Синтетическая питательная среда для выращивания штамма дрожжей @ @ 21-продуцента глюкоамилазы

Синтетическая питательная среда для выращивания штамма дрожжей @ @ 21-продуцента глюкоамилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

С(„АЛОЭ СОВЕТСКИХ ШФЦ

РЕСПУБЛИН (1% (И) 1(5B C 12 Н 9 34

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

) ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.(21) 2508981/28-13 (22) 21.07.77 (46) 07,10.83 Бюл 9 37 (72) Л.Д. Волкова, Н.С. Егоров . и В,Л. Яровенко (71), Всесоюзный научно-исследовательский институт продуктов брожейия (БЗ) 577 ° 151 (088.8) (56) 1. Hattori Y, Agriciltural and

Biological Chemistoly 1961, Ч 25; ю 10, р. 738.

2. Волкова Л.Д. и др .. Влйяние различных соедийений серы на рост

Прикладная биохимия и микробиология, l3, 2, 1977, март с. 281 - 284 (прототип).

" дрожжей Епдощусорз1в Еibuligera и биосинтез глюкоамилазы (54) СИНТЕТИЧЕСКАЯ "СРЕДА ДЛЯ ВИРИЦИ-

BAHHR lllTAl4NA JIPQKKEA EN60MYCOPSIS

FIBULIGERA 2 1ПРОДУЦЕНТА ГЛЮКОАИИЛАЗЦ м (57.) СинтетичеСкая питательная среда для выращивания штамма дрожжей Endo

mycopsis Й1Ьи1igera 21 - продуцента глюкоамилазы, содержащая источники углерода, азоте, минеральные соли:

KHaPO< M9SO4.7НуО, CaCI2, ZnSOs.7Н .О, Fe O< 7Н20, Мв804. 4Н20, DL — метионин витамнныг биотин, тиамин, пирндоксин и воду, отличающаяся тем, что, с целью повнаения глюкоаминолазной активности, в качестве источника углерода она содержит смесь глицерина с молочной кислотой, а в качестве источника азота (НН4)2 ИРОДА при следующем соотношейии компонентов, sec.В:

Глицерин 1,4-1,5

Молочная кислота 1,0-1,1 (NH4)> flPO4 0,6"0,7

NgSO+ 7820 0.,03-0,05 Е

СаС1 0,03-0,05

ZnSO< 7Н2О 0,005-0,002 .Ре$04 78 0 0,005-0,002

МпБО 4020 .0,0001-().,0005 - Сф . DL-метионин 0,0013-0,0017 по .сере . Я

Биотин . 0 000001-0 000005

Тиамин 0,000005-0,000002

Пиридоксий;0,00001 0,0001

Вода Остальное

665690

Целью изобретения является разработка синтетической среды, обеспечивающей повышение глюкоамилазной 45 активности Endomycopsis fibuligera 21

Это достигается тем, что в .качест,ве источника углерода среда содержит смесь глицерина с молочной кислотой, 50 а в качестве источниха азот а (NH4) HPO4 при следующем соотношении компонентов, вес. %:

Глицерин 1,4-1;5

Молочная

::кислота .1,0-1,1

ЫН / НРО 0,б-0,7 55

КН2РО4 0,8-1,0

МдЯ04 7Н. О 0,03-0,05

СаС1 0,03-0,05

ZrP04 7H)0 0 0005-0,002

FeS04. 7Н О 0,0005-0,002

МпБ04 4Н О 0,0001-0,0005

DL-метиойин 0,0013- 0,0017 по се- ре скотин, 0,000001-0,000005

Гиамин 0,000005-0,00002 65

Изобретение относится к микробно логий, а именно к синтетическим питательным средам для выращивания дрожжей-Endomycopsis fibuligera 21 с целью получения глюкоамилазы.

Известна синтетическая питатель- 5 йая- среда для культивирования дрожжей Endomycopsis fibuligera †.продуцентов глюкоамилазы. Она содержит в качестве источййка углерода — глюкозу 3,0% источника азота — Н4С1 0,3%, 10 соли! KÍ2Ð040,2%, М С12 бн20 0,25%, СаС1 2Н О 0,0025%, РеС1 О,0005%; цитратны3 буфер: К СБН О Н О 0,25%, С6Н О ° Н20 0,05%, источнйк серысерусодержащую аминокислоту (DLметионин, Ь-цистин, L-цистеин или глутатион) 0,0001% по сере, витамины: биотин 0,000005%, тиамин 0,0001%, - пиридоксин 0,0001% и воду (11.

Однако на указанной среде рост дрожжей Endomycopsis fibuligera был крайне слабым, а данные по глюкоамилаэной активности, образуемой при развитии этих дрожжей на синтетичес-, кой среде, отсутствуют.

Из известных синтетических питательных сред наиболее близкой по своему составу. является среда, содержащая в качестве источника углерода крахмал 2%, азота — лимоннокислый ам моний 0,87%, соли КН Р04. 0,9%, К2НР04 0,105%, СаС12 D,005%, Жд С12 бн20 0,05%, Геев 0,001%, ZnCI > О, 001%,MnCI 4Н20 0,0005%, источник серы - серусодержащую амино- . 35 кислоту (DL-метионин, L-цистеин, L- цистин или глутатион) O,OOD02%, пиридоксин 0,0001% и воду (2).

Однако недостатком данной среды является довольно низкая активность,40 получаемой глюкоамилазы.

Пиридоксин 0,00001-0,0001

Дистиллированная вода остальное

Начальный рН 5,5-6,0 (устанавливается с помощью KOH).

Использования среды в лабораторных условиях.

Посевным материалом служит 36-48часовая глубинная культура, выращен-:. ная в среде, содержащей следующие компоненты, %: крахмал 1,0, глюкозу

0,5, кукурузный экстракт 1,0 КН РО

0 5.

/ 2 +, Инокулюм вносят в количестве О, 52% в предлагаемую синтетическую среду следующего состава, вес.%:

Глицерин . 1,5

Молочная кислота 1,0 (ИН4)2 НР04 0,7

КН2Р04 0,8

МдЯО 7Н О 0 05

СаС12 (), 05

ZnS0+ 7Н20 0,001

FeS04 7Н20 0,001

МпБО4 4Н20 0,0005

DL-метионин 0,0015$no сере

Био т ин 0,000001

Тиамин 0 000005

Пиридоксин 0,00001

Дистиллированная вода Остальное

Вы iащивание Endomycopsis fibuligera 21 проводят в течение 4-4,5 суток в колбах Эрленмейера на 750 мл, содержащих по 50 мл среды, на качалке при 30 С.

Предлагаемая среда обеспечивает накопление глюкоамилаэной активности, составляющей 37-42 ед/мл при определении гостированным глюкозооксидазным методом, Эта величина активности не уступает глюкоамилаэной активности, получаемой при развитии названного штамма на оптимальной среде, содержащей следующие компоненты вес. %: соевую муку 8,0, кукурузный экстракт 4,0, растворимый крахмал 1,6, КН РО 0,06, НН Н Р04.

0,16 и превосходйт активность йа известной синтетической среде в 1,5-2 раза, Следует, заметить, что прй выра-. щивании Endomycopsis 1 ibuligera 21 на ., предлагаемой синтетической.среце не образуется L-амилаза и трансгликогилаза.

Последний фермент значительно понижает выход глюкозы иэ к эахмалистого сырья вследствие образования олигосахаридов с g -1,6 связями, плохо ги11ролизуемых;глюкоамилаэой.

Синтетическая среда может с успе-. хом использоваться для выращивания дрожжей Eridomycopsis fibuligera 21 с целью получения очищенной глюкоамилазы..Известно, что выделений препап; ратов ферментов из культуральных жидкостей продуцентов, выращенных на синтетических средах; значительно упрощает очистку белков.