Способ получения м-крезотиновой кислоты

Способ получения м-крезотиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

!

444

H. М. Исмайпов и Э. N. Абдуплаева (72) Авторы изобретения

Сектор микробиологии АН Азербайджанской ССР (71) Заявитель

I (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ М-КРЕЗОТИНОВОЙ КИСЛОТЫ

ОН

ОООН

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения м-крезотиновой (4-метилсапициловой) кислоты, используемой в пищевой и химической промышленностях в качестве физиологически активного ве3 шества.

Известен способ получения м-крезотиновой кислоты окислением 2-метилнафталина при помощи микроорганизмов; в жидкой среде с последующим выдепением целевого продукта (l j. Однако такой способ не позволяет получать м-крезотиновую кислоту с боль1$ шим выходом. Процесс осушествпяется культурой бактерий, растущей на 2-мета нафталине. Концентрация 2-метипнафталина в среде высокая и составляет 5 г/л.

Выход м-креэотиновой кислоты очень низкий и достигает 0,065 г/п, что составляет 1,37 от заданного субстрата.

Процесс осуществляется,h среде с использованием большого количества ми2 нерапьных солей и 0,1% дрожжевого а кс тракта.

11елью изобретения является повышение выхода м-крезотиновой (4-метилсал ициповой) кислоты.

Это достигается тем,что из микроорганизмов, окиспяюших 2-метилнафтал ин, испол ьэуют штаммы (CanChda ste_#_atcridea

ВКМУ-923 ипи бэпсйаа фиИ1Е топе

В КМУ-9 16.

Сущность способа завтючается.в том, что использование штаммов C&nibda ete0&taidea ВКМУ-923 Canada guifbermondii ВКМУ-916 позволяет осуществлятьь оксигеназную реакцию окисления с расщеплением. неэамешенного бенэольного кольца 2-метипнафтапина с образованием и накоплением в реакционной среде практически чистой м-крезотиновой кислоты по схеме:

663717

2-метил нафтал ин

UHMHHH Заказ 2922/2.1 Тираж 525 Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 м-креэотиновая (4-метилсал ицилова я) кис лота

Процесс осуществляют отмытыми клетками дрожжей +ndida, выращен- 5 ными на сусло-агаре в среде с фосфатным буфером при низкой исходной концентрации 2-метил нафтал ина — О,О 940,1% (0,94-1,0 г/л) при выходе продукта трансформации — м-крезотиновой кислоты в среднем до 26-32,0%.

Направленную трансформацию 2-метилнафталина в м-крезотиновую кислоту осуществляют с помощью штамма Candida

МИХсэби4ео ВКМУ 923 и Сапд да

ДюИ ег гпопс6т В КМУ-9 16 ., которые хранятся во Всесоюзйой коллекции микроорганизмов (г. Москва), а также в

Секторе микробиологии АН Азербайджанс- кой CCP. Культуры поддерживаются на

20 сусло-crape.

Пример 1. Гуспензию клеток

Ccedida ste(fatcvidea ВКМУ-923 вырашивают на сусло-агаре, двухсуточ25 ную культуру смь|вают с поверхности сусло-агара, дважды промывают фосфат- ным буфером, рН 5,4-5,6. Суспенэию отмытых клеток инокулируют в колбах

Эрленмейера в реакционную среду, состоящую из К- Нс1 -фосфатного буфера, Зо (рН 5,4) и О, 1% 2-метилнафталнна. Колбы инкубируют на качалке при 30 С и

200 об/мин. Изменение концентрации м-крезотиновой кислоты наблюдают с помощью хроматографии. К 100-1 10 часу в среде накапливается максимальное количество м-креэотиновой кислоты.

М-крезотиновую кислоту выделяют из подкисленной до рН 2,0 реакционной сре40 ды экстракцией серным эфиром после отделения клеток центрифугированием. Из эфирного экстракта целевой продукт вы- . деляют обработкой 5%-ным водным раст« вором бикарбоната натрия в делительной

45 воронке. Водный слой бикарбоната после отслаивания отделяют от эфирного, подкисляют до рН 2,0 раствором серной кислоты. Из подкисленного раствора мкрезотиновую кислоту экстрагируют сер50

" ным эфиром. После отделения от водной фазы эфйр высушивают над хлористым кальцием и перегоняют на роторном ис« парителе. В остатке выделяют практически чистую м-креозотиновую кислоту с выходом до 0,25-0,3 г/л нли 26,532% от заданного субстрата.

Препаративно выделенное вещество .имеет Rf -0,85 при хроматографировании на пластинках Sifufef -254 в системе бензол-диоксан-уксусная кислота 90:25:4

Вещество представляет собой кристаллы.

УФ-м ИК-спектры идентичны спектрам м-крезотиновой кислоты.

Пример 2 „Суспензию выросшей на сусло-агаре культуры Сапд1бо ДОтfbermorlcHi ВКМУ-916 засевают в колбы на 750 мл с 50 мл фосфатного буфера рН 5 4 н добавляют 0,05 г

2-метипнафталина. Колбы инкубируют на качалке. К 72 часу культуральную жидкость центрифугируют и анализируют . аналогично примеру 1. Выход м-крезо тиновой кислоты 0,27-О,30 г/л (28 32% заданного субстрата).

Использование пре дпагаемого способа позволяет увеличить выход м-крезотиновой кислоты до 26,5-32% (по сравнению с выходом 1,3% при известном способе.

Процесс ферментации ведется в среде, содержащей в 5 раэ меньшую концентрацию трансформируемого субстрата. Он: также ведется в простой буферной среде, что экономит значительное колйчество разнообразных минеральных солей.

Формула изобретения

Способ получения м-крезотиновой кислоты окислением 2-метнлнафталина при помощи микроорганизмов в жидкой среде с последующим выделение целевого продукта, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения выхода, кислоты, из микроорганизмов, окисляюших

2-метилнафталин, используют штаммы Ccedida steMatoideo ВКМУ-923 или

Саесйбо фиГбе гпопбй

ВКМУ-9 16.

Источники информация, принятые во вниманиеи при экспертизе

1. 6. 4ifami Т.Om0r 1, У.МтгвДеи, К.2опю0а, + . Ь4оГ . С? еп . 1974, 28,2, с. 401-408.