Способ получения ферментного препарата гигролитина

Способ получения ферментного препарата гигролитина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Ф

H. H. Момот, Э. В. Васильева, О. Г. Полатовская, М. А. Малков

А. В. Прокопович, О. B. Кондратьева, О. С. Столыпин, Б. В. Москвичев, A. П. Кашкин и В. С. Нынь (72) Авторы изобретения (7I ) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА

ГИГРОЛИТИНА

Изобретение относится к медицинской

/ промышленности, в частности к производству ферментов медицинского назначения.

Известны способы получения протеолитического фермента гигролитина, однако этими способами нельзя получать хорошо очишенный препарат с достаточно высоким выходом.

Известен способ получения гигролитина из фильтрата культуральной жидкости Ас

tinorngcee hggrebco cuS предусматривающий обработку фильтрата сульфатом аммония, после чего полученный осадок растворяют в воде и осаждают охлажденным ацетоном, осадок отделяют и растворяют в 30%-ном водном растворе охлажденного, ацетона, осаждают целевой продукт 10 обьемами ацетона и последовательно о ппцают хроматографией на сефадексе типа Г-75, llEAE А-50 и Г-15, 20 при этом очистку фермента проводят в присутствии 0.001 моль раствора хлористого . кальция(1),.

Наиболее близким по технической сушности к предлагаемому является способ получения антигельминтного антибиотика гигромицина, предусматриваюший культивирование продуцируюшего его фермента на питательной среде, согласно которому от кулътуральной жидкости последователь» но отделяют мицелий, ионы кальция в виде фосфатов, гигромицин В сорбцией на .катионите,.гигролитин высалива3от сульфа-. том аммония, переосаждают низшими спиртами, обрабатывают активированным углем и лиофильно высушивают. Обший вы ход гигролигина 5-6%, активность 2 ПЕ/мг препарата (2 .

11ель изобретения - разработка направленного биосинтеза гигролитина, сокрашение длительноСти технологического процесса, повышение выхода и улучшение качества целевого продукта.

Йля достижения поставленной цели культивирование проводят при 31-33 С о в течение 72-108 ч, высаливание фермен. . га ведут после отделения мнцелия допол6637 1 5

Составитель И. Привалова

Редактор О. Кузнецова ТехредС. Мигай Корректор E. Лукач

Заказ 2922/21 Тираж 525 Подписное

ЦНИИПЙ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб. tl. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 иителькым введением хлористого кальция

s количестве 0;5-1% от его объема, после чего осуществляют удаление примесей эквивалентным количеством целлюлозы и алюмоаммонийных квасцов при рН 4,85,0, при этом гигромицин удаляют непосредственно перед сушкой препарата.

Способ осуществляют следующим образом. 10

Процесс ферментации AetillotllgLQs ИуЦРебсоКи00 проводят в аппаратах емкостью 2000 л на среде известного состава

0 при температуре 31-33 С, аэрации

0,4 об/об среды в 1 мин в течение 96 ч. 5

Протеолитическач активнооть культуральной жидкости достигает 35 ПЕ/мл, содержание гигромицина Б 70 ЕД/мл.

Полученную культуральную жидкость фильтруют, затем к 100 л фильтрата добавляют 607 сульфата аммония и 5«1% хлористого кальция в виде 307-ного раствора, при температуре .5 С. Выход фермента на стадии высаливания 90%. Осадок !

5 растворяют в воде, активность раствора

300 ПЕ/мл. К раствору гигролнтина добавляют целлюлозу (в виде 2 -ного раствора в количестве 0,3%), с эквиваленгным количеством алюмоаммонийных квас30 цов, при значениях рН реакционной смеси

4;8. После отделения целлюлозы раствор фермента разбавляют дистиллированной водой до 100 ПЕ/мл, добавляют активированный уголь марки ОУ в количестве

37, рН раствора устанавливают 7,0. Пос- ле отделения угля экстракты пропускают через карбоксильный катионит КБ-2 или

КБ-4П2 для удаления возможных следов гигромицина Б и лиофильно сушат.

Общий выход фермента с активностью

3-5 ПЕ/мл составляет 30%, считая на нативный раствор.

Формула изобретения

1. Способ получения ферментного препарата гигролитина, предусматривающий культивирование продуцирующего его фермента на питательной среде, отделение мицелия и ионов кальция, сорбцию сопутствуюшего фермента гигромицина на карбоксильных катионитах, высаливание фермента сульфатом аммония, переосаждение его, обработку активированным углем и сушку препарата, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью обеспечения направленного бносинтеэа гигролитина, сокрашения процесса его получения и повышения качества целевого продукта, культивирование проводят при температуре 31о

ЗЗ С в течение 72-108 ч; высаливание фермента ведут после отделения мицелия и осуществляют удаление примесей эквивалентным количеством целлюлозы и алюмоаммонийных квасцов при рН 4,8-5,0, при этом гигромицин удаляют непосредственно перед сушкой препарата.

2. Способ по и. 1, о т л и ч а юш и и с я тем, что при высаливании фермента в нативный раствор вводят хлористый кальций в количестве 0,5-1% от его объема.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

¹ 507058, кл. C 12 Д 9/14, 1972.

2. Авторское свидетельство СССР

¹ 508074, кл, С 12 Д 9/10, 1970.