Способ получения аллергена

Способ получения аллергена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

<1 663405

Союз Советских — Социалистимеских

Республик ет !

Yl, t (61) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 02.07.76 (21) 2381070/28 — 13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) М. Кл.

А о1 К 39/00

Государствениь1й хомотет

СССР оо делам азооретений н открытий

Опубликовано 25.05.79 Бюллетень уе 19

Дата опубликования описания 25.05.79 (53) УДК 615.45:

: 576.8.097.2 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. М. Климова и С. М, Лихолетов

Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА тО

Изобретение относится к микробиологии, а именно к способам получения аллергенов, оно может быть использовано для диагностики особо опасных глубоких микозов у людей и животных.

Известен способ получения аллергена для диагностики кокцидиоидоза путем выращивания кокцидиоидного гриба на питательной среде с последующим выделением целевого продукта (1).

Однако известный способ не обеспечивает получения аллергена с высокими активностью и специфичностью (активность его составляет

26 мкг в 1 кожной дозе по сухому весу).

Цель изобретения является повышение активности и специфичности аллергена.

Эта цель достигается тем, что гриб выращивают на плотной питательной среде в артроспоровой фазе, целевой продукт выделяют 20 экстракцией из среды, затем концентрируют высаливанием, концентрат диализуют и лиофи лизируют.

Способ осуществляют следующим образом.

Гриб Coccidioides immitis 36 — $ (Сильвейра) выращивают в течение 29 — 35 дней при 2830 С в матрицах на плотной среде Сабуро.

Выросшую грибницу и артроспоры удаляют, смывая водой и соскабливая шпателем. Полное удаление артроспор с агара не обязательно.

Внеклеточный материал артроспор гриба экстрагируют из разрушенного шпателем на мелкие кусочки агара 0,9%-ным раствором хлористого натрия в течение 6 суток при 28—

30 С периодически встряхивая.

Экстракт отделяют от агара на марлевом фильтре и обезвреживают формалином (0,5%-ным) в течение 48 ч, После высева на стерильность и нодщелачивания экстракта до рН 8,5 антиген высаливают сернокислым аммонием (516 г на 1 л экстракта), Осадок растворяют в дистиллированной воде, примесь сернокислого аммония удаляют диализом сначала против водопроводной воды (4 суток), а затем дистиллированной (24 ч). Препарат лиофилизируют, проверяют на активность, 663405

Составитель С. Малютина .

Техред С.Мигай

Корректор Г. Рещетннк

Редактор О. Кузнецова

Тираж 671: -.:--.=.. "- -= Подписное

UHHHHH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 2820/4

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 ! специфичность, безвредность и стерилиэуют, фильтруя через миллипоровые фильтры (диаметр пор 0,4 — 0,6 мкм), и разливают в ам- . пулы по 10 кожных доз. Одна кожная человеко-доза составляет 10 единиц общего азота или 1 мкг сухого препарата.

Полученный описанным способом аллерген вызывает у зараженных кокцидиоидным грибом морских свинок аллергические реакции при внутрикожном введении в минимально активной дозе 1 мкг/0,1 мл. У зараженных возбудителями гистоплазмоза и бластомикоза, а также у контрольных животных кожные про бы были отрицательными.

Аллерген в сухом виде представляет собой аморфный йорошок -светло- желтого цвета, лег. ко растворимый в воде, содержание белков, йуклейноййх -кислот, -йипйКоЪ--и-полисахаридов соответственно 25, 24 и 47%. Остаточная влажность составляет 4%. Препарат нетоксичен при внутрикожном и внутрибрюшинном введении (белым мышам и морским свинкам).

При испытании на людях (53 добровольца) аллерген в дозе 10 мкг в 0,1 мл 0,9% хлористого натрия на апирогенной воде не вызывает неспецйфических реакций.

Предлагаемый способ обеСйечивает йолучение спецйфического аллергена, активность которого в 19 — 20 раз превышает активность известного, а стоимость производства меньше в 3 раза. Воэможность лиофильного высушийания предлагаемого аллергена упрощает его ,концентрирование, стабилизацию и стандартиэацйю по сухому весу и в единицах общего азота в 1 кожной дозе. Предлагаемый аллерreH можно использовать для аллергических реакций как Ь vivo, так и Ih ч1тго.

Формула изобретения

Способ получения аллергейа для диагностики кокцидиоидоза путем выращивания кокцидиощщого гриба на питательной среде с последующим выделенИем целевого продукта, о тличающийся тем,что,сцелью

" повышения активности и специфичности аллергена, гриб выращивают на плотной питатель20 ной среде в артроспоровой фазе, целевой продукт выделяют экстракцией из среды, затем концентрируют высаливанием, концентрат диализуют и лиофилизируют.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Smith С. E., Saito E. Т., Beard R.R., Rosenberg 3. G., Beard R. R. and Saito IN. IN.

The use of coccidioidin. Amer, Rev. Tuberc

1948, 54, 4, р. 330-360.