Способ получения витамина в 12, меченного кобальтом-57 или кобальтом-58

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П

6ноз @ееетскпк

Сецмавттстнчесвнм

РеСпублик

ИОАН-ИЕ

ЗОБРЕТЕНИЯ (61) 11ополнительный к патенту .(22) ЗаявлЕно 080575 (21) 2139214/23-04 (23) Приоритет . — (32) 10 05.74

1 (31) 20884/74 (33) Великобритания

Опубликовано 050679 Бюллетень № 21

Дата опубликования описания 050679 (51) М. Кл.

С 07 Н 23/00/б

A 61 К 31/41

Государственный комитет.с с с р. ие .делам изо()ретеияй и открытий (53) УЙК 577.164.1. . 07 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы °

Джон Сесил Чарльтон и Алан Льюис Хамильтон (Великобритания ) Иностранная фирма Дэе Радиокемикал Сентр Лимитед (Великобритания) (71} Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ BHTANHHA В, МЕЧЕННОГО КОБАЛЬТОМ-57 ИЛИ КОБАЛЬТОМ-58 (54) Изобретение касается получения витамина В,,меченного кобальтом-57

Нли кобальтом-58, который может найти применение s медицине.

Известен способ получения витамина В,меченного радиоактивным иэотопом кобальта (Се "), который состоит в том, что в культуральную среду вводят соль радиоактивного изотойа кобальта, и процесс продуцирования витамина В т проводят при эначенйях рН среды близким к 7 flJ.

Основной недостаток этого способа состоит в, том, что. для получения вйтамина В. с достаточной для биоло-. . гических исследований удельной активностью необходимо использование больших количеств дорогого реагента радиоактирной соли кобальта, что вызвано проведением процесса в большом объеме культуральной жидкости.

Однако этот способ не позволяет получить витамин В 2 с достаточно высокой удельной активностью.

Нрименяевый s настоящее время в медицинской практике меченный кобальтом-57 витамин В обладает удельной радиоак1ивностью около 12 микрокюри на 12 мкг. Способ получения этого препарата в литературе не описан.

Цель B 3o6pef åíè я — получение витамина В, меченного кобальтом-57 или кобальтом-58, обладающего высокой удельной активностью.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения радиоактивного витамина В«, который состоит в .том, что полученный ферментативным путем витамин В А-(5,б-дии) метилбензимидоэолил) -гидрогенобамнд подвергают взаимодействию с солями кобальта в инертном растворителе при соотношении 0,2-50 молекул а -.(5,6-диметилбенэимидазолил)-гидрогеноб16 амида на атом кобальта, при температуре 0-100 С, с последующим выделением целевого продукта.

Предпочтительными вариантами способа являются: поддержание рН реакф) ционной массы в пределах 4-8, проведение процесса в темноте.

Осуществление способа получения витамина В, по предлагаемой схеме позволяет при небольших расходах до25 рогостоящей радиоактивной соли кобальта-57 или кобальта-58, меньшем времени контакта с радиоактивной массой получить меченный витамин В с высокой удельной активностью (не

80 менее 150 микрокюри н мкг).

145 4

667

Пример 1. К 2,5 мкгд(«(5,6-димети лбе н зимид аз олил ) — гидро ге н обамида) присутствующего в 25 мкг сырого материала, полученного при выращивании штамма хроматиум ATCC 17899 в присутствии 5,б-диметилбензимидазола) в 3 мл зтанола прибавляют раствор хлорида двухвалентного кобальта-57 (0,40 миЛликюри в 0,054 мкг кобальта, что соответ "твует распространенности изотопов 82%) в 0,4 мп воды с величиной рН от 7,0 до 7,5 и 10 раствор выдерживают при комнатной температуре в темноте, в течение

48 ч. К этой реакционной смеси добав ляют l мл 0,1%-ного водного раствора гидроксокобаламина, а затем 1 MJI 15

1%-ного вес/об/водного раствора цианида калия, который непосредственно до ввода в реакционную смесь подкисляют сопяной кислотой. Сырую реакционную смесь разделяют на две .порции и каждую порцию выпаривают досуха.. эти порции подвергают различным обработкам.

a). Смола ХАД-2 °

Оставшийся после выпаривания осадок одной из порций растворяют а

1 мп воды и подвергают хроматографи ческому разделению в колонке, напол-,ненной смолой ХАД-2 (амберлит) - с частицами размеРом прймерно 1ОО.мкм

Heopràíè÷åñêéa ионы отмывают водой. цйанокобалаьен элюируют 20%- ийм водным раствором третичного бутанола. б). Экстракция -растворителем .

Оставщийся после выпаривания оса док другой порции растворяют s 3 мл 38 воды и экстрагируют 2 мл смеси крезола с четыреххлористым углеродом

s соотношении 1 1. Отделенную органическую Фазу промывают 1 мп воды, а затем экстрагируют б мл смеси н- 40

-бутанола с четыреххлористым углеро-. дом, в соотношении 2:1.

Исследование проб из первой. и второй порций путем электрофореэа

На бумаге с использованием буферной 45 сМеси, включающей 1-моляриую уксусную кислоту и фосфат, с величиной рН, равной 6,5, показало, что в каждом случае вйход цианокобаламина в реакциойной смеси составляет 5060% (в расчете по Кобальту-57).

Для.получения витамина В, меченного- кобальтом-58 процесс проводят в тех же условиях, но вместо хлорис- . того кобальта-57 применяют хлористый кобаАьт-58. 55

П р и и е р 2. В опыте использу-. ют соотнсааение 5 молекул предшествейника витамина В-12 на атом кобальт а.340 мкг-eC. — (5, б-диметилбенэимидаэо g} лил)-гидрогенобамида, содержащихся в 3,4 мг сырого материала, растворяют в 2,0 мп воды, получают мутный оранжево-розовый. раствор. Прибавляют раствор хлорида двухвалентного кобальта Со-57 (20 милликюри Со-57 в

2,7 мкг кобальта, что отвечает распространенности изотопа в. 82%) в

3,0 мл воды с величиной рН от 7,0 до

7,5, раствор выдерживают в герметизированном сосуде на водяной бане при температуре 80 С, в темноте в течение 2 ч.

По истечении этого времени отбирают. 5%-ную аликвоту раствора, добавляют к нему 1 мп водного 0,1%-ного раствора носителя гидроксокобаламина и затем 1 мл 1%-ного водного раствора цианида калия. Реакционную смесь хроматографируют на колонке со смолой ХАД-2 (как и в примере 1).

Продукт элюируют 20%-ным водным раствором третичного бутанола и исследуют посредством электрофореза (как и в примере 1). В результате электрофореза обнаружен ряд зон Радиоактивности, включая острый пик, точно

Соответствующий узкой окрашенной в розовый цвет полоске цианокобаламина. На основании полученных данных вычисляют, что в реакционной смеси присутствует 2,0 милликюри цианокобаламяна, Со-57, что соответствует 10%-ному выходу из расчета на

Со-57.

Реакционную смесь обрабатывают как это бйло описано выше, без добаэлейия оксо-кобаламина. Выделяют свыше 1 милликюри цианокобаламина, Со-57 с 90%-ной степенью радиохимической чистоты (50%-ный выход из расчета на Со-57).Основной объем реакционной смеси подвергают обработке, как было описано выше, беэ добавления носителя.

Эта обработка заключается в выпаривании реакционной смеси досуха, растворейии оставшегося после выпаривания осадка в 5 мп воды и в двухкратйом экстрагировании 2 мл смеси крезола с четыреххлористым углеродом в соотношении 1:1. Органическую фазу отделяют, промывают 1 мл воды,. а затем экстрагируют б.мл-смеси н-бутанола с четыреххлористым углеродом.

Цианокобаламин активностью равной

1 мКи, Со-57, со степенью радиохимической чистоты 90%., после хроматографического разделения водного раствора подвергают регенерации, используя целлюлозу СИ и дЕАЕ и в качестве элюента воду (выход 5% в расчете на

Кобальт-57). Это количество слишком мало, чтобы можно било произвести определение удельной активности. Расчет показал, что активность составляет 300 микрокюри на 1 мкг..

Этот опыт можно повторить с приме некием хлористого кобальта-58 вместо.хлористого кобальта-57, что дает аналогичные результаты.

Те форьи витамина В-12, в которых цианидная группа заменена гидроксиль;

Формула изобретения

1. Способ получения витамина В меченного кобальтом-57 или кобаль"том-58, отличающийся тем, чтооС-(5,6-диметилбензимидазолил)-гидрогейобамид подвергают взаимодействию с солями кобальта в инертном растворителе, при соотношении 0,250 молекуло(.-(5,6-диметилбензимидСоставитель В.Волкова

Редактор И.Марховская Техред О. Андрейкр Корректор М. Вигула

Заказ 3244/48 Тираж 512 Подписное

ЦНИИПИ ГосударственнОго комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.< д. 4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðoä,. ул.Проектная,4

Рой или другой группой легко могут ать получены иэ цианокобаламина из« вестным способом.

Очистка исходных материалов изве:стными способами дает более высокие результаты.

667145 6 ,азолил)-гидрогенобамида;на атом кобальта, при температуре 0-100 С, с последующим выделением целевого продукта.

2. Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что процесс проводят при рН 4-8.

3. Способ по п.l, о т л и ч а ю шийся тем,.что процесс проводят в темноте.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. I.Chort Biosynthesis of Radioactive Vitamine B Containing Co

Science, 1950, 1Н, р. 601 °

2. ВачгаМа R.М. Assay of Vitamin В Ы Blood, A simple method, Iancet

1961, 2, р. 25.