подходящие емкости ° При хорошем качеств е культуры ткани производят двойной сбор вирусосодержащего материала: через 20-24 и 40-48 ч. В этом случае .производят полную замену поддерживаюшей питательной среды после первого сбора, клеточный монослой разрушают при втором сборе.

К собранному материалу прибавляют формалин в концентрации 0,05Ъ, смесь HHKy6HpyloT для инактивации ин- 40 фекционности при 32 С в течение 72 ч, После этого материал подвергают предварительной очистке методом проточного центрифугирования при 600010000 g, а затем концентрируют и 45 освобождают от белковых и других примесей на проточной ультрацентрифуге методом равновесного зонального ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахароэы 8-60 вес. Ъ, фактор разделения 90000 g. Ðàñòâîðû сахарозы готовят на буфеое слел ющего состава: М (моль) NaC8, О, 1;

Ма НР04-КН Р04 О, 01; в ерсен О, 001 .

К этому раствору для стабилизации вирусных антигенов прибавляют формалин 0,05Ъ и человеческий альбумин

Oil Ъ.

После того как весь материал пропущен через ротор ультрацентрифуги, я) вращение ее поддерживают в том же скоростном режиме еще 1 ч, затем вращение замедляют или прекращают. полностью и фракционно извлекают содержимое рот opa . После р ефрак тоПредлагаемый способ обеспечивает получение вакцины повышенной иммуногенности, очищенной от белковых и других примесей, стабильной в процессе хранения и транспортировки.

Формула изобретения

Способ получения вакцины против клещевого энцефалита путем выращивания вируса-возбудителя в монослое культуры эмбрионов кур с последующей инактивацией вируса формалином и его осветления центрифугированием вирус ос од ержащ его ма т ериала, о т л ич а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения иммунологической активности, чистоты и стабильности вакцины, выращивание вируса проводят в объеме питательной среды 0,15О, 20 мл/см пов ерхности монослоя, и содержащей (в вес. Ъ):

Натрий хлористый 0,64-0,68

Калий хлористый 0,035-0,045

Натрий фосфорнокислый двуэамешенный двуводный

Калий фосфорнокислый одноэамещенный О, 0073-0,0077

Магний сернокислый семиводный 0,008-0,012

Глюкоза 0,08-0,12

Феноловый красный 0,0018-0,0022

Натрий кислый углекислый 0,045-0,055 псъсле инактивации вируса его выде0,167-0,171 метрического определения концентрации сахароэы в полученных фракциях отбирают те, которые содержат от

33 до 47.вес. -o сахароэы. Эти фракции объединяют и разводят средой 199

Паркера таким образом, чтобы конечный объем составил 1:10-1:30 от объема всего использованного для ультрацентрифугирования вирусосодержащего материала, прибавляют, Ъ: желатин 1,0; амино-пептид АП-5 5, О; формалин 0,05 и мертиолат 0,01, разливают во флаконы или ампулы, замораживают при температуре ниже точки эвтектики и подвергают лиофильному высушиванию.

Полученный препарат является готовой формой вакцины клешевого энцефалита культуральной, очищенной, концентрированной, убитой, сухой для профилактики заболевания людей. Вакцину хранят и транспортируют в этой форме и непосредственно перед употреблением растворяют специальным растворителем, содержащим в дистиллированной воде 1-2 мг/мл гидро ок ис и алюмини я .

Вакцину вводят под кожу в объеме

0 5-1,0 мл.

660389

Составитель С. Малютина

Техред М.Келемеш Корректор E. Папп

Редактор Н. Белявская

Заказ 10066/6 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,4 ляют в процессе равновесного зональ ного ультрацентрифугирования в град и ен т е плот н ос ти с ахароэ ы от 8 до

60 вес .В с добавлением стабилизаторов, отбирают фракции от 33 до

473 сахарозы, затем их объединяют

1 и разводят до 1:10-1:30 исходного объема.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

5 9 167967, С 12 К 5/00, 1964.