Способ дифференциации бруцелл

Способ дифференциации бруцелл

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

пц664994

П, И -.()Втеки -,,Н И

Союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 04.08.77 (21) 2515515/28-13 с присоединением заявки Ме (51) М. Кл.

С 12К 1/04

СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.093.

i .31 (088.8) Опубликовано 30.05.79. Бюллетень Ме 20

Дата опубликования описания 30.05.79 (72) Авторы изобретения

М. М, Ременцова и Т. А. Грушина (71) Заявитель

Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БРУЦЕЛЛ ПУТЕМ

ПОСЕВА КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛ

Государственный комитет

23 Приоритет

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для диагностики бруцелл.

Известен способ дифференциапии бруцелл путем посева культуры бруцелл на питательные среды с последующим инкубированием посевов и определением видовой принадлежности бруцелл.

Од како известный способ является трудоемким, громоздким и не обеспечивает быстроты дифференциации Brucella melitensis от других видов бруцелл.

Цель изобретения — упрощение и ускорение дифференциации Brucella melitensis от других видов бруцелл.

Эта цель достигается тем, что культуру бруцелл засевают на питательную среду, содержащую, г/л мясо-пептонного бульона:

Глутаминовая кислота 3,7 — 6,2

Двузамещенный фосфорно-кислый калий 0,5 — 0,75

Лимонная кислота 1,25 — 3,7

Сернокислый магний 0,5 — 0,75 Келезоаммониевьтй цитрат 0,05 — 0,075

Агар Дифко 1,25 — 3,7

Глицерин 23,6 — 39,4

Аминопептид 101,5 — 152,2 и определяют Brucella melitensis по наличию кольца на глубине 1 — 2 мм от поверхности среды через 20 — 24 ч инкубирования и второго кольца на глубине 20 — 25 мм на

14 сутки инкубирования.

Для осуществления способа готовят диф5 ференциально-диагностическую среду. В

1 л подогретого мясо-пептонного бульона последовательно растворяют 5,0 г глутаминовой кислоты, 0,62 r двузамещенного фосфорно-кислого калия, 2,5 г лимонной

10 кислоты, 0,62 г сернокислого магния, 0,062 г железоаммониевого цитрата, 31,5 r глицерина. Раствор регулируют с помощью 1 н. NaOH до рН 7 0 — 7 2, после этого добавляют 2,5 г агара

15 Дифко, смесь доводят до кипения до полного растворения агара, Готовую среду разливают по 4,0 мл в стерильные пробирки, которые закрывают ватно-марлевыми пробками, и стерилизуют при 0,6 атм 30 мин.

20 Правильно приготовленная среда должна быть гомогенной и прозрачной.

Идентификацию Brucella melitensis проводят следующим образом.

Исследуемая культура должна быть в

25 S- или R-форме. Смешанная популяция не допускается. Это условие обязательно при выполнении всех известных способов дифференциации.

Перед посевом среду в пробирках рас30 плавляют на водяной бане, остужают до

664994

Составитель С. Малютина

Техред А. Камышникова Корректор P. Беркович

Редактор М. Дмитриева

Заказ 1142/11 Изд. Хв 366 Тираж 548 Подписное

НПО <: Поиск» Государственного комитета СССР по делам изооретенпй и открытий

113035, Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

50 С и содержат при этой температуре в процессе работы. В стерильных условиях в каждую пробирку. добавляют О, 5 мл аминопептида и 0,5 мл 3-миллиардной взвеси двухсуточной культуры бруцелл в 1 мл физиологического раствора по стандарту мугности для бруцелл. Содержимое пробирки тщательно перемешивают. Для искл,очения случайных погрсшностей каждую исследуемую культуру засевают нс мспес чем па

3 пробирки ср "ды. Для поссва наряду с эталонными штаммами (Br. melitensis 16М, Br. abortus 544, Br, suis 1330, Br. neotomae

62/2 Вг. cauis 1066, Вг. ovis 63/290) используют культуры бруцелл, выделенные от людей и от животных. После посева пробирки оставляют при комнатной температуре до застывания aràðà, затем запаивают пробками, смоченными расплавленным парафином. Посевы инкубируют при 37 С.

Учет результатов проводят через 20 — 24 ч и ежедневно в течение 14 суток.

Через 20 — 24 ч Brucella melitensis всех биотипов образуют ростовое кольцо толщиной 2 — 3 мм, расположенное на глубине среды в 1 — 2 мм от поверхности. В отличие от Br. melitensis бруцеллы других видов через 20 — 24 ч растут в непосредственной близости к поверхности, прорастая в глубину среды на 1 — 2 мм, ростового кольца на глубине не образуют. Через 1,5 — 2 суток различия в характере роста бруцелл сглаживаются и вновь окончательно формируются к 14 суткам. Это выражается в том, что только Br. melitensis прорастают на глубину 20 — 25 мм, постепенно формируя второй ростовой слой — кольцо осаждения в глубине среды, в то время как другие испытуемые виды бруцелл прорастак>т на глубину, значительно меньшую (5 — -7мм) и пе формируют второго ростового слоя — кольца осаждения.

Все испытуемые штаммы бруцелл парал5 лельно дифференцируют стандартными методами. Результаты идентификации Br. melitcnsis прсдлагасмым способом и стандартными методами совпали в 1000 случаев.

Предлагаемый способ идентификации

10 бр, целл обеспечиваст auaчитсльпос упрощспис и ускорение исследований. Доступен любой практической лаборатории.

Формула изобретения

15 Способ дифференциации бруцелл путем посева культуры бруцелл на питательные среды с последующим инкубированием посевов и определением видовой принадлежности бруцелл, отл и чающий с я тем, 20 что, с целью упрощения и ускорения дифференциации Brucella melitensis от других видов бруцелл, культуру бруцелл зассвают на питательную cpeN, содержащую, г/л, мясопептонного бульона:

25 Глутаминовая кислота 3,7 — 6,2

Двузамещенный фосфорно-кислый калий О, 5 — 0,75

Лимонная кислота 1,25 — 3,7

Сернокислый магний 0,5 — 0,75

30 5Келезоаммониевый цитрат 0,05 — 0,075

Агар Дифко, 1,25 — 3,7

Глицерин 23,6 — 39,4

Аминопептид 101,5 — 152,2

35 и определяют Brucella melitensis по наличию кольца па глубине 1 — 2 мм от поверхности среды через 20 — 24 ч инкубирования и второго кольца на глубине 20 — 25 мм на

14 сутки инкубирования.