Способ получения антибактериального и антикокцидиозного вещества
Патент 673184
Авторы
Классы МПК
Способ получения антибактериального и антикокцидиозного вещества
Иллюстрации
Реферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Союз Советских
Соцналнстнческнх
Республик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 280275(21) 2111290/28-15 (23) Приоритет - (32) 010374 (3! ) 7407066 (Зо) Франция (51) М. Кл.
С 12 D 9/16
Государственный комитет
СССР по делам изобретений н открытий
Опубликовано 05 0779. Бюллетень,% 25
Дата опубликования описания 05.07.79 (53) УДК 615. 779.. 93 (088 ° 8) (72) Авторы изобретения
Иностранцы
Жан Флоран, Жан Люнель и Дениз Манси (урожденная Куртийе) (Франция) Инострання фирма Рон-Пуленк Эндюстри (Франция) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ AHTHEAKTEPHAJIbHOI О
И АНТИКОКЦИДИОЗНОГО ВЕЩЕСТВА
Изобретение относится к способам получения антибиотиков.
Известен способ получения антибиотика Д 6599, в котором используют штамм А 6599 гриба $treptomyceS higroscoР с бр . выращиваемый в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в течение 2-5 дней прн
28-32 С, а затем фильтрат культуральной жидкости экстрагируют органическим растворителем (1).
Известен также способ получения группы антибиотиков при выращивании
15 гриба бт reptomj eel в аэробных условиях на средах, содержащих источники углерода, азота и минеральных солей, при 27-29вС, Из культуральной жидкости антибиотики выделяют посредством вкстракции или адсорбции (2) .
Недостатком известных способов является то, что полученные продуктыантибиотики угнетают не все микроорганизмы, в том числе и кокцидии.
Цель изобретения состоит в получении наиболее активного антибиотика продуцируемого грибом $1reptomусЕа °
Поставленную цель достигают тем, что в качестве гриба — продуцента. используют штамм Ыге 1о пусе
gOtti ar ius D8, 25. 881 (NRRZ 5 . 785) и выделяют продукт 30.504 HP в форме свободной кислоты, ее металлической соли с азотсодержащим основанием.
30.504ЯР представляет особый интерес вследствие антикокцидиозной активности, которую он проявляет наряду со антибактериальной и антималярийной активностью. 30.504 RP может быть получен при культивировании на соответствующих средах.
30.504 RP - белый микрокристаллический порошок, легко растворимый в таких хлорсодержащих растворителях, как хлористый метилен и хлоро-. форм, в таких спиртах, как метанол, в диметилформамиде; относительно растворимый в ацетоне и этилацетате, мало растворимый.в гексане и практически нерастворимый в воде (Французская фармакопея, изд. ф, ч. «й с. 13,, 1972).
Найдено, В: С 69,4; Н 9,0; О 21,0.
30,504 RP — соединение кислотного характера, нейтральный эквивалент
830 (определен в растворе диметилформамида титрованием окситетрабутиламмонием) .
St. acr eus
Staphylococcus аи Реиб штамм Смит
0,5
ATCC 9341
Sareina Ennea
0,9
Streptococcus $ae саба
ATCC 80 4 3
0,1
streptococcus ру фелеэ hemoEyti cus штамм Диг (институт Пастера) 0,2
Q рбхоссие pheunorviof штамм Тил
0 05 (институт Пастера) Neisseria ca$arr hoPs
А 152, (институт Пастера) abaci Ыиь сспеиь
ATCC 6630
0,1
5aciLfus Sub Cia
0,2. ATCC 6633
h4gcobactei.i Um S pecies
АТСС 607 сЫЗМР150
>150 штамм (,асанье.>150
3 67318
Т. пл. 200 С (в приборе Кофлера) . " () -" -79 у (d )16 " -188 у (С ) -378 (во всех случаях С-1%, метанол)
УФ-спектр не специфичен1
ИК-спектр (таблетка с КВ ), см 3
-Ф
3440 (c.), 3030 (плечо) „2960 (с.)
2938 (с.), 2880 (с.) 2855 (плечо) r 2640 (о. сл), 2060 (о.сл 1945 (o. ,сл), 1900 (о. сл.), 1785 (плечо), 1705 (с.), 1632 (cp.), 1622 (плечо), 1535 (о.сл.), 1458 (с.), 1055 .(плечо), 1380 (c.), 1325 (cp.) . 1315 (плечо), 1295 (плечо), 1272 (cp.), 1225 (сл.), .1200 (о. сл), 1172 (cp), 1140 (ср. ), .1115 (плечо), 1100 (плечо), 1085 (с. ), 1070 (плечо), 1045 (плечо),: 1038 (с.), 1012 (ср.) 15
980 (с.), 958 (с.), 935 (ср.) 915 (cp.), 880 (сл.), 865 (о. сл.), 845 (о. сл.), 825 (сл.), 792(ср.), 1
ЬВ(сна йбеп1егчае &Ырра L. (институт;Пастера) бабпо.пеИа para typhus А (институт Пастера) 775 (сл. ), 735 (сл), 700 (сл.), 675 (плечо), 655 (сл), 630 (плечо), 615 (cp ° ), 565 (плечо), 525 (cp.), 495 (cp.), 465 (о. сл. ), 445 (сл.).
ТСХ на силикагеле: 23 0,45 в системе этилацетат-циклогексан-Во» да-бутанол (50:50г25:5 по объему) и
R3 0,55 в системе хлористый метилен метанол (94г6 по объему) . 30.504 RP проявляет бактериологическую актив-. ность, особенно на некоторых бактериях при применении окрашивания по
Граму.
Бактериостатическую активность
30 ° 504 РР определяют методом разбавления как минимальную концентрацию, необходимую для подавления роста бактерий.
Минимальная бактериостатическая концентрация, мкг/см :
673184
Продолжение табл. 1 штамм Fonfene
>150
>150
РгoteuS Yu(дог> 5
>150
pgeudomonas aeru(tnosa
5аСгпопеЫа SchottmueKert
)oaratgpht о (институт Пастера) (П 85 мг/кг для цыплят при единичном приеме.
Антикокцидиоэная активность проявляется при скармливании цыплятам, зараженным, например, Elmer ia tenetta и Брег)а acervutino, пищи, содержащей 0,005-0,04. вес.Ъ 30.504 RP, 30.504 RP обладает антималярийной активностью при экспериментальном заражении плазмодия мыши и цыпленка. 20
Гриб-продуцент-штамм Stleptornqces
+ttlnatiup был выцелен иэ пробы почвы, - взятой в Индии, ему присвоен номер DS 25.881.:
Проба штамма передана Северной областной исследовательской лаборатории CtrlA сельскохозяйственного депар,тамента в Пеории, Ш (CILIA), гце зарегистрирована как NRRL 5.785.
Этот штамм, имеющий характеристики, которые не позволяют его идентифицировать с каким-либо уже описанным видом, нужно рассматривать как новый вид, названный Streptom yces go t/ina r iud DS 25.881. Его можно сравнивать
co Stveptomgcep Ь g r»ogcopicug (Mak$rnan.
g.Ë.Асбпотуге е$, The Чдй аrnS and Witkin@
Company, ВаНтоге, V.2. (961, HerseyÛ iiia--.
nues of 3eterrninative Bodteriotogg, The
ViC4iamg ап4 4/itching Corn anö, Batti more, изд. 1957),так как подобно последнему
Ptr eptoznyceg pattinariug DS 25. 881 " развивает растительный мицелий в общем от желтого или серо-желтого.до 45 желто-коричневого или коричнево-желтого цвета и имеет воздушный спорообразный мицелий серого цвета. Он не об-. разует меланина в органических средах, не производит НдS, медленно разжижа- 50 ет желатину, на которой он не образует растворимый пигмент (на совокупности этих питательных сред, а также на синтетических органических питатель-:.ных средах), он или не образует раст- 55 ,ворймый пигмент, или образует только слабо окрашенный пигмент от желто-коричневатого,до коричнево-желтого цвета Кроме этого, gtr eptoгпусе$ fatti narlu$ DS 25. "881 на агаре Хиккея и 0
Треснера производит растворимый фиолетово-розово-коричневый пигмент.
От 8treptomycep hggvogcopicv$ он отличается формой спорофоров и тем, что ни в каком случае в его воздушном споровом мицелии не образуется черных блестящих зон, характерных для gtreptornyceg и jgrogcoplt up.
; 1геР1оп усе$ фа (Иnari u$ DS 25. 881 может быть сравним с $t repto mu C e S а и гe o abaci eng ., который совсем не производит меланина, обычно образует растительный мицелий от желтого до. желто-оранжевого или коричневатого цвета, имеет серый воздушный споровый мицелий.
Кроме того, &герелоrnqCep auге— оРОС ел5 не образует растворимый пигмент на многочисленных „:питательных средах, лишь в некоторых случаях он образует растворимый пигмент от желтого до коричневатого цвета, вообше достаточно слабого. В некоторых случаях растительный мицелий 5 герto mqce S a u reofa cien g окрашивается в коричнево-красный-пурпурный цвет, но здесь речь идет о пигменте, не диффундирующем в среду, который не может соответствовать растворимому фиолетово-розово-,коричневатому пигменту, который производит StreptoтпуCM fatti.nariup DS 25.881.
ptreptomусеб aureofaoiens не разжижает желатину, на которой он образует кремовый растительный мицелый, и не коагулирует и не пептонизирует снятое молоко, тогда как
Stre pto mgceP а 1ti nori u g DS
25. 881 разжижает;желатину, на которой он образует коричнево-желтый мицелий, и дает чистую пептонизацию и регулярность снятого молока.
Таким образом, gt r eptorn gc eg ga t t inariug DS 25.881 отличается также и от этого вида. Способность 1гeptoтпцсе$ fatti nariu$ D$ 25.881: усваи. вать различные источники, углерода и азота определяют методом Придхама и Готтлиба (.3. of Вас1е jo t og g, 56, 107-114, 1948) при замене либо глюкозы на различные источники углерода, либо (NH>) SOI, на различные источники азота.,Йгер1отпуСе$ gattinariuS РБ 25; 881.
D-ксилозу, Ь -арабаноэу, 1, -рамноэу, D-глюкозу, 33 .-,ãàëaêòîçó, В -фруктозу, В-маннозу, лактозу, мальтоэу, сахарову, трегалозу, целлобиозу, декстрин, крахмал, гликоген, глицерин,п-маннит, инозит, салицин, усваивает; 1 -рибозу, L -сорбоэу, рафинозу, инулин, зритритол, ацонитол, дульцит, D -сорбит не усваивает: NaNO, NaNO (Растворимый пигмент
Наблюдения и биохимические свойства ь Растительный мицелий или другой вид культуры
Воздушная система (содержащая совокупность воздуш- . ного мицелия и споруляции) Споры от цилиндрических до яйцевидных, размером
1,0-1,2 мкм 0,81,0 мкм. Спорофоры в виде грозди, споровые волокна редкие и .гибкие, часто имеющие скрученную форму или образующие виток один спиральный или случайно несколько витков
Агар:Хиккея и Хоро- Светло-серая
Треснера шая Переход от до темно-се светло-корич- рой, хорошо нево-желто- развитая го к коричнево-фиолеI товому
Фиолетоворозово-коричневатый
От белесова- Желто-коричнетой до серова- вый той, очень плохо развитая
Агар Беннета Дос- Желтый
f таточно хорошая Arap Эмерсона Хоро- Желтб= Белесоватая, Слабо коричне шая корич- очень плохо вато -желтый
В неватый развитая
67318 (NHq)g о„, (ИН„)д ЯРО„, мочевину, L-.àcïàðàãéí, глюкозалин, гликоколь, LD-алании, L D-валин,<>-аспарагиновую кислоту, Ь -глутаминовую кислоту, Ь-аргинин, L -лизин, LD-серин,Ы)-треонин,LD -метионин, Ц)-фенилаланин, L-тироэин, L -пролин, L --оксипролин, 5
Ь -триптофан усваивает: саркоэин, таурин, бетаин не усваивает.
Для выделения штамма Ягер1отпусей фа(((паriug DS 25. 881 суспендируют небольшое количество почвы, взятой )0 в Индии, в дистиллированной, стерильной воде, разбавляют суспензию до различных концентраций и наносят на поверхность чашки Петри, содержащей питательную агаровую сРедУ. После 15 инкубации в течение нескольких дней при 26 С колонии, которые хотят выделить для дальнейшего изучения, извле= кают и пересаживают в питательную агаРовую среду. gk гЕр(c myeeg файЬnarigg
DS 25. 881 образует споры от цилиндрических до яйцевидных, размером 1,01,2 мкм, 0,8-1,0 мкм. Эти спорофоры образуют грозди, споровые волокна, редкие и гибкие на концах, или принимая слегка скрученную форму, или образуя спиральйый вйток, или случайно несколько витков.
По своему способу размйожения по средством спор этот родоначальник. ,вида классифицируется в разделе 30
8ection Retinacut.um по классификации придхама. Ф(ге р1оmц шеф ga (Кда4 8
ri S DS 25.881 хорошо развивается при 26 и 37, С но не при 50 С.
Он представляет собой воздушно-споровый мицвлий серого цвета. Окрашивавание его растительного мицелия в зависимости от среды желтое, или желто-сероватое до желто-коричневого, или коричнево-желтое. 3а исключением свойственного ему производства растворимого фиолетово-розово-коричневого пигмента на агаре Хиккея и Треснера на питательных средах, где его наблюдали, производит растворимый пигмент малой интенсивности, меняющий окраску от.желто-коричневатой или серо-коричневатой до коричневожелтой.
При выращивании при 26 С на этих средах ЙгеР1отпусе ga((inatiug DS
25.881 меланина не образует, H S не производит, к тирозиназе относится отрицательно, желатину разжижает, целлюлозу усваивает, нитриты из нитратов образует очень хорошо не только на питательном нитритном бульоне, но и на синтетической среде, крахмал гидролиэует, пептонизирурт снатое молоко без коагуляции с очень небольшим подкислением.
Свойства баггер(отпусе ga16попиИ.
DS 25881 после развития в течение
2-3 недель при 26 С (если нет противоречащих указаний) на питатель- . ных агарах:и в бульонах приведены в таблице.
67 3184
6 б
Агар-мука овся- ная экстракт томатов Придхама
Достаточно хорошая
То же
То же Желтый
Белесоватая, очень плохо развитая
Агар- глюкоза-пептон (W -6) Умерен-Коричненая во-желтыйЬ
Никакой (белесоватая, следы) Никакого
Агар питательный
Никакой
Растворение малата слабое и медленное
Слабая Слабо желтокоричневатый
Агар на малате кальция
Крейнского
Слабыйжелтокоричневый
Белесоватая, (следы) Меланин не производит
Очень Коричнеумерен-во-желная тый6
Агар-тирозин-экстракт дрожжеймеланинв
Никакого.
Никакой, Агар на яичном альбумине (W -12)
2, Агар-глюкоза-аспарагин (W-2) Белесоватая, очень слабо развитая
Желтый
От белесоватой до светло-серой и темно-серой
Агар-глицерин-аспарагин (W-3)8
ДостаСлабо коричневатожелтоватый точно хорошая
Умеренная
Агар-крахмал-минеральные соли
Придхама
Желтовато-коричневатый
От .белесоватой до светло-серой и темно-серой, слабо развитая
Ю(® -23 с 2% агара) . таточ гар-экстракт но ходрожжей Придха Рошая ма
Очень Слабо слабая желтокорич Ь неватый
УмеРен- Светлело-желная тый
Продолжение таблицы от белесоватой Слабо коричневадо сероватой, тый очень умерено развитая
От белесова- Никакого . той до се- или слабо короватой, ричневатый очень развитая
Очень слабый желто-корйчнева-. тый
Слабо се- Гидролиз ро-корич- крахмала невый положительный. Споры от цилиндрических до яйцевидных размером 0,81,0 мкм . Споры в виде грозди, споровые волокна редкие и гибкие, часто имеющие скрученную форму или образующие один спираль673184
Продолжение таблицы ны виток или случайно несколько витков
Очень умеренная
Слабо коричневатожелтый
Крахмал гид-. ролизует.Слабый желтосероватыйЬ
Слабая
Никакой
Никако-, го или слабо желтоватый
То же То же
То же никакого или очень слабо желтоватый
Очень умеренная
Слабый желтокоричневыйЬ
Белесоватая (следы) Умеренная
Нет
Никакой
Синтетичес- Очень
Кий бульон слаЧапека с саха- бая розой(W -18) ! никакого То же
То же
То же
То же
Синтетический бульон Чапека с целлю- . .лозой (Ж -18, где сахароза заменена ма ленькими, полосами фильтровальной
Агар-крахмал-нитраты (М/ -10)
Синтетический агар Чапе- ка на сахарозе(W =I )"
Синтетический агар Чапека на глюкозе (W -1, где ЗЪ сахарозы заменено на
1,5% глюкозы)
Синтети- ческий агар
Чапека в глицерине (М/-1, где
ЗЪ сахарозы заменено на
1,5В глицерина)
Бульон-крахмал-нитраты (М/ -19)
Синтетический бульон
Чапека с глюкозой . (ф-18 где
ЗВ сахарозы ваменено на 1,53 глюкозы)
Светло-жел- то-коричневыйь
От сероватого налета до коричневатого
Культура хлопьеобразная бело-.сероватая
Бело-сероватая, очень слабо развитая
Белесоватая, очень умеренно развитая
:Сероватая, очень слабо развитая на проявляющейся бумаге бульона
Слабый желто-коричневатый Производит нитриты через- . вычайно хорошо
Цроизводит нитриты черезвычайно хорошо, целлюлозу удваивает
14
Продолжение таблицы
673184 бумаги, частично погру женными в жидкость)
Производит нитриты черезвычайно хорошо
Никакой
Коричневожелтоватое кольцо
УмереннаяПитательный бульоннитраты
Беле сов атая (следы) Разжижение умеренное
Желтокоричневатый
Хорошая
Чистая желатина
12 3
Культура на картофеле (W -27) Бело-серо- Слабоватая,(следы) коричневатый
Светл ожелтокоричневатый
То. же
Пептониэация без коагуляцин, малая кислотность, pH изменяется от
6,2 до 5,8 в течение 1 месяца Никакой
Светложелтокоричневатое кольцо
Снятое молоко (порошковое) Никакого
Агар Tpec- Уме- Желтонера и Данга рен- коричЬ ная . неватый
НаБ Не производит
То же
:с
Antibiotics AnnuaL 1956-1957, р. 950.
Waksman. S,A, The Actinomycetes, The WilLiams and ХЛ11пз Company, BaLtimore, v. 9 30, р. 331, 1961.
6Растительный мицелий. ,Waksman Б. A. The Actinomycetes, СЬгоп1са Botanica Company Ха1 tham. Mass, USA, 1950, р. 193-197, 1961 (цифра при W соответствует номеру, под которым среда указана в книге) .
9Antibiotics and Chem., 2, 401, 1952 ° йаМзтап S.A. The Actinomycetes, The Wi2hams апй Witkins Company, Baltimore, v. 2; 9 42, р. 333, 1961, Antibiotics Annual, 1956-1957, р. 951 °
Мапиа Х of Methods for Pure Cutture Study of Bacteria, Society of
American Bacteriokogists, Geneva lip) -18.
J, of Bacteriî ogy, 76, 239-244, 1958
Прбцесс получения 30.504 QP coc- мых углерода и азота, минеральные тоит в основном иэ культивирования . элементы, в частности хлориды, .и в
S
1 ледующим .выделением образовавшегося углеводы, такие, как сахароза, глюдродукта. коза, мальтоза,,декстрины, крахмал, Культивирование может быть осущест- многоатомные спирты, такие, как влено любыми методами в аэробных ус- 55 глицерин, некоторые органические ловиях на поверхности или в глубине, кислоты, такие, как молочная и лимонпредпочтительно в глубине, B раз-. . ная кислота. личных аппаратах, используемах в- . Некоторые животные или растительные производстве ферментов. Обычно жиры, такие, как хлопковое или соевое
ЙгеФомЧсаф ga((inari ug DS"25.881: 60 масло, Могут успешно заменить углекультивируют на агаре, затем в колбе воды или могут быть к ним, добавлены. при перемешивании, инокулируют в Источником усваиваемого азота ферментер и продолжают процесс в могут служить соли аммония, мочевина,, ферментере. ;некоторые азотсодержащие кислоты, а
Среда для ферментации должна содер- также сложкые вещества, содержащие жать в основном источники усваивае-, азот в форме протеида, например ха16
3184
Для очистки 76 r полученного продукта растворяют в 1520 ваап ацетона, перемешивают 30 мин в присутствии активированного угля, фильтруют и промывают Фильтр 100 мп ацетона. Фильтрат и промывные воды объединяют, добанляют 850 мл воды при медленном перемеши60 вании и 0 С и оставляют при 4 C. Кристаллы отфильтронывают, промывают
100 мл смеси ацетона — вода (1-.3 по . объему) и сушат- при 35 С в вакууме (5-10 мм рт ст.)., получая 68,5 г
30.504 RP.
15 67 зеин, лактоальбумин, глютен и их гидролизаты, мука иэ сои, арахиса, .-....рыбы, экстракты мяса, дрожжей, растворимые дистилляты, проросшее зерно.
Среди минеральных добавок некоторые могут играть роль буфера или нейтрализата, например фосфаты щелочных или щелочноэемельных металлов, карбонаты калция или магния, Другие приводят к необходимому ионному равновесию для развития
Stre ptomgces gaftinar1ug, DS 25.881
:и для выработки 30.504 BP например хлориды и сульфаты щелочных и щелочноземельных металлов.
Наконец,,некоторые действуют как специальные актинаторы метаболических реакций Skrepto myce S fatti ria riMS
DS 25,881, это соли цинка, кобальта, железа, меди, марганца.
Регуляторами роста являются природные нитамины, например;,рибофлавин, фолиевая кислота, пантотеновая ки слот а.
При фермертации рН 5,8-7,8, пред" почтительно 6,2-7,4, температура 2333 С, лучше 25-30 С, аэрация 0,3-3 л воздуха на 1 л бульона 1 мин.
С максимальным вйходом 30.504 RP. получают через 2-8 дней культивирования в зависимости от состава питательной среды.
Для выделения 30.504 QP ферментативное сусло фильтруют при рН 3-6, предпочтительно 5, в присутствии фильтрующей добавки, экстрагируют осадок низшими спиртами, такими, как метанол, или хлорированными углеводородами, упаривают экстракт и фильтрат в вакууме, кристаллизуют остаток, иногда в присутствии осадителя при охлаждении.
30.504 Вр может быть очищен обычными методами, такими, как перекрис" таллиэация или хроматография;
Пример. Загружают и ферментер
--(емкость 170 л) 1200 r пептона, 600 r экстракта дрожжей, 1200 r моногидрата глюкозы, 2400 r крахмала, частично;гидролизованного,и воду до объема
110 л, добавляют 50 мл 10 М едкого натр4 до рн 7,3 и стерилизуют .(барботаж пара с температурой 122 С .)н течение 40 мин) . После охлаждения и каМденсации пара во время стерили- . .зации объем бульона 120 л, рН 6,9.
Засевают 200 мл культуры ptreptoтцсеЭ ga8Ei ariap DS 25.881 при перемешиваний,,перемешивают 21 ч при аэрации стерильным воздухом.
В ферментер (емкость 800 л) загру жают 12,5 кг растворимых дистиллятон, У
12,5 кг сахарози, 2,5 кг NaC8, 1,0 кг
M@SO 7Н О, 0,$ л раствора СоС8д 6Н®О (20 г/л) и воду до объема 460 л, добавляют 720 мл 10 н. едкого натра до рН 7,5 и стерилизуют (барботаж пара с температурой 122 С в течение
40 мин).После охлаждения и конденсации пара во время стерилизации объем бульона 500 л, рН 6,40.
Инокулируют 50 л культуры из ферментера емкостью 170 л, перемешивают мешалкой (205 об/мин) в течение 116 ч при 27 С и аэрации стерильным воздухом (20 м /ч). Добавляют 5 н. едкий натр (нсего использовано 0,5 л) до рН до 6,5.
В конце процесса рН 7,85 объем
470 л.
1000 л полученного после ферментации сусла перемешивают 30 мин после подкисления 7 л 6 н. оляной кислоты до рН 5, вводят 35 кг фильтрующей добавки, фильтруют на фильтр-прессе, осадок промывают на фильтре 200 л воды, подкисленной соляной кислотой (pH 5), переносят в 700 л метанола, добанЛяют 470 мл 6 н. едкого натра до рН 7 и перемешивают 30 мин.
Смесь фильтруют на фильтр-прессе, промывают осадок на фильтре 100 л метанола, фильтрат и промынные воды объединяют и упаривают н вакууме (5 -10 мм рт ст,) до объема 60 л, подкисляют 580 мл 6 н. соляной кислоты до рН 3 и перемешивают 10 мин с
40 л хлористого метилена. Водную фазу последовательно экстрагируют
30 и 20 л хлористого метилена, экстракты перемешивают с 9 л ноды, подкисленной 20 мп 6 н. соляной кислоты, до получения водной фазы с рН 3.
Органическую фазу промывают 18 л воды, добавляют 20 мл 6 н. едкого натра до рН 9,5, смешивают с экстрактом и упаривают в вакууме (5-10 мм рт. ст) до объема l л.
Полученный концентрат медленно выливают в 10 л гексана, фильтруют и отделяют 7,5 г неактивного нерастворимого вещества. Фильтрат упаривают до объема 1 л, переносят в 1 л, этилацетата, перемешивают в присутствии
1 л воды, добавляют 6 н. соляную кислоту до рН 3, органическую фазу отделяют и упаривают до объема 1 л.
30.504 RP медленно кристаллизуется из раствора при 4 C. Его .отфильтронывают, промывают 50 мл гексана при
4 С, сушат при 35 С в вакууме (5
10 мм рт ст) и получают 76 г 30.504
PR в виде кислоты.
673184
Формула изобретения
4,56
2,33
2,68 . 55
0,09
0,89
0,06
4000 ед/кг 60
1000 ед/кг
ЦНИИЙИ Заказ 3736/56 Тираж 525 Подписное филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,4
68 r продукта растворяют в 2,8 л гексана, перемешивают 7 ч, оставляют на 15 ч при 4 С, кристаллики отфильтровывают, промывают 100 мл гексана и сушат при 35 С в вакууме (5- 10 мм рт, ст. ) в течение 12 ч.,Получают
54 r 30.504 RP в виде кислоты. 5
Упаривают маточные .растворы в вакууме (5-10 мм рт. ст.) до объема
0,4 л, выдерживают при 4 С в течение.
12 ч, отфильтровывают осадок, промывают 20 мп гексана, сушат при 350 С !О в вакууме (5-10 мм рт.ст.) в течение
12 ч и получают еще 10 г 30.504 RP в виде кислоты.
Для приготовления антикокцидиозных препаратов 30.504 RP в форме 15 свободной кислоты, ее металлической соли или соли с азотсодержащим основанием вводят в состав пищевых продуктов или концентратов, предназначенных для питания животных, в количестве 0,005-0,04 вес.% и равномерно распределяют.
В пищевые продукты или концентраты могут быть введены витамины и минеральные соли (5-20% рациона) . Предварительные смеси, исполь- 5 зуеьые для приготовления полного ра-. циона или пищевых добавок, содержат обычно 0,05-20 вес.% 30.504 RP в форме кислоты, ее металлической соли или соли с азотсодержащим основа- З0 нием. Сами Предварительные смеси обычно получают из концентратов, которые содержат 20-99,9 вес.% указанного продукта, с добавлением пищевых красителей, ароматизирующих 35 веществ, диспергаторов, веществ, уст-" раняющих слеживание, и пищевых наполнителей. Концентраты и предварИтельные смеси обычно являются порошками. Пищевые продукты и пищевые 40 добавки могут быть либо порошками, либо гранулами, приготовленными известными методами.
Например, готовят пищевой продукт, содержащий, вес.%:
Отруби 13, 41
Ячменная мука 13,41
Кукурузная мука 13,41
Пшеничная мука 31,32
Рыбная мука 8,92 Соевая мука. 8,92
Дегидратированная кормовая мука
Экстракт дрожжей
Сухое порошковое молоко
ЯаСЕ
Сас,.
Минеральные соединения
Витамин А
Витамин Д холинхлорид 11,5 мг/кг
Рибофлавин 2,24 мг/кг
К этому пищевому. продукту добавляют
0,02 вес.% 30.504 RP и перемешивают.
На осйове 30,504 ВР и/или его солей могут быть приготовлены регуляторы роста жвачных животных (крупный рогатый скот, овцы, козы)и лекарст- венные препараты для лечения свиней от дизентерии.
В эти препараты входят пищевые продукты или концентраты.
Целесообразно каждому животному давать ежедневно 50-259 мг 30.504 RP, /
Чаще всего в пищевые продукты вводят О, 01-0, 1 вес. % 30. 504 ВР, предпочтительно с другими добавками, такими, как витамины и минеральные соли.
Эти пищевые продукты обычно составляют 1-10%, дневного рациона, т..е. дневной рацион содержит 0,00010,01 вес.% 30.504 RP . Предварительные смеси, используемые для приготовления полного рациона или пищевых добавок, обычно содержат 0,1- 5 вес.% 30.504 RP.
Сами предварительные смеси обычно получают из концентратов, которые содержат 5-99,9 вес.% 30.504 RP, с добавлением пищевыми красителей, ароматизирующих веществ, диспергаторов, веществ, устраняющих слеживание,. и пищевых наполнителей.
Концентраты и предварительные смеси являются обычно порошками.
Пищевые добавки могут быть либо порошками, либо гранулами. 30.504 RP или его соли, могут быть в форме мелких"частиц, покрытых оболочкой или нет.
Способ получения антибактериального и антикокцидиозного вещества путем культивирования грибов ЙгерЫ»
rnцсез в питательной среде и выделения продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью получения наиболее активного антибиотика в качестве гриба-продуцента используют штамм $4 rep4ornyce Ф Ца Шпаг) 0 DS
25. 881 (ИВЫ 5.785) и выделяют продукт 30.504 RP в форме свободной кислоты, ее металлической соли или соли с азотсодержащим основанием.
Источники информацни, .принятые во внимание при экспертизе
l. Патент СССР 9 371705, кл. С 12 D 9/16, 1970.
2. Егоров Н. С. Основы учения об антибиотиках, М., 1969, с. 220-268.