Способ исследования структурных перестроек хромосом эукариот

Способ исследования структурных перестроек хромосом эукариот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

4 пц 673247 (6l) Лрполннтельное к авт. синд-ву(22) Заявлено 15,10.7@21) 2411086/30-15 (51) М. Кл.

А 01 Н 1/00 с присоединением заявки №

Гаа7дараТВВННЫ9 NNNT9T

СССР аа,авлам аэобрвтеей а вткрипе (23) Приоритет

Опублнковано16.07.78.Бюллетень J4 26 (5З) УДК В7В.31 .. 38 (088. 8) Дата опубликования описания 18.07.79 о

Г. П. Македонов, B. А. Тарасов, Б. B. Логинов, И. П. Корягина и С. А. Джатаев (72) Авторы - -изобретения (71) Заивитель (84) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ

ПЕРЕСТРОЕК ХРОМОСОМ ЭУКАРИОГ

2.1

Изобретение относится к области молекулярной генетики и цитогенетики eyzaриот, а также селекции сельскохоэяйст . венных растений и животных.

Известен способ исследования струк турных перестроек хромосом аукариот, 5 включающий в себя мутагенное повреждение хромосом химическим агентом и ре- гистрапию количественных и качественных показателей структурных перестроек хромосом f 1) . Способ не позволяет прово- Ю дить исследования механизмов структур0 ных перестроек хромосом эукариот при заранее заданных и контролируемых экспериментальных условиях, в частности при контролируемом повреждении хромосом 1$ вукьрио г в изолокусе хромосомы.

Известен также способ исследованияструктурных перестроек хромосом вукарит, при котором индупируют только од .нонйтевые разрывы молекулы ДНК путем ® обработки БУДРом. Этот способ осуществляет следующим образом. Клетки обрабатывают БУДРом в . S = стадии первого митотического цикла, облучают длинноволновыми УФ-лучами на стадии Q, второго митотического цикла. l1anee регисгрируют количественные и качестченные показатели структурных перестроек хромосом эукариот(2) Такой способ не позволяет исследовать молекулярные механизмы перестроек хромосом эукариоты в заранее запрограммированных и эксйериментально контролируемых условиях, в частности, при контролируемом повреждении молекул LlHK в изолокусе хромосом эукаоиот .

Белью изобретения является изучение молекулярных механизмов образования перестроек хромосом, эукарнот на базе экспериментально контролируемого локального повреждения молекул ДНК хромосом еукариот в изолокусе.

Поставленная цель достигается тем, что проводит дополнительные воздействия на молекулы ДНК хромосом аукариот, в частности вти воздействия заключаются в том, что на молекулы ЙНК хромосом эука673247

Составитель Л. Марченкова

Редактор М. Харитонова Техред :; O. Андрейко Корректор Г. Назарова

Заказ 3948/3 Тираж 7.54 Подписное

ИНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, R-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 риот наносят повреждения типа цикло-бу тановьцс димеров, выделяют и обраба гывают илеттси йа стадии первот о митотичесиого цикла агентом, включающимся в молекулы

QHK хромос6м эукариот, который приводит

5 к однонитевым разрывам молекул QHK хромосом эукариот во втором митотическом цикле при облучении длинноволновыми

УФ-лучами.

Способ осушествляется следующим об разом.

Однослойную культуру Меток китайско

ro хомячка (клон N 237) облучают коротковолновыми УФ-лучами с длиной волны меньше 300 нм на стадии G первого ми- тотического цикла, после стадии 5 nepao го митотического цикла, в которой происходит репликация молекул ДНК, на стадии (3 цервого митотического цикла клетки обрабатывают БУДРом в концентрации

10$ /мл среды и колхицином в койцент рации 0,78 p/мл среды, во втором мито тическом цикле на стадии 9< : облучатот длинноволновыми УФ-лучами с длиной волны больше 300 нм в дозе 4 10 эрг/ми 2 25 .2

-2 10 эрг/мм .. Клетки фиксируют в смеси метанола с уксуСной кислотой в пропорции 3: 1, окрашивают карбол-фук- " сином и регистрируют количественные и качественные показатели структурный пере; о стр жкхромосом.

1фи использовании предлагаемого способа получатот первичные йовреждения молекул QHK хромосом эукариот, причрм повреждения определенного типа, а также по- > лучают возможность трансформации аер-. вичных повреждений молекул ДНК" в ходе r åíåòè÷åñÿèõ процессов, происходяших в жйвой клетке. Это позволяет при дополнительном воздействии создавать экспериментально контролируемые условия, а именно локальную модификацию структуры молекулы ДНК хромосом эукариот.

Формула изобретения у, 45 перестроек хромосом эукариот, випочаю4 ший в себя повышение чувствительности молекул ДНК хромосом к последующим воздействиям; нанесение первичных повреждений молекулам QHK хромосом с по- . вышенной чувствительностью на опреде аенном этапе мутагенеза и регистрацию структурных перестроек хромосом в митозе, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью изучения механизмов перестроек хромосом эукариог в экспериментально .контролируемых условияи при получении первичных повреждений молекул QHK хромосом, в заранее подготовленном локусеуча тке хромосомы предварительно выделяют зону изменений QHK хромосом, повышают чувствительность молекул ДНК хромосом в выделенной локальной зоне и наносят первичнйе повреждения молекулам QHK хромосом в области повышенной чувствительности в выделенной зоне.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью изучения механизмов образования перестроек хромосом эукариот при локализации первичных повреждений,.однонитевых разрывов, мойекул BHR в изолокусе сестринских хроматид в нитях одной полярности, предварительно выделяют зону изменения молекул QHK типа цикло-бутановых димеров облученйем клеток УФ-254 нм на стадии

9< первого митотического цикла, повы шают чувствительность молекул ДНК хромосом в выделанной локальной зоне вве- дением БУДРа только на стадии .Ст первого митотического цикла и только на стадии О2 второго митогического цикла и наносят первичные повреждения молекулам QHK с повышенной чувствительностью в выделенной зоне облучением УФ 313 нм только на стадии О второго митотического цикла.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1- Дубинин H. П. Обшая генетика, М., "Наука", 1976, с. 279-344.

2.Ин1аИоп regear 20, .И 3, р.р. 403 416.