Штамм для приготовления вакцины против клещевого энцефалита

Штамм для приготовления вакцины против клещевого энцефалита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<>669742 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 270477 (21) 2481477/28-13 с присоединением заявки N2 (23) Приоритет

Опубликовано 0504,80. Бюллетень ¹ 13

Дата опубликования описания 050480 (51)М, Кл.

С 12 К 5/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (53) УДК 615.371 (088. 8) (72) Авторы изобретения

И.Н.Лезина, И.С,Воробьева, Р,Н,Воробьева и Л.А.Верета

Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.A. Тарасевича и Хабаровский научноисследовательский институт эпидемиологии микробиологии (71) Заявители (54) ШТАММ viri ixodici encephalit

ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КЛЕЩ

Изобретение относится к области вирусологии и касается иммунопрофилактики вирусных заболеваний, Известен штамм viri ixodici encephalitidis Софьин, используемый для приготовления вакцины против клещевого энцефалита (1).

Однако данный штамм является недостаточно иммуногенным: низкое накопление вируснейтралиэующих и гемаг- 10 глютинирующих антител у вакцинируемых, обладает недостаточно высокой актигенной активностью.

Целью изобретения является выделение штамма вируса клещевого энцефа-15 лита, обладающего повьхаенной иммуногенностью, Поставленная цель достигается путем использования штамма viri ixodici

encephalitidis (т 205, 20

Штамм viri ixodici encephalitidis

9 205 выделен иэ клещей Т.persulcatus в зоне хвойно-широколиственных лесов района Приамурья, хранится в коллекции института Вирусологии под регист-25 рационным номером ГКВ-00553 и характеризуется следующими культуральными, биологическими и другими свойствами.

Физико-химические признаки. Индекс инваэивно ти (в логариФмах) 3,23. 30

i di s Р 205 ДЛЯ ПРИГОТОВ3)ЕНИ Г

ЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА !

) с.м лд.

Индекс инактивации деэоксихолатом натрия 4,25. Индекс теомоинактивации

1,4 (при прогревании в течение 20 мин при 50 C).

Культуральные признаки. Штаммы хорошо размножаются в культуре ткани в перевиваемой линии клеток СПЭВ, в первично-трипсиниэированных клетках культуры фибробластов куриного и перепелиного эмбрионов, Штамм на 4-5 сутки вызывает четкую деструкцию клеток СПЭВ, на первичной культуре клеток куриного и перепелиного эмбриона никакой дегенерации не дает. Пик накопления вируса в культуральной жидкости во всех укаэанных клеточных культурах отмечается на 5 сутки.

THTphI,âèðóñà 7,5-7,8 логарифма

Лд о IMII °

Образует бляшки под агаровым покрытием в первичной культуре фибробластов куриного эмбриона и в перевиваемой линии клеток СПЭВ. Титры по БОЕ. 9,0-10,0 в 1 мл.

Серологические признаки. Штамм

Р 205 нейтрализуется сыворотками к, штаммам вируса клещевого энцефалита Софьин, Пан, Хабаровский-17 .

669742

Обладает гемагглютинируюшими свойствами. Гемагглютинируюший антиген агглютинирует О,ЗЪ-ные гусиные эритроциты в зоне рН фосфатного 6,2 и имеет титр в РГА 1:1280.

При репродукции вируса в культуре ткани гемагглютинины накапливаются в титре 1:80, При инокуляции штаммом Р 205 кроликов и морских свинок в крови животных на 10 — 14 день образуются вирус- IQ нейтрализующие антитела с титром

1:1280, Индекс нейтрализации кроличьей сыворотки с гомологичным штаммом 5012, по БОЕ 10000, в культуре ткани титр сыворотки 1:80 — 1:160.

Биологические признаки, Штамм является высокопатогенным для всех весовых категорий мышей БАЛБ и беспородных, у зараженных мышей вирус вызывал типичную картину экспериментального менингознцефалита с инкубационным периодом при внутримозговом введении 5-6 дней, при внутрибрюшинном и подкожном 6-8 дней. Максимальные титры (в логарифмах ЛД /мл) при внутримозговом введении 9,0-10,8, подкожном 8,0-9,0, внутрибрюшинном

7,0-8,5, индекс инвазивности 0,67-1,2, AHòèãåííûå свойства. Антигенные связи штамма 9 205 изучены в перекрестках РТГА и кинематической РТГА.

В реакциях были использованы гипериммунные кроличьи сыворотки к штаммам вируса клещевого энцефалита Софьин Пан, Хабаровский-17, Абсет- З5 таров, 205 и боратно-солевые антигены.

Штамм Р 205 имеет близкое антигенное родство с западными и восточными 40 вариантами вируса клешевого энцефалита. Ниже показаны антигенные связи штамма 9 205.

Сыворотки Штамм 9 20 5 штаммов 45

Штамм Р 20 5 1:1280 Софьин 1: 320-640 Хабаровский-17 1:640 Пан 1:640 Абсеттаров 1:320

Сыворотка к штамму Р 205 реагировала со штаммами Софьин, Абсеттаров в титрах, равных гомологичному (1:1280), со штаммами Пан, Хабаровский-17 — соответственно в 4 и 2 раза ниже гомологичного титра, в то время, как сыворотка к штамму Софьин реагировала в высоком титре (1:1280) только с гомологиччым штаммом, Со штаммами Пан, Хабаровский-17, Р 205, Абсеттаров титры были соответственно в

4-8, 4, 4-? раза меньше, чем с гомопогичным i:аммом, Сравнительные данные антигенной активности штаммов Р 205 и Софьин

Антигенная активность сывороток штаммов Софьин

У 205 Софьин 1: 1280-2560

1:1280

1:160-320

1:320 в Паню!

1:320 Хаба- 1:640 ровский-17

1:320-640

9 205

1:1280

1:1280 Абсет.. аров

1: 320

Как видно из табл. штамм Р 205 обладает более высокой антигенной активностью по сравнению со штаммом Софьин, в среднем в 4 раза превышая последний и широким антигенным спектром, имея близкие связи с западным и восточным вариантами вируса клешевого энцефалита.

Иммуногенные свойства. Вызывает иммунную зашиту с высоким показателем резистентности 10000000 против вирулентного тест-штамма Абсетта.ров .

Использование штамма 9 205 для приготовления инактивированной вакцины против клешевого энцефалита поясняется следуюшим конкретным примером.

Пример. Для получения инактивированной вакцины используется первично-трипсинизированная культура фибропластов 9-дневного куриного эмбриона ° После удаления головы, внутренних органов и ороговевших частей тела эмбрионы, заливаются 0,1%-ным раствором трипсина. Трипсинизация проводится в 3 цикла, каждый в течение 10 мин при комнатной температуре, Полученная суспензия клеток центрифугируется при 2000 оборотов в течение 10 мин, осадок ресуспендируется в среде лактальбумина с добавлением

10%-ной нормальной бычьей сыворотки.

Взвесь клеток (500 тыс. в 1 мл) высевается в 1,5-литровые глатрасы. Культура для заражения используется через

48 ч после посадки по мере образования плотного монослоя.

Посевным материалом служит 103-ная суспензия мозга мышей, Вылей заражают в мозг штаммом 9 205 по 0,03 мл.

При проявлении выраженных параличей на 4-5 сутки мыши забиваются, извлекается асептично мозг и готовитоя

10Ъ-ная суспензия мозговой ткани

669742

Формула изобретения

Составитель Н.Бондаренко

Редактор Е,Месропова Техред О.Андрейко Корректор М.Вигула

Заказ 736/48 Тираж 522 Подписное

11НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул,Проектная,4 путем оастирания в ступке с добавлением 199 среды. Полученная мозговая взвесь центрифугируется при 2000 оборотах в течение 10 мин. Надосадочная жидкость отсасывается и вносится после удаления ростовой среды на монослой культуры ткани в объеме 1,5 мл.

Зараженные культуры помещаются в термостат при 37ОС в течение 2 ч для адсорбации. По истечении периода адсорбации в зараженные матрасы вносится питательная среда 199 с 1Ъ человеческого альбумина. На 5 сутки после заражения проводится сбор культуральной жидкости. Инактивация вируса осуществляется формальдегидом в конечной концентрации 1:200 при +30 С 15 в течение 3 суток.

Часть инфицированной культуральной жидкости до инактивации берется для проверки инфекционности материала при внутримозговом титровании мышей 20 (7-8 г веса), Титр культуральной жидкости составлял логарифм ЛД6о

8,0/1 мл.

Контроль на остаточную нейровирулентность (безопасность) инактивиро- 25 ванного препарата проверяется в опытах на мыаах при внутримоэговом введении десятикратных разведений препарата 10 — 10 .

Инфекционные титры вируса при репродукции его в мозге мышей и в культуре ткани значительно превышают титры штамма Софьин (титры в логарифмах ЛД д/1 мл при внутримозговом введении 8,5-9,0; подкожном

6,5-6,7; внутрибрюшинном 6,2-7,0; титр по БОЕ 7,8).

Инвазивность штамма Р 205 выше по сравнению со штаммом Софьин (индекс инвазивности штамма 9 205 составляет 0,67 — 1,2, штамма Софьин 40

1,8 — 2,9) .

Штамм Р 205 обладает по сравнению со штаммом Софьин более высокоиммуногенными и антигенными свойствами. Инактивированная вакцина, при- 45 готовленная с использованием штамма

М 205, имела высокий индекс резистентности — 10000000 (индекс резистентности штамма Софьин составляет

10000-1000000). 50

Штамм У 205 обладает широким спектром антигенных связей: имеет близкое антигенное родство как с западными, так и восточными вариантами вируса клещевого энцефалита, и высокой ант»генной активностью, в среднем в 4 аза превышающей активность штамма Софьин, Ввиду того, что накопление инфекционного вируса как при репродукции в мозге мышей, так и в культуре ткани выше по сравнению с используемым в настоящее время штаммом Софьин, приготовление вакцины с использованием штамма р 205-является более экономичным, Штамм ч1г ixodici encephalitidis

9 205 для приготовления вакцины против клещевого энцефалита. Хранится в коллекции института вирусологии под регистрационным номером ГКВ-00553.

Культурапьные признаки, Хорошо размножается в первичной культуре клеток фибробластов куриного и перепелиного эмбрионов и в Перевиваемой клеточной линии СПЭВ с йиком накопле" ния вируса на 4-5 сутки.

Биологические признаки, Высоко патогенен для мышей линии БАЛБ и беспородных. Пассируется через мозг мышей, Биологическая активность. Обладает высокой инфекционностью и инваэивностью, титр накопления вируса в культуре ткани 7,5-7,8 логарифма ЛД О „ в мозге мыаей 9,0-10, 8 логарифма

ЛД о /мл.

Серологические признаки. Вызывает образование вируснейтрализующих и гемагглютинирующих антител, Геммагглютинирует эритроциты гуся.

Антигенность, Обладает широким спектром антигенного действия и высокой антигенной активностью, Иммуногенность. Вызывает иммуногенную защиту с высоким показателем резистентности — 10000000 против вирулентного тест-штамма Абсеттаров вируса клещевого энцефалита.

Источники информации, принятые во внимание при эксперти-.

1. Каталог штаммов, вып,4, М., 1962.