Способ выявления столовых кроветворных клеток костного мозга

Способ выявления столовых кроветворных клеток костного мозга

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сеез Севетскни

Сеар алнсткчески к

Республик

<")665915

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

Б с

» (61) Дополнительное к авт. свмд-ву1

) (22) Заявлено 200776 (2l) 2390517/28-13 (51)М. Кл.2 с прнсоедименмем заявки М (23) Приоритет

A 61 К 35/28

G 01 N 33/16

Государственный комнтет

СССР по делам нзобретеннй н открытнй (53) УДК 611-018.1 (088. 8) Опубликовано 050679 Бюллетень йо 21

Дата опубликования описания 0506.79

»» » Ь »Ъ. »м» »»Я» (72) Авторы

ИЗ(16(ЖтФНИЯ 3.A. Бутенко К.П.Зак, М.A Áàðàíoâñêèé и В.И.Величко (71) 3aaswesb Институт проблем онкологии АН украинской ССР (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ CTBOJIOBblX KPOBETB0PHbIX

КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА. Изобретение относится к медицине и может быть использовано в онкологии, иммунологии, зндокринологии, радиобиологии, цитологии и гематологии.

Известен способ выявления стволовых кроветворных клеток костного мозга путем парантерального введения в организм биологически-активного вещества с последующим извлечением тка- 1О ни костного мозга и электрономикроскопирования (1).

Однако известный способ не позволяет точно выявлять стволовые крове .творные клетки костного мозга.

Целью изобретения является повышение точности способа путем разрушения морфологически сходных с ними лимфоидных клеток.

Эта цель достигается тем, что в качестве биологически активного вещества вводят гидрокортизон иэ расчета 250 мг на 1 кг веса.

Способ осуществляют следующим образом. Гидрокортиэон иэ расчета

250 мг на 1 кг веса вводят парентеральным путем в организм ежедневно не менее 5 дней. При этом после первой инъекции гормона наступают значительные характерные изменения в пимфоцитах, с последующей их деструкцией и поглощением макрофагами. При повторных введениях гормона происходит выраженное торможение образования лимфоидных клеток и снижение их количества.

Максймальное снижение лимфоцитов в костном мозгу наступает через 72 часа после последнего введения гидрокортизона. Извлеченные через этот промежуток времени клетки костного мозга, несмотря на снижение количества кариоцитов и особенно лимфоцитов, обладают высокой колониеобразующей способностью. Это свидетельствует о сохранении и обогащении костного мозга стволовыми кроветворными .клетками.

Исследования проведены на 270 мышах линии В А 2 В/С. Мышам весом 20 г ежедневно в течение 5 дней вводят в брюшную полость 5 мг гидрокортизонацетата.

В группах животных, включающих по 20-30 подопытных и контрольных мышей, изучается влияние 1,2,3,4,5-кратного введения гидрокортиэона на кровь и клетки костного мозга.

В каждой группе животных через

24,48,72,96 часов после последнего введения гидрокортизона забивают по

Формула изобретения. Составитель. С. Малютина

Редактор О.Иванова Техред Л. Алферова Корректор О, Ковинская

Заказ 302 /5 Тираж 671 Подписное

ЦИИИГИ Государственного ксмитета СССР по делам-изобретений и открытий

113035, Москва; Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная,4

1 ,с;> 6659

3-5 животных путем шейной дислокации, взвешивают лимфоидные Органы, извлекают костный мозг и подсчитывают ко лйчество кариоцитов и миелограмму, характеризующие процентное соотношение между клетками костного мозга.

Под влиянием гормона отличается заметное изменение лимфоидных органов, происходит почти полное исчезновение тимуса и эиачительное уменьШение размера и веса лимфатических узлов и селезенки.

После однократного введения гормона наступает умеренное снижение количества лимфоидных клеток костного мозга, максимально выраженное через 15

72 часа после инъекции гидрокортизона, которое составляет 10,2 "+o более выраженяое снижение процента лимфоидных клеток через 72. часа после прекращения введения гормона до 90

5, 7 йо,5 6 2 0, % и 4 0+-0,4% наблюдалось соответственно после 2,3 и 4кратного введения гормона.

Максимальное снижение относительного и абсолютного количества лимфоцитов наступает через 72 часа после

5-кратного введения гидрокортизона.

При этом содержание лимфоидных клеток падает до 3,2-, а абсолютное

+о зъ их содержание снижается на два порядка.

Одновременно исследуют колониеобразующую способнооть клеток костного мозга контрольных и подопытных животных через 72 часа после введения гидрокортизона.

О количестве полипотентных стволовых клеток судят на основании определения количества колониеобразующих единиц селезенки (КОЕс) по числу колоний, выявляемых на 9 день в селе- 40 зенке у летально облученных мышей.

4 несмотря не значительное снижение у подопытных животных абсблютного количества лимфоидных клеток в костйом мозгу Ъолониеобраэуйщая способность клеток костного мозга не только сохраняется полностью; "но и превосходит, составляя соответственно в контроле и опыте 32 и 39 на 10э миелокариоцитов ..

Предлагаемый способ обеспечивает значительное снижение в костном мозгу морфологически сходных со стволовыми клетками лимфоидных клеток и позволяет добиться увеличения стволовых клеток и их выявления; имеет большое значение для разработки проблемы лейкоза и способствует расшифровке механизма злокачественной трансформации клеток; позволит создать эффективные способы восстановления нормального кроветворения при лейкозе и других формах злокачественного роста.

Способ выявления стволовых кроветворных клеток костного мозга путем парентерального введения в организм биологически-активного вещества с последующим извлечением ткани костного мозга и электрономикроскопирования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем разрушения морфологически сходных с ними лимфоидных клеток, в качестве биологически активного вещества вводят гидрокортиэон из расчета 250 мг на 1 кг веса.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Проблемы гематологии переливания крови, 1975,. 3, с.44.