Способ получения биомассы

Способ получения биомассы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

k

1 оп иСАКИЕ

Союз Советских

Соцналистических

Республик

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Н IlATEHTV (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 140576 (21) 2357451/28-13 (23) Приоритет — (32) 14 ° 05 ° 75 (31) 20317/75 (33} Великобритания

Опубликовано 0506.79. Бюллетень № 21

Дата опубликования описания 050679 (5!) М. Кл.

С 12 D 13/06

Государствениый комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) У@К 668.392 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Филип Альберт Майерс, Энтони Пол Рейнир (Великобритания) Иностранная фирма

Дзе Бритиш Петролеум Компани Лимитед и (Великобритания) (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ

Изобретение относится к технике получения биомассы на питательной среде, содержащей метан в качестве источника углерода.

Известен способ получения биомассы, предусматривающий выращивание смешанной культуры бактерий. на питательной среде, содержащей метан в качестве источника углерода, источник азота и необхоцимые минеральные соли, в условиях аэрирования газообразной смесью, содержащей свободный кислород и метан, с использованием в качестве метан-потребляющих микроopraHHsMoB бактерий иэ родов Methy»

Iomonas, MeсЬу?оЬас1ег, MethyIosinus или MethyIococcus (111.

Недостатком известного способа является повышенное образование пены в процессе выращивания.

Целью изобретения является снижение пенообразования в процессе выращивания микроорганизмов.

Это достигается тем, что в предлагаемом способе получения биомассы осуществляют одновременное выращивание культуры .бактерий, потреблявших метан, с одной или смесью бактериальных культур из родов Acinetobacter, AIcaIigenes, Agrobacteriurrt МсйахеТТа, Pseudomonas Flavobacterium BaciIlus

М1 rococcus или Pediococcus не потребляющих метан и использующих пенообразующие продукты метаболизма культуры бактерий, потребляющих метан.

При этом в качестве культуры, потребляющей метан, используют бактерии вида MethyIococcus capsuIatus.

Кроме того, в качестве культуры, )0 потребляющей метан, используют штамм

NCIB 910856 М.capsuIatus.

Кроме того, в качестве культуры, потребляющей метан, используют штамм

ATCC 919069 M.CapsuIatus.

15 При этом, в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие:вещества, используют штамм Moraxella NCIB

911135.

Кроме того, в качестве культуры, Ю потребляющей пенообразующие вещества, используют штамм Alcaligenes, Agro.bacterium или Рэецйощопав NCIB

911136.

Кроме того, в качестве культуры, 25 потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм AIcaIigenes, Agro»

Ъас erium или Pseudomonas NCI5

911137.

Кроме того, в качестве культуры, З0 .потребляющей пенообразующие вещества, тарный азот, и бактерии, потребляю щие пенообраэующие вещества, образованные этими бактериями, культивируют в 5 л (рабочий объем) бульона, содержащегося в семилитровом ферментере.

Процесс ведут непрерывно не асепти1чески, температуру поддерживают 45 . С, перемешивание проводят смесителем при скорости вращения 1000 об/мин.

К бульону добавляюг питательную сре- ду при степени разбавления 0,18 час следующего состава, мг: КН HPO—

175,0; Na<.HPO ° 12 Н О вЂ” 150,0;

Х

MgSO4 7Н О вЂ” 85,0; СаСТ (безводный)

20,0; CuSO4 5Н О вЂ” 20,0; FeSO4 ° 7Н О—

7,5; ЕпБО4 ° 7Н О вЂ” 0,5; MnSO4 ° Н О

0,5; CoCIg ° 6Н О вЂ” 0,02; Na МоО "2Й О0,2;,:дистиллированная вода до 1 л. рН регулируют 6,4, используя

2,0 н.раствор гидроокиси натрия, азот вводят в виде гидроокиси аммония и воздуха, при этом количество гидроокиси аммония вводят из расчета удовлетворения потребности в азоте присутствующих бактерий на 95%; а

- оставшиеся 5% удовлетворяют азотом

15 воздуха.

Метан подают при скорости б об/об час и воздух - при скорости

24 об/об час. Ферментация идет стабильно, при этом получают плотность клеток 3,4 г/л при производительности 0,61 г/л час.

Во всех примерах вес клеток выра-. жен через сухой вес. Образование пе-, ны бактериями не обнаруживают.

Затем концентрацию водной питательной среды и гидроокиси аммония удваивают, что приводит к увеличению плотности клеток до 6,5 г/л и производительности до 1,7 г/л час. Пена не образуется.

40 Бактерии, присутствующие в бульоне состоят из 85% клеток штамма ATCC

19069, "потребляющих метан и элементарный азот бактерий MethyIococcus

capsuIatus, и из 15% Клеток смеси, 45 не потребляющих метан бактерий. Последние выделяют путем разбавления образца бульона до 10, нанесения разбавленного образца на агар в чашке

Петри и инкубирования 48 час при

50 45 С в аэробных условиях в отсутствии метана. Отдельные колонии снимают. с агара .и непрерывно пересевают в свежую среду до получения чистой культуры. Полученные культуры были внесены в национальную коллекцию промышленных бактерий Аберден (Шотландия) под номерами: 11135, 11136, 11137 11138, 11139,. 11140 и 11141.

Затем бактерии идентифицируют в соответствии с существующей класси- фикацией. Данные приведены в табл.1.

Смесь не потребляющих метан бактерий состоит иэ 3% клеток неидентифицированных гРаммизменчивых бактерий в форме палочек штамм NCIB

Р11134 и 12% смеси, состоящей из

3 667154 йспользуют штамм AIcaIigenes или

Pseudomonas NCIB Р11138

Кроме того, в качестве культуры, потребляющей пенообразующие вещества, используют штамм Alcaligenes NCIB

Р11139.

Кром

1потребляющей пенообразующие вещества, используют штамм Acinetobacter NCIB

Р11140.

A также, кроме того, в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм

" AIcaIigehes, Agrobacterium или ,Pseudomonas NCIB Р11141.

При этом процесс, выращивания осуществляют при рН 5,5-7,0 и 3055 С.

Кроме того, концентрацию ионов аммония в питательной среде в процессе выращивания поддерживают 2-50 мг/л.

Способ осуществляют следующим об- 20 разом.

Смешанные культуры бактерий из родов MethylomOnas, Methylobactei, MethyIosinus или MethyIococcus выращивают на питательной среде, содержащей метан в качестве источника углерода, источник азота и необходимые минеральные соли. . Для сниженйя пенообразования в процессе выращивания осуществляют одновременное выращивание культуры бактерий, потребляющих метан с одной или смесью бактериальных культур из родов Acinetobacter, AIca?igenes, Agrobacterium, MoraxeIIa, Pceudomonas, Flavobacterium, BaciIIus, Micro-.

coccus или Pediococcus не потребляющйх метан и использующих пенообразующие продукты метабстиэма культуры бактерий, потребляющих метай. При этом в качестве культур, потребляющих метан, используют бактерии вида

MethyIococcus capsubatus, штамм

NCIB Р10856 М.capsuIatus, штамм ATCC

Р19069 М.capsuIatus.

В качестве культур, потребляющих йейообразуюййе вещества используют штамм MoraxeIIa NCIB Р11135, NCIB

Р11136, NCIB Р11137, NCIB Р11138 и штаммы Acinetobacter NCIB Р11140, AIcaIigenes NCIB Р11139 и штамм NCIB

Р11141.

Процесс выращивания осуществляют при рН 5,5-7,0 и 30-55 С, а концентра цию ионов аммония в питательной среде в процессе выращивания поддерживают 2-50 мг/л.

Процесс проводят в условиях аэрирования газообразной смесью, содержащей свободный кислород.и метан, при -этом количество метана обычно равно

16 объемам к 84 объемам воздуха, оно 60 может быть также равно от 8 до 40 объемов к 92-60 объемам воздуха.

Пример 1. Смесь бактерий штамм ATCC 19069 Methylococcus capsuIatus< потребляющих метан и элемен5 штамма Moraxel la NCIB 11135, штамма

AIcaI igenes, Р".eudomonas или Agro.bacterium NCIB 911136, штамма Pseudomonas AIcaIigenes NCIB 911138, штамма Acinetobacter NCIB 911139,,штамма Acinetobacter NCIB 911140, штамма Pseudomonas, AIcaIigenes или

Ayrobacterium NCIB 911141.

Для сравнения процесс проводят при культивировании в асептических условиях в присутствии микроорганизмов, потребляющих метан и элементарный азот, Methylococcus capsulatus

ATCC 919069. Процесс проводят непрерывно при скорости разведения

0,18 час при плотности клеток, на-

-пример 3,3 г/л, и производительности 0,59 г/л час.

667154

Таблица 1

Moraxella

NCIB 911135

Палочки 0,35-0,5 х х1,25-1,5-р параллельные стороны, единичные.

Палочки 0,35-0,5 х 1-1,25р скруглейные концы, края параллельные,. некоторые слегка изогнуты, единичные, некоторые цепочки содержат до 8 клеток °

Круглые, гладкие, блестящие, малая изогнутость при уколе иглой, край сплошной, полупрозрачные светлоко ричненые, обширные колонии на arape.

Круглые, гладкие, блестящие, диаметр закругленного выступа

2-3 мм, край с,плошной, бежевые с ж елт о в ат ой серединой.

Морфология колонии

ГДСА

Как ГДСА, нс полупрозначные с серыми вкраплениями.

Как ГДСА, но диаметром 1 мм.

Окрашивание до

Граму

Метод А

Метод 8

О/Ф глюкоза

Подвижность .Аргенин

Аммонийные соли сахар- мальтоза

Аммонийные соли сахар-этанол

Твин 80 гидролизный

Микроскопический вид

Ферментация идет нестабильно изэа образования пены культурой, что приводит к трудностям регулирования уровня в ферментере и достижения стабильности проведения процесса.

Пейа уменьшает также объемную про5 пускную способность так, что не обеспечивается постоянный вывод получаемого вещества»

Затем концентрацию питательной

1р среды удваивают, что приводит к увеличению плотности клеток до 5,5 г/л и обильному образованию пены с последующим прекращением процесса. Характеристики штаммав приведены в табл.1.

Характеристики других штаммов приведены в табл ° 2.

667154

Разжижение желатина

ОНПГ

Оксидаза-чашка

Фильтровальная бумага

Рост на а1"аре

Мак-Конка

Малонат

Рост в цианистом калии

Уреаза

Казеиназа

Катал аз а

Сероводород

Индол

Ацетилметилкарбинол

Восстановление йитарта

Чувствйтельность к пенициллину 2,5 иммунных единиц

Анаэробнйй рост ГДСА.

М агар + 0,2% глюкозы -=Рост на arape MC в

50%-ном метане

Рост на агаре МС в парах бутайола

Н

- - - - в парах ацетона

- - - - в парах метанола

- - - - в парах зтанола

= - - - в парах зтана

- - - - в парах формальдегида

Рост на агаре МС в парах муравьиной кислоты

- - агар + 0,23 (вес.ч.) глюкозы

667154

10.Продолжение табл. 1 плюс 0,2% глюкозы

- — плюс 0,2% арабинозы

- - плюс 0,2% галактозы †- плюс 0,2% лактозы

- - плюс 0,2% ксилоэы

- - плюс 0,2% сукрозы †- плюс 0,2% маннитола

- . — плюс 0,2% глицерина

- - плюс 0,2% салицина плюс 0,2+ лаквулозы

Наличие FIageIIa (электронномикроскопически) HH

1 боковая

Палочки

0,5 х 1,5 скругленные концы, параллельные

KPcil H

Круглые, Круглые, гладкие, гладкие, блестящие, блестящие, малая изот -, малый из- нутость гиб 2-3 им при уколе легко слииглой у ваются, края сплсш- сплошнйе, 11ые, не- кремовые проэрачные, бежевые .Морфо;логи я колонии

ГДСА

"- — в жидкой ИС без добавок

Споруляция в марганцевой среде

Иикрдско- Палочки пический 0,35-0,5х вид. . xl 25, скругленные концы, единичные . или спаренные

Круглые, гладкие, блестящие, малая вы пуклость

1-2 мм, диаметр

2-3 мм, края сплошные бежевые

Круглые, несколько расплывчатые, выделяющие блестящую слизь, ма« лый изгиб, бежевые

Палочки

0,5 х 1,5-2 единичные или спаренные, несколько короткоце- почных

Плеоморфные палочки, концы округлые, стороны параллельные, еди- ничные

1Таблица 2

Плеоморфные Палочки палочки, 0,35 х

,,скруглЕнные, х 1,75 . стороны края не параллель- .параллельные ные

Круглые, Нечеткие, гладкие, малый asблестящие, гиб, слималый иэ- зистый, гиб 2 мм, блестящий, края сплощ- бежевые ные, полупроэрачный центр, непрозрач-, ные, кремовые

667154

12

1 Продолжение табл.2

? :Г

ПА . ° °

Нерегулярные пятна

Переменное окрашивание

Переменное нерегулярное окрашивание

Переменное Переменное нерегуляр- нерегулярное окра- ное окрашивание шивание

Переменное нерегулярное окрашивание

Метод В

О/Ф rmoкоза щел щел щел щел щел щел

Подвижность (+) (+) Аргенин

1ьмониевы е соли сахаров» мальтоз а

Этанол Гвин 80 гидролиз

Ожижение желатины

ОНПГ

Оксидусачашка

Фильтровальная бумага

Рост на агаре

Мак-Конка

Малонат

Рост в цианистом калии

Уреаэа

Казеиназа Каталаэ а

Окрашивание по Граму-МетОД А ° ° °

Круглые, блестящие, гладкие, 1 мм, легко сливаются, полупрозрачные, серые

Круглые, Как ГДСА, гладкие, но беловаблестящие, то-серые малый изгиб 1 мм, сероватые

Переменное окрашив ание, биполярно темное

Как ГДСА, но сливаются меньше полупрозрачные, сероватые с опущенным центром

Как ГДСА, Слив ающийно центр ся слизисполупрозрач-тый, блесный, встре- тящий, сечаются не- роватый, ровные края случайная, точечная колония

667154

13

14

Продолжение табл.2

1 2: -. 3 4

Сероводород

Индол

Ацетилметилкарбинол

Восстановление нитрата

Чувствительность к пенициллину в

2,5 имунные единицы

Анаэробный рост

ГДСА

МС агар

+ 0,2% глюкозы

Рост.на

arape МС в 50%-ном метане

Рост на агаре МС в парах бутанола

- - в парах аце- тона

- - в парах метанолаа

- - в парах этанола ю 8 па» рах этана

- - в парах формальдегида

Рост на

МС в парах муравьиной кислоты

667154

16

1 родолжение табл. 2 .

Рост на

МС агар

+ 0,2% (вес.ч.)

1люкозы

-II- в жидкой

МС, без . добавок

- -.плюс

0,2% глюКОЗЫ

+ т- " юс .

0,2% арабинозы

- - плюс

";0,2% галактозы

- - плюс

0,23 лактозы

- - плюс

0<2% ксиЛОЗЫ

- - плюс

0,2% сук розы н

- - плюс

0,2 % маннитола

-f

- - плюс

0,2% глицерина

- - плюс

02% салицина плюс

0,2В левелозы

667154

Продолже нне табл. 2

4! 2

Наличие (элект-, ропиомикроскопические) 1 или 2

1 полярная НИ

2 или более боковых

НИ

Споруляция в марганцовой среде ч а н и я к табл. 1 и 2: + положительная реакция Приме отрицательная п переменная

С слабая н нечетная ф ферментативная реакция в среде нет реакции нр щел щелочная реакция на аэробную пробу о-ф- окисление/ферментацня

ГДСА глюкоэо-дрожжевой сыпучий агар: глюкоза — 5 r, пептон - 10 г, дрожжевой экстракт — 5 г,, сычужныйфермент — 10 г, агар — 20г, дистиллированная вода — 1000 мл.

Автоклавирование при 12 Р С 15 мин.

ПИ вЂ” питательный агар (оксоид СМЭ)

МС вЂ” минеральная среда (жидкая или твердая) Рецептура

Кислый фосфорнокислый калий КН2РО4

Кислый фосфорнокислый натрий NaiHPO4 12Í O

Дистйллированная вода

16 .г

11,6 г, 100 l471

A-Д стерилизуют мембранным фильтрованием и хранят s виде четырех концентрированных стерильных маточных растворов.

Жидкую минеральную среду готовят, смешивая 10 мл раствора А, 10 мл раствора В, 1 мл раствора С и 1,5 мп раствора Д и,добавляя воды до 1 л, автоклавируют 121 С 15 мин.

Твердую минеральную среду готовят путем добавки 10 r агара к жидкой минеральной среде перед автоклавированием.

Подвижность культур определяют после выращивания в течение 18 час

8 r

2,5 г

0,4 г

Нитрат натрия NaNO3 11,8 r

Дистиллированная вода 100 мп

Сульфат железа

FeSO> 7H>O 1,4 г

Дистиллированная вода 100 мп

Сульфат магния

Мд804 7Н О

Нитрат кальция

Са(НО ) ° 4Н О

Сульфат медй

Сц804 ° 5НФО (+) некоторые клетки-подвижны ни не испытывались

Сульфат цинка

ZnSOq 7Н1О

Сульфат марганца

МпЯО4 Н10

Молибдат натрия

Na>MoD4 ° 2Н О

Дистиллированная вода

0,034 г

0,030 г

0,024 г

600 мл

19

667154

20 с при 30 С на скошенном питательном — агаре, Основание жидкого скошенного агара помещают в стерильную дистиллированную воду. Рост культуры после инкубации оценивают на поверхности раздела воздух-вода при помощи фазово-концентрационной микроскопии. 5

Марганцевая среда для споруляции чашки со скошенным питательным агаром, в который добавляют 2 мг/мл ионов

Nn в виде сульфата марганца. Кулье+ туры инкубируют до 14 дней при 30 С )О а затем инокулируют спорами. Культуры также оценивают на жизнеспособность йосле воздействия температуры

80 С 10 мин.

Пример 2. В стерильный бродильный чан емкостью 7 л помещают

4500 мл стерильного водного питательного раствора. Состав водной питательной среды, как описано в примере 1, с добавлением;1,770 г/л азотной кислоты.

В бродильный чан вводят 500 мл активно растущей культуры микрооргаHH3MoB NethyIococcus capsuIatus

ATCC 919069, использующей метан и элементарный азот, обеспечивают его периодическую работу в асептических условиях со скоростью перемешивания

500 об/мин, скоростью аэрации

10 об/об час, расходом метана

10 об/об час, рН поддерживают на 30 уровне 6,5 добавлением 1,0 г/л раствора гидроокиси натрия или 3,6 н. раствора серной кислоты в зависимости от условий. При достижении клетками плотности 1,0 г/л CKopocTb пе- 35 ремешивания повышают до 1000 об/мин.

Затем работу чана переводят на непрерывный режим при скорости разбав-. ления 0,05 .час > Через 12 ч непрерывной работы скорость разбавления повышают до 24., об/об час, а расход метана †. До.,6 об/об.час. Ewe через

15 час Скорость разбавления повышают до 0,18 час"1 Йлбтность клеток составляет- .3";3 г/л, а скорость образования., .прииерно 0,59 г/л час.

Режим:"работы нестабильный из-за пены,,образующейся при росте культуры. Пена препятствует стациойарному режиму работы. На этой стадии асептические условия нарушаются, а через два часа неасептической раббтй образо ванне пены снижается и в культуре обнаруживают некоторые другие виды бактерий.

Через 24 час режим работы устанав- > ливается при плотйости клеток

3,4 г/л,-а скорость образования составляет 0,61 г/л ° час. Образование пены больше не наблюдается.

При анализе бульонной культуры 60 обнаруживают бактериальную культуру, как в примере 1.

Пример 2 показывает, что пенообразование можно эффективно снизить в присутствии смеси м:юкроорганизмов.

Пример 3. В семилитровый бродильный чан помещают 4,5 л водной питательной среды следующего состава, мг: HNOg — 3500,0; КН РΠ— 350,0;

Na> НРО4 ° 1 2Н О вЂ” 300,0; Му10 ° 7НZO

170; СаСЕ> (безводный) — 40,0;

CuSO4 "5Н20 — 4,0; FeSO> ° 7Н10 — 15,0;

ZnSO4 ° 7H Π— 1, 0 CoCC 6H O — 0,04

NnSG4 ° H> Π— 1, 0; Na> МоО4 ° 2H>O — О, 4; дистиллированная вода до 1 л.рН среды доводят до 6,4 добавлением 2,0 н.водного раствора гидроокиси натрия, затем в бродильный чан вводят

500 мл выращенной в асептических условиях культуры MethyIococcus capsuIatus ATCC 919069 и обеспечивают его работу по периодическому режиму со скоростью перемешивания 1000 об/мин при 45»С, расходе воздуха — 10 об/час и метана — 10 об/об час. рН среды поддерживают на уровне

6,4 добавлением 2,0 н.водного раствора гидроокиси натрия или 3,6 r раствора серной кислоты, используя устройство для автоматического титрования.

По достижении плотности клеток

2,0 г/л режим работы переводят на непрерывный, вводя водную питательную среду Непрерывно в бульонную культуру и отводя ее со скоростью, обеспечивающей постоянство рабочего объема в бродильном чане объемом 5 л.

Начальная скорость разбавления сос-1 тавляет 0,05 час . По мере повышения плотности клеток скорость перемешивания, расход метана и расход: воздуха постепенно повышают и через

36 час, скорость разбавления составляет 0,18 час, скорость перемешивания — 2000 об/мин, расход воздуха—

48 об/об час и расход метана—

12 об/об.час.

На этой стадии к водному раствору, не содержащему азотной кислоты, добавляют водную питательную среду.

Новый раствор имеет следующий состав, мг: КН РО4 — 700; Na

600у М9804 ° 7Н О вЂ” 340; CaCI< (безводный) — 80; СцБ04 ° 5НZO — 8; FeSO4 7HLO

30; ZnS04 7Н О вЂ” 2; MnS04 ° Н О

2; CoCIZ 6HgO — 0,8; Na2NoO4 "2Н О—

0,8; дистиллированная вода до 1 л.

К бульонной культуре отдельно добавляют азот в виде гидроокиси аммония в количестве 95% для роста микроорганизмов. CKODOCTb введения определяют устанавливая плотность клеток растущей культуры .(методом оптической плотности) и используя плотность клеток для измерения скорости связывания азота биомассой.

Остальные 5% азота вводят вместе с элементарным азотом воздуха, подаваемого в бродильный чан.

Еще через 60 час достигают стационарного состояния при плотности клеток 11,67 г (сух.вес) на литр и ско.— рости образования 2,1 г/л час. При росте культуры пенообраэования не

667154 наблюдается. Бактериальный анализ бульонной культуры показывает наличие того же вида, как в примере 1.

Пример 4. Полностью повторяют методику, как описано в примере 3, но используют штамм MethyIococcus

capsuIatus NCIB 910856. Новый штамм 5 выделяют из образца грунта. Стацио-, нарное состояние процесса достигают при плотности клеток 13,14 r (сух. вес) на л/час, что соответствует скорости образования 2,4 г/л час. 10

Образования пены не наблюдают вид бактерий аналогичен виду примера 1, за исключением того, что использующим метан видом микроорганизмов явля- 15 ется MethyIococcus capsuIatus NCIB

910856.

Т а б л и ц а 3

Характеристики

11,67

10,50

12,90

13,14

0,0015 0,26

0 0015

0,29

12,90

10,24

97,48

11,38

97,56

13, 14

100

100

Процент извлечения

Процент потерь

2,52

2,44

Новый вид MethyIococcus capsuIatus NCIB 910856 образует меньшее

50 количество капсулированных полисахаридных материалов на единицу веса биомассы по сравнению с известными видами. изобретения

Формула

1. Способ получения биомассы, предусматривающий выращивание смешанной культуры бактерий на питательной среде, содержащей метан в качестве источника углерода, источник азота и необходимые минеральные соли,в услови:ях аэрирования газообразной смесью, содержащей свободный кислород и ме66 тан, с использованием в качестве

Концентрация биомассы в бульонной культуре, поступающей в центрифугу, г;веса сухих клеток на литр Концентрация биомассы в потоке, выходящем иэ центрифуги, r.såca сухих клеток на литр

Количество биомассы из

1 л бульонной культуры, г.веса сухих клеток на литр,ь-Иэ результатов табл. 3 видно, что биомасса эффективно извлекается при центрифугировании бульонной культуры, содержащей новый вид микроорганизма MethyÒocoññus capsuIatus NCIB

910856 тогда как из бульонной культуры, содержащей известный штамм

ATCC 919069, извлекается только

97,5% биомассы.

Из представленных данных также видно, что при равных условиях произ водительность в случае использования нового штамма NCIB 910856 значительно выше по сравнению с известным штаммом ATCC 919069

Кроме того, новый вид штамма имеет более высокий выход по метану по сравнению с известным.

22

Выращенную в стационарных условиях бульонную культуру из бродильного чана помещают в центрифугу йепрерыв= ного действия (Шарплесс тип 16) с загрузкой 17 кг, центрифугирование осуществляют при двух различных расходах:571 мл/мий и 774 мл/мин. Концентрацию биомассй в потбке, выходя-щем иэ центрифуги измеряют в пересчете на вес сухих клеток на литр. Затем на основе веса сухих клеток определяют вес биомассы, выходящей иэ центрифуги.

Сравнительные данные центрифугирования культур, содержащих штаммы

MethyIococcus capsuIatus ATCC 919069 (пример 3) и штамм Methylococcus сарзцХа1цз NCIB 910856 (пример 4) приведены в табл.3.

667154

2 метан-потребляющих микроорганизмов бактерий иэ родов MethyIomonas, 5lethyIobacter, MethyIosinus или

MethyIococcus, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью снижения пенообразования в процессе выращивания, осуществляют одновременное выращивание культуры бактерий, потребляющих метан, с одной или смесью бактериальных культур иэ родов Acinetobacter, AIcaIigenes, Agrobacterium, MoraxeIIa, Pseudomonas, FIavobacterium, BaciIIus., MiLrococcus или

Pediococcus не потребляющих метан и йспользующих пенообразующие продукты метаболизма культуры бактерий, потребляющих метан.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей метан, используют бактерии вида Methylococcus capsuIa-.

tus °

3. Способ по пп. 1,2, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей метан, используют, штамм NCIB 910856 М.capsuIatus.

4. Способ по пп. 1,2, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры потребляющей метан, исполь-зуют штамм ATCC 9 19069 M.capsu1atus.

5. Способ по пп. 1-4, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм MoraxeIIa NCIB 911135.

6. Способ по пп. 1-4, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей пейообраэующие вещества, используют штамм

AIcaIigenes, Agrobacterium или

Pseudomonas NCIB 911136.

7. Способ по пп. 1-4, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм

AIcaIigenes, Agrobacterium или

Pseudomonas NCIB 911137.

8. Способ по пп. 1-4, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве

5 культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм

AIcaIigenes или Pseudomonas NCIB

911138.

9, Способ по пп. 1-4, о т л и

1р ч а ю щ и й с я тем, что в качестве

Культуры, потребляющей пенообразую,щие вещества, используют штамм

А?са11genes NCIB 911139.

10. Способ по пп. 1-4, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм

Acinetobacter NCIB 911140.

11. Способ по пп; 1-4, о т л и— ч а ю шийся тем, что в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм

AIcaIigenes, Agrobacterium или

Pseudomonas NCIB 911141.

12. Способ по пп. 1-11, о т л и

25 ч а ю шийся тем,, что процесс выращивания бсуществляют при рН

5,5-7,0.

13. Способ по пп. 1-12, о т л ич а ю шийся тем, что процесс

30 выращивания осуществляют при 30-55 С.

14. Способ по пп. 1-13, о т л ич а ю шийся тем, что концентра цию ионов аммония в питательной среде в процессе выращивания поддерживают 2-50 мг/л.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

40 9421199, кл. С 12 D 13/06, 1974.

Составитель A. Бражникова

Редактор О.Иванова Техред д. дл4 ерова корректор A. Гриценко Заказ 3155/49 Тираж 525 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ппп . патеит 1, г.уигород, ул.проектеая,а