Способ получения 4-дезацетоксивинбластина или его солей

Способ получения 4-дезацетоксивинбластина или его солей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

С щиалмстических

Республик

519/04И

11/45

Государственный комотет

СССР по Мелам нзобретеняй и открцтай ..94.07

88.8) Иностранцы

Каряа Йованович, Лай :Днчн, Шндор Экардт, Чаба Леринц, янош Шугар, Жужа Релле, Кальман Сас, Йожеф Тамма и Арон Селеши (ВНР)

Иностранное предцриятие Рихтер Гедеон Ведьесетн Дьяр РТ .. (ВНР) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 4-ДЕЗАЦЕТОКСИВИНБЛАСТИНА

ИЛИ ЕГО СОЛЕЙ

Изобретение о Носится к способу получения 4-дезацетоксивннбластина или его солей, обладающих цеинйми лечебными свойствами.

4-Дезацетоксивкнбластин является сопутствующим алкалоидом, содержащим- ся в растении Vinca rosea Ь.

Известен способ получения 4-деэ. ацетоксивинбластина хроматографированием бенэольного раствора винблас.тина, выделенного из растительного сырья и содержащего 4-дезацетоксивинбластин, на окнои алюминия й1 степе-

:ни активности, с последующей перек-. ристаллнзацией из метанола и хроматографией íà силикагелЕ (11 .

Недостатком способа является довольно невысокая чистота целевого продукта..

Цель изобретения - повыаение чистоты целевого продукта — достигаетсн способом, заключающимся в том, что из смесей солей сопутствующих дииндоалкалоидов, содержащихся в растении

vinca rosea I*, выделяют основания дииндоалкалоидов, отделяют от раст= вора смеси оснований дниндоалкалоидов выпадающий в осадок винлейрозин, растворяют в органическом растворителе остаток, полученный упаривани- и ем маточного раствора, с последующей экстракцией раствора водным фосфатным буфером с рН 3,7-4,3,экстрацией отделенной кислой водной фазы дихлорметаном и отделением органической фазы, содержао(ей основное количество .: .-вийбластина, от водной фазы, содержащей остальные дииндоалкалоиды, пос ле чего рН водной кйслой фазы дово10 дят до 7,5-10 и полученяый водный щелочной раствор экстрагируют" дихлорметаном, упаривают органическую фазу, содержащую наряду с Н-дезметилвинбластнном, внякристнном и винблас.® .тином целевой продукт, остаток пос- ле .упаривания формилируют с помощью

Муравьйной кислоты в присутствии уксус;;ого.ангидрида, после чего рН формнлированйой смеси доводят до

99 7,5-10 с помощью щелочи,.водный ще лочной раствор экстрагируют бензолом. йли дихлормеганом, экстракт упариваап и остаток после упаривания разделяют с помощьв хроматографии на час26 тично деэактивированной окиси алюминия, гослит чего целевой:продукт вы- деляют в свободном виде или в виде соли известными методами.

Целесообразно проводить растворе.ние йсходной смеси солей, предпочти3 66714 тельно сульфатов дииндоалкалоидов, в органическом растворителе, желательно в ацетоне илиэ С -Сэ-алифатическом спирте, лучше в метаноле.

Растворение проводят при 0-50 С, предпочтительно при комнатной температуре. 6

Для получения оснований дииндоалкалоидов к раствору дрбавляют основание, например моноэтиламин„ диэтиламин или пиридин . Образующееся основание лейрозина при 0-25 С выпадает g) в осадок. Для более полного отделения лейрозиь.а смесь можно охладить до

0©С. Лейрозин отфильтровывают, проМйвают тем же растворителем, который был использован для растворения солей адкалоидов, и высушивают. Сырой лейроэин может быть очищен известным сцособом, например перекристаллиэацией, и/йли переведен в соль, предпочтительно в сульфат.

Полученнйй после отделения осно вания лейроэина маточный раствор упаривают при пониженном давлении, остаток растворяют в органическом растворителе, желательно в углеводороде бензольного ряда, например B бен з- ле, толуоле или ксилоле, но лучше всего в бенэоле, причем сульфат примейяемого для получения оснований дииндоалкалоидов основания (моноэтил- . амина, диэтиламина или пиридина) 30 выпадает в осадок. Сульфат отфильтровывают,фильтрат экстрагируют водным фосфатным буфером с рй 3,7-4,3. Объедийенные кислые водные фазы подкисяяют кислотой, желательно фосфорной, 36 до рН 3,5-4,1, экстрагируют дихлорметаном, объединенные органические фазы высушивают над безводным сульфатом натрия. Остаток восле упарйвания содержит винбластин, который може быть переведен в соль, желательно в сульфат.

К водной фазе добавляют основание, преимущественно хлорид аммония, до рН 7,5-10, полученный водный щелоч- 4 иой раствор экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем, желательно дихлорметаном или хлороформом, и объединенные органи- ческие фазы упаривают. Остаток после упаривания, содержащий винкристин, N-деэметилвинбластин, небольшое количество винбластина it 4»дезацетоксивинбластина формилируют смесью муравьиной кислоты и уксусного ан-. гидри)1а; при этом содержащийся в сме- М си алкалоидов Н дезметилвинбластин количественно переходит в винкристин.

Затем реакционную смесь разбавляют

5-15-кратным, лучше. 10-tcpaeHine, коли« чеством воды и доводят р8 до 7,5-10 я0 с помощью щелочи. .Щелочной раствор экстрагируют не-. смешивающимся с водой растворителем, предпочтительно углеводородом бенэольного ряда или хлорированным yrВ

0 4 леводородом, например .ензолом, толуолом, ксилолом, дихлорметаном илн хлороформом, желательно бензолом.

Объединенные экстракты упаривают при пониженном давлении, остаток, содержащий винкристин, винбластин и 4-дезацетоксивинбластин, растворяют в органическом растворителе, например в смеси углеводорода бензольного ряда и хлорированного углеводорода, желательно в смеси бекзола и хлороформа, и дииндоалкалоиды разделяют с помощью хроматографии на частично дезактивированной окиси алюминия. В качестве элемента обычно используют смесь бензола и хлороформа в ступенчато изменяемых количествах. Полученные фракции могут быть.идентифицированы с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие одинаковые алкалоиды, объединяют. Переработку фракций, содержащих вннкрйстин и винбластин, осуществляют иэвестнйм способом. Фракции, содержащие 4-дезацетоксивинбластин, объединяют и упаривают при пониженном давлении, остающийся сырой 4-дезацетоксивинбластин очищают перекристаллизацией или переводят в соль.

П р и м e p 1. Получение сырого

4-дезацетоксивинбластина.

50 г неочищенцой смеси сульфатов дииндоалкалоидов растворяют при комнатной температуре в 300 мл метанола и при перемешивании добавляют 13 мп диэтиламина, охлаждают до 0 С и выдерживают 1 ч при этой температуре.

Кристаллы отфильтровывают, промывают небольшим количеством метанола и высушивают в вакууме. Получают

6,4 г сырого основания лейрозина, что составляет около 90-95% от общего содержания лейрозина в исходной смеси сульфатов дииндоалкалоидов.

Сырой лейрозин может быть очищен йерекристаллизацией или переведен йзвестнЫм способом в сульфат.

Фильтрат упаривают при пониженном давлении досуха и остаток растворяют в 2500 мл бензола, наблюдая выпадение в осадок сульфата диэтиламина, который отфильтровывают, промывают небольшим количеством бензола и используют для регенерации диэтиламина.

Бензольный фильтрат экстрагируют

Эл2500 мл водного фосфатного буфера c рН 4,0 g 0,1 (10%-ный водный раствор первичного кислого фосфорнокислого натрия, к которому добавляют

1 н.фосфорную кислоту до рН 4,0 0,1).

Полученные при экстракции водные фазы объединяют, подкисляют 1 н.фосфорной кислотой до рН 4,0ф0,1 и экстрагируют 4 х 2500 мл дихлорметана. Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают досуха при пониженном давлении. Получают 25 r винбластина, который может быть беэ дальнейшей

667140 очистки использован для получения винкристина полусинтетическим способом.

25 r винбластина растворяют в

80 мл метанола и прибавляют 0,3 об,Вный раствор серной кислоты в -: таноле до рН. 5,0. При стоянии иэ раствора 5 выпадает кристаллический осадок сульфата винбластина.

К водной фазе после экстракции дихлорметаном добавляют концентриро-. ванный раствор аммиака до рН 8,5-9,0 10 и экстрагируют 4 х 800 мл хлороформа.

Экстракты объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и фильтруют.

Фильтрат упаривают при пониженном давлении и аморфный остаток смеси алкалоидов (8 r) растворяют в смеси

45 мл муравьиной кислоты и 11 мл уксусного ангидрида, выдерживают 515 мин при комнатной температуре, разбавляют 10-кратным количеством охлажденной до 5 С дистиллированной о воды, добавляют концентрированный раствор аммиака до рН 8,5-9,0 и экстрагируют 4 х 800 мл бенэола.

Бензо) ьные фазы объединяют, упаривают, аморфный остаток смеси алкалоидов (6,9 r) растворяют в 42 мп смеси бензола и хлороформа (1:1) и пропус- кают через колонку (диаметр 4 см) с суспензией окиси алюминия (актив- 30 ность lg -ч, 345 г) в смеси бенэола и хлороформа (9:1).

Вначале через колонку пропускают смесь бенэола и хлороформа (9:1) и. отбирают фракции по 100 мп.

Отдельные фракции исследуют методом тонкослойной хроматографии (окись алюминия на алюминиевой фольге, элюент — смесь 100 мл бензола, 50 мп . хлороформа и 7,5 мл диэтиламина). 40

Фракции 3-10, содержащие 4-дезацетоксиэйнбластин, объединяют и упаривают при пониженном давлении, получая 1,7 r неочищенного 4-деэацетоксивинбластина.

Фракции 11-36 элюируют смесью бензола и хлороформа (4:1) и идентифи- . цируют компоненты фракций методом тонкослойной хроматографии (см.выше).

Фракции 11-19 объединяют и упаривают при пониженном давлении, получая 0,6 r смеси винбластина и 4-дезацетоксивинбластина (1:1), которую можно разделить на отдельные компонентй. для этого растворяют остаток пос- .55 ле упаривания в смеси бенэола и хлороформа (9 1) и пропускают через колонку,заполненную суспенэией окиси алюмйния (активнбсть tv- Y) в смеси бенэола и хлороформа (9:1). Получают 60

0,18 г винбластина и 0,20 г 4-дезацет- . оксивинбластина.

Фракции 20-24 объединяют и упаривают при пониженном давлении. Остаток содержит 0,9 г винбластина.

В фракциях 25-36 содержится небольшое количество (0,3 r) 4-дезацетоксивинбластина, Остальные фракции (25-36) элюируют смесью бенэола и хлороформа (lil+

Упариванием объединенного элюата при пониженном давлении получают 1,7 r винкристина.

Пример 2. Очистка 4-дезацетоксивинбластина.

1,7 г неочищенного 4-дезацетоксивинбластина растворяют в 25 мл смеси метанола и воды (3<2), охлаждают до

5 С и выдерживают при этой температуре в течение 16 ч. Кристаллы отфильтровывают, промывают 3-4 мл вьваеукаэанной смеси метанола и воды, охлажденной до 5 С,и высушивают. Получают 1,3:г 4.-дезацетокувинбластина, т.пл, 90-193 С; (а ) . = 107 С (с

1 хлороформ)

Вычислено,% С 70,19; Н 7,50>

N 7,44; О 14,97. с44 Нзь Н40у .

Найдено,%: С 69,85 cl 7,52

N 7,23; О 14,97.

Массовое число 4-деэацетоксивинбластина (m/е=752), измеренное по величине пика иониэированйых молекул, на 58 массовых единиц меныае, чеМ массовое число винбластина (m/е =

= 810) ° Разница .соответствует массе ацетоксигруппы.

Оба дииидоалкалоида состоят иэ велбаминовой и индолиновой частей. так как массовые числа, характерные для велбаминовой части и для пика основания Ьелбаминовой части, имеются и в масс-спектре деэацетоксивинбластина (l4/е=355, соответственно ш/е= 154) то отсюда следует, что в индолиновой части упомянутая ацетоксигруппа отсутствует. На основании характера расщепления линий массспектра (m/е=122,135,224) можно предположить, чтo эта ацетоксигруппа при образовании 4-дезацетоксивинбластина отщепляется от четвертого атома углерода винбластина.

В ЯИР-спектре. 4-деэацетоксивинбластина отсутствует пик 8 2,09 м.д., характерный для 4-ацетоксигруппы, который присутствует в ЯМР-спектре винбластина.

ЯМР.-спектр 4-дезацетоксивинбластина (д ), м.д.s 2,73 (N-метил), 3,60 (;сарббметокси), 3,81 (0CH, csязанная с ароматической группой, 3,85 (карбометокси).

П р и м e p 3. Получение сульфата 4-деэацетоксивинбластина.

I 1 г неочищенного 4-дезацетоксивинбластина разбавляют 1,25%-ным спиртовым раствором серной кислоты до рН ",5 и выдерживают 2 ч при 54 с.

КристаЛлы отфильтровыэают и пРомывают 2-3 мл охлажденного до 5 С этанола. Получают 0,95 г сырого сульфата

4-дезацетоксивйнбластина, который

66 7140

Формула из обретени я

Составитель И.Федосеева

Редактор Т. Шарганова Техрвд О; Андрейко. Корректор С. Шекмар

Заказ 3244/48 . Тираж 512 . Подписное цНИИПИ ГосударсИГенНоГо койитета "СССР по делам изобретений и:открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

7 растворяют в 25 мп метанола, разбавляют 25 мп ацетона, йромывают 2:3 мл охлажденного до 5 С ацетона и высушйвают, получая 0,83 г очищенного сульфата 4-деэацетоксивинбластина, (a ) =29,0 (с = 1, метанол) .

Способ получения 4-деэацетоксивинбластина или его солей из растения Uinca rosea L, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения

" -качества целевого продукта иэ смесей солей дииндоалкалоидов, содержащихся в вьааеуказанном растении, выделяют основания дииндоалкалоидов, отделяют от раствора смеси оснований дииндоалкалоидов выпадающий в осадок вин1 лейрозин, растворяют в органическом растворителе остаток, полученйый упариванием маточного раствора, с последующей экстракцией полученного органического раствора водным фосфатным буфером с РН 3,7- 4,3 и зкстракцией отделенной кислой водной фазй дихлорметаном и отделением органическ и фазы, содержащей основное колйчество винбластина, от водной фазы, содержащей остальные дииндоалкалоиды, после чего РН водной кислой фазы доводят до 7,5-10 и полученный водный щелочной раствор экстрагируют дихлорметаном, упаривают органическую фазу, 5 содержащую наряду с N-дезметилвинбластином, винкристином и винбластином целевой продукт, остаток после упаривания подвергают формилированию с помощью муравьиной кислоты в присутствий уксусного ангидрида, после чего РН формилированной смеси доводят до 7,5-10 с помощью щелочи, водный щелочной раствор экстрагируют бензолом или дихлорметаном, экстракт упаривают и остаток после упаривания разделяют с помощью хроматографии на частично дезактивироваинай окиси алюминия, после чего целевой продукт выделяют в .свободном * — вид» или в виде соли.

Источиики информации, принятые во вйимание при экспертизе

1. Vinca aRkatoids ХХХУ Desaceto,хуч1пЬ(анапе — а new Minor 3gkatoid

from Vinca rosea. L. N. Нецзз, A.J.

Barness, Buckstepp Experientia.

31/1, 18-19 (1975).