Способ отбора авирулентных иммуногенных мутантов бактерий кишечной группы

Способ отбора авирулентных иммуногенных мутантов бактерий кишечной группы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистимеских

Республик

ОП ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ и АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С 12 К 1/02

Государстаеикый кюиктет

СССР по делам изобретений . и открытий (53) УДК 576.8.

093 1 (088 8) Опубликовано 25 06.79. Бюллетень № 23

Дата опубликования описания 25.06.79 (?2) Авторы изобретения

Г. И. Бурд, T. А. Лычева, А. М. Умяров, Т. Н. Большак

В. М. Бондаренко, В. Г. Петровская и В. Н, Гершанович

1 Ф . е.1с

Ордена Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии нм. почетного академика Н. Ф. Гамалеи АМН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОТБОРА АВИРУЛЕНТНЫХ ИММУНОГЕННЫХ МУТАНТОВ

БАКТЕРИЙ КИШЕЧНОЙ ГРУППЫ

Изобретение относится к медицинской микробиологии.

Известен способ отбора авирулентных иммуногенных мутантатов бактерий кишечной группы путем посева исходной суспенэии бактерий на плотную питательную среду с последующим выращиванием в присутствии антибиотика и от-. бором мутантов (1).

Однако такой способ не обеспечивает высокой жизнеспособности мутантов.

Целью изобретения является повышение жиз1В неспособности мутантов.

Это достигается тем, что исходную суспенэню перед посевом обрабатывают мутагеном, высевают на минимальную солевую среду с глюкозой, инкубнруют, затем добавляют пенициллин

15 и инкубируют на качалке, далее; пересевают на индикаторную среду с глюкозой, после инкубироваиия отбирают бесцветные колонии и клонируют на индикаторных средах с углеводами, и

20 отбор мутагенов проводят по признаку неспособности к ферментации нескольких углеводов.

Пример. Исходный штамм ЗЫ9е11а

flexneri 2a 63 с генотипом asp nic ilu xyl Ьо

mal rha fuc ara обрабатывают мутагеном (нитрозогуанидниом, 500 мкл/мл), разводят в

100 раэ минимальной солевой средой, содержащей 0,4% глюкозы и необходимые ростовые факторы, и нодрашивают 18 час прн 37 С, Затем клетки иикубируют в течение б час на качалке при 37 C в той же среде, но с добавлением 400 ел/мл ценициллнна.

Тем самым популяцию исходных бактерий, утилнзирующих глюкозу, обогащают мутантами, не ферментирующими углевод, так как пенициллин убивает только делящиеся клетки.

После этого производят высев обработанной неиициллином суспензии на чашки, содержал ие агаризованиую индикаторную среду ЭМС следующего состава: пелтон 1%, 1чаС1 0,8%, глюкоза 1%, эозин 0;4%*:метиленовая синь 0,065%.

При росте на среде ЭМС бактерии дикового, типа сбражнвают глюкозу, образуют колонии густо-черного цвета с металлическими (бронзо-: вым) блеском. Мутанты, не утилиэируюшие глю.;озу, дают бесцветные колонии.

Мутантные колонии, отобранные. на ср«е

ЭМС плюс глюкоза, колонируют иа той же среде, 668942

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред И. Асталош Корректор А. Власенко

Заказ 3606/17 . Тираж 525 Подписное

ЦИИИПИ Государственного комитета СССР

rro делам изобретений л1 открытий

113035, Моск а, Ж-35,. Раушская наб., д. 4/5

Филиал ЦЙП Патент",г. Ужгород, ул. Проектная, 4 проверяют на способность ферментировать манноэу, фруктозу и маннит на среде ЭМС, содержащей вышеуказанные углеводы, и отбирают те, которые .не сбраживают все сахара одновременно. 3

Испьггания мутантов, выделенных предлагаемым способом, т. е. селекцион"рованных по о признаку неспособности утилизировать.глюкозу, манноэу, маннит и фруктозу, показывают, что все они теряют вируленп ость, сохраняют 10 иммуно енность, обладают нормальной жизнеспособностью при культивировании на обычных питательных средах! и стабильно сохраняют при. обретенные признаки,не образуя ревертантов, как спонтанно, так и после обработки мутагдном. И

Применение предлагаемого способа позволит выделять авирулентные иммунногенные мутанты бактерий кишечной группы, сохранившие . нормальную жизнеспособность при культивнро ванин на средах, не содержащих антибиотик, 26 что упрости и удешевит производство живых

-paxrrrar, а также т1овысит качество вакцинных

° Г .. n ferrapams.

Способ отбора авирулентных йммуногенных мутантов бактерий кишечной группы путем посева исходной суспенэии бактерий на плотную питательную среду с последующим выращиванием в присутствии антибиотика и отбором мутантов, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности мутантов, исходную суспензию перед посевом обрабатывают мутагеном, высевают на минимальную соленую среду с глюкозой, инкубируют, затем добавляют пенициллин и инкубируют на качалке, далее пересевают на индикаторную среду с глюкозой, после инкубирования отбирают бесцветные колонии и клонируют на индикаторных средах с углеводами, и отбор мутантов проводят по признаку неспособности к ферментации нескольких углеводов.

Источники информации, принятые во внймание при экспертизе

1. ЖМЭИ, N 9, 1967, с. 28 — 32.