Способ приготовления посевного материала для культивирования микроорганизмов рода , продуцирующих глюкоамилазу

Способ приготовления посевного материала для культивирования микроорганизмов рода , продуцирующих глюкоамилазу

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О и и с g,-,í,:è:-в:

ИЗОБРЕТЕНИЯ „668941

Союз Советскик

Соцмапистм маски@

Респубими

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (б1) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 11.10.77. (21) 2533830/28-13 (S1) М. Кл с присоединением заявки № (23) Приоритет

С 12 D 13/10

1 овударстввнный номвтвт

СССР оо делам нзобрвтвнвй

N открмтнй

Опубликовано 25.06.79. Бюллетень № 23 (53) УДК

577.15.08 (088.8) .

Дата опубликования описания 25.06.79 (72) Авторы изоб етения Н. М. Степанова, В. И. Рубаннк, Б. А. Величко, К. А. Калунянц и T. В. Полянская (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА АЯРЕЯ61ЯОБ;ПРОДУЦИРУ10ЩИХ

ГЛ10КОАМИЛАЗУ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к ферментной.

Известен способ получения посевной культуры для культивирования продуцентав глюкоами- лазы, предусматривающий выращивание на сус- . 5 ло-агаре Aspergillus awamori 224 — 21 в течение

6 сут. с последующим засевом на производственную среду в количестве 2%, нри этом максимальная активность культуральной жидкости достигает на 144 часу 500 — 550 ед/мл по Зихер- iÎ

Блейеру или 50 — 55 ед. но глюкозооксидазно му методу (11.

Наиболее близким па техническая сущности

- является способ приготовления посевного мате- i5 риала для культивирования микроорганизмов рода Aspergillus, цродуцирующих глюкоамилазу, предусматривающий лосев продуцента на твердую питательную среду, выращивание прадуцепта до обильного спороношения и последующее повторное культивирование с добавлением производственной среды при перемешива нии (2).

Однако из-за маЛой активности посевного материала увеличивается его расход, а также длительность процесса культивирования.

Целью изобретения является получение более активного посевного материала.

Это достигается тем, что в качестве твердой питательной среды используют смесь из 10 — 30% кукурузной муки и 90-70% солодовых ростков, а активацию посевного материала осуществляют повторным культивированием при добавлении производственной среды и перемешивании до появления у спор 1 — 3 клеточных проростков.

Плесообразно увлажнять твердую среду до

60% влажности раствором с<лей, входящих в состав производительной среды.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

; Готовят твердую питательную среду, содержащую 10-30% кукурузной муки и 90-70% соло"авых ростков, увлажненную до содержания влаги 40 — 60% растворам солей, вход цих в состав производственной среды. Приготовлеи66894l

Формула изобретения .Способ приготовления посевного материала для культивирования микроорганизмов рода

Aspergi l lus, продуцирующих глюкоамилазу, предусматривающий посев продуцента на твердую питательную среду, выращивание продуцента до обильного спороношения и последующее повторное культивирование с добавлением производ. ственной среды при перемешивании, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью получения ю более активного посевного материала, в качестse твердой питательной среды используют смесь из 10 — 30% кукурузной муки и 90 — 70 o солодовых ростков, при этом повторное культивирование осуществляют до появления у спор 1 — 3

1 клеточных проростков.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что твердую среду увлажняют до 40 — 60%: влажности раствором солей, входящих в состав производственной среды, Источники информации, принятые во внимание цри экспертизе

1. Авторское . свидетельство СССР 1Р 259031, кл. С 12 0 13/10, 1968.

2. Патент Франции Н 1485422, кл. С. 12 Ь, 1967.

Составитель T. Мелентьева

Техред И. Асталош Корректор А. Власенко

Редактор A. Bep

Заказ 3606117, Тираж 525 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета, СССР по делам изобретений и открытии

113035 Москва Ж-35 Ра скм наб . 4 5

Фйлиал ППП1 "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 иую среду засевают продуцентом глюкоамилазы, например Aspergillus niger, Rhizopus delemar, и культивируют до обильного спороношения, например, в течение 6 — 7 сут, затем выращенную культуру активируют. Для этого в нее (культуру на твердой среде) добавляют производственную среду в количестве 1:5 — 1:7 об. вес, и прокачивают на качалке при 180 — 240 об/мин до появления у спор 2 — 3 клеточных проростков (целесообразно прокачивать в течение 6 — >0

12 часов), Приготовленный посевной материал вводят

s производственную среду в количестве 0,01—

0,5%.

«1

Пример- 1, Питательную среду, состоящую из 15% кукурузной муки и 85% солодовых ростков, увлажненную до содержания влаги 50 o раствором солей, содержащим 0,6% (NH4)sSO4, 0,8% ИНд Н Р04, 0,05% MgSO4, 0,1% КН РО, засевают культурой гриба Asрегgillus niger, выращенной на сусло-arape, и выдерживают в термостате при 33 С в течение

6 — 7 суток до обильного спороношения, Получают споровый материал, содержащий 5,5 ° 10 спор в 1 г воздушно-сухой культуры. Затем 25 и выращенную культуру вводят. производственную среду, содержащую 4% кукурузной муки, 18,5% вытяжки из солодовых ростков, 0,6% (ЙН4)sSG4, 0,6% НН4Н РО4, 0,1% KHgPOg, 0,05 5lgSG4, и прокачивают. 12 час до образо- 36

-saws 1-3-клеточных проростков при температуре 33 С и 180-240 об/мин.

Полученную посевную культуру вводят в количестве 0,5% в производственную среду, содержащую: 4% кукурузной муки; 18% вытяжки . 3 из солодовых ростков; 0,6% (йН4)з8О4; 0,6@

NH4HsPG41 0,1% КНрРО4, 0,05% MgSO культивируют в течение 48-72 час. На 48 часу куль тивирования активность.глюкоамилазы в культуральной жидкости равна 48 — 50 ед/мл, а на 40

60 часу — 53-55 ед/мл.

Активность определяют по, глюкозооксйдазному методу.

Пример 2. Питательную среду, состоящую из 30% кукурузной муки и 70% солодо- 4$ вых ростков, увлажняют до 60% влажности раствором солей; содержащим 0,6% (йН4) SO„;

0,6% ИН4НзРО4, 0,05% MgSO4; 0,1% КН2Р04„ ртерилизуют при 121 С в течение 1 час н охлаж«ают до 33 С, Затем засевают культурои гриба зо

Aspergi1lus niger, выращенной на сусло-агаре, и выращивают в термостате при 33 С в течение 6 — 7 суток. Получают посевной материал, содержащий 6,0il0 спор в 1 г воздушно-сухой культуры. .В.выращенную культуру вводят производственную среду состава, указанного в примере 1, и прокачивают на качалке 10 час при 33 С и

180 — 240 об/мин до образования 3-клеточных проростков.

При засеве среды, указанной в примере 1, полученной посевной культурой в количестве 0,5% и культивировании в течение 48 — 72 час получают культуральную жидкость, имеющую 50 ед/мл глюкоамилазной активности.

Таким образом, предлагаемый способ позволил получить более активный посевной материал, благодаря чему сокращается его количество в 2 раза (в производственную среду вводили 05% вместо 1%). Кроме того, получили высокую акmBHocTb глюкоамилазы в культуральной жидкос.ти (на 48 часу 48 — 50 ед/мл вместо 43 eg/Më).