Способ получения кормогризина
Иллюстрации
Показать всеРеферат
О Й Й с А — е ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистическид
Республик
<т 675О7О
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 191176(21) 2423818/30-15 с присоединением заявки тто(51)М. Кл.2
С 12 0 9/00
Государствеииый комитет
СССР оо делам изобретеиий и открытий (23) Приоритет
Опубликовано 2 %0 779. Бюллетень М 2 7
Дата опубликования описания 2507.79 (53) УДК 615. 779. .9 (088.8) (72) Авторы A.Ì.Ìàêóxêíà, Е.Б.Кругляк, П.М.Самойлов, P.Ä.Ïåðå÷åëêèíà, ИЗО РЕтЕиИ Я О. A . .1 аврилова, JI . .А. Лямина, 0. Л. Колыгано в и 1 . С . Доронина
Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОГРИЗИНА
Изобретение относится к микробиоло- гической промышленности, в частности к способу получения препарата кормогризина действующим началом которого является антибиотик стрептотрициновой группы — гризин.
В состав различных стрептотрициновых антибиотиков входят компоненты
F, Е, D, С, В, содержащие соответственно.l. 2, 3, 4, 5 остатков Р -лиэттна. Антибиотик гризин состоит, в основном, иэ компонентов F u D.
Известен способ получения препарата кормогризина (1). Способ заключается в том, что культуру продуцента
Aet.ô÷üéUÇ выращивают на качалке в колбах с питательной средой, содержащей кукурузную муку, крахмал,сернокислый аммоний, хлористый натрий, фосфорнокислый калий и мел. Выращенный посевной материал переносят в ферментеры со стерильной титательной средой того же состава. Ферментация длится 48-55 ч,после чего культураль-25 ную жидкость, содержащую антибиотйк гризин, подкисляют до рН 5,0-5,5 и подвергают упариванию. Упаренная культуральная жидкость поступает на распылнтельную сушилку и далее высушенный препарат стандартизуют до содержания 5, 10, 40 г чистого антибиотика в 1 кг препарата.
Однако этот способ не обеспечивает получения препарата с постоянным составом антибиотика грнэина. Кроме компонентов F, Е и D в антибиотике может содержаться в виде примесей различное количество компонентов В и
С, обладающих значительно большей токсичностью, что снижает качество препарата. Количество указанных примесей в промышленных препаратах антибиотика может достигать 45-50% от общего содержания антибиотика в препарате. Кроме того, уцаривание культуральной жидкости при укаэанных значениях рН приводит к значительным потерям антибиотика.
Цель изобретения — разработка способа, обеспечивающего возможность получения кормогризина с повышенным выходом 7,с. и D — компонетов, т.е. содержащего минимальное количество примесей С и В.
Эта цель достигается тем, что в способе, включающем выращивание продуцента кормогризина Яст. ф тэвиь в глубинных условиях на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные соли с после5070 4 за высевов на плотные питательные среды общепринятым методом.
Кусочек картофельного агара с культурой Ас1,.ф.1б иб шт 70 (иэ пробирки) стерильно вносят в колбы со средой. Засеянные колбы ставят на качал5 ку (240 об/мин) и выращивают при тем" пературе 27 g 1 C в течение 36 ч.
Выращенный и колбах посевной материал передают на засев питательной среды (приведенного состава) в посевной ап)() парат, где культура выращивается при температуре 27 1 1 С в течение 1820 ч.
Готовый посевной материал из посевных аппаратов направляют в ферментеры с ферментоционной средой того же состава, что и среда в колбах.
Кроме того, в ферментеры вносят стерильно энантовую кислоту в концентрациях 0,05-0,1%. Процесс ферментацич идет при температуре 27 1 С в течение 48-55 ч. Полученную культуральную жидкость подкисляют до рН 3,03,5, упарнвают температура 45-50 С в течение 1 ч и затем высушивают на распылительной сушилке (T =140 вх
+5 С, 7 =65+5 С) .
Лля анализа компонетного состава гризана проводят выделение гриэана из культуральной жидкости общепринятым методом на смоле КБ-4Н-2. Компонентный состав гризина определяют с помощью аналитической хромотографии на КМ-сгфадексе $ =25 в градиенте
NaCI 0,6-1,2 М с последующим спектрофотометрированием элементов при d =
216 мм. Результаты осуществления способа представлены в таблице (содержание суммы компонентов F, Е и D s
40 % xo acerb количеству антибиотиков) °
0,03
0,2
0 5
Влияние знантовой кислоты на образование основных комлонентов гризина (F, Е и D) .82,5
65,6
74,6
56
63.1
63,3
Среди.
65,5
89,1
86,9
96.9
97,4
80,4 .
72,2
87,2
80,3
89,7
87,7
Использование предлагаемого спосо- 60 ба в промышленности позволит получить более высококачественный препарат кормогриэина. Кроме того, изобретение дает возможность на одних и тех же мощностях получать препарата на 65
20-25% больше.
Формула изобретения щйщМм- подкислением, упариванием и
" высушиванием культуральной жидкости, B питательную среду для культивирования продуцента ACt. (."г(зб06 вносят знантовую кислоту для разобщения процесса окислительного фосфорилиро(BaHHR в концентрации 0,05-0,2%, при этом культуральную жидкость перед выпариванием подкисляют до рН 3,0, 5. д р и м е р. для выращивания про дуцента гриэина используют срепу следующего состава, %«.
Кукурузная мука 2,0
Крахмал 1,5
Сернокислый ммоний 0,5-0,6
Фосфорнокислый калий
Повареная соль
Ken
Вода водопроводная До loo,п
Для приготовления среды (1 л) для
"вйращиванкя посевного материала 500 кп водопроводной воды нагревают до
50 C засыпают 20 r:кукурузной мухи к подогревают до 90 С. Разваривают муку в течение 5 мин; в среду вносят
5-6 r (NH Q ЯО, 300 мг КН РО и 5 г
СаСО, 15 г крахмала, взмученного в холодной воде, который вносят в последнюю очередь. Полученную таким образом среду охлаждают и доливают водой до 1000 мл,рН 6,9-7,3 доводят концентрированной кислотой (НС1).
Приготовленнгю среду разливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл и ,.стерилизуют автоклазированнем при
1,2 ати в течение 40 вин.Стерильность . среды опеределяют путем выдерживания
"ее в течение 24 ч нрн 37ОC и аналиСпособ получения кормогриэина, включающий выращивание продуцента его
Act. фЧъенз в глубинных условиях на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные соли
67507
Составитель Л. Мурая
Редактор Т. Зубкова Техред М.Келемаа Корректор М.Пожо
Заказ 4229/21 Тираж 525 Подписное
ЦИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий;
113035, Москва, Ж-Э5,.Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППН Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 с последующим подкислением, упариванием и высушиьанием культуральной жид-. кости, отличающийся тем, что, с целью повышения содержания в кормогризине F, Е и D - компонентов, при выращивании продуцента в питательную среду вносят энантовущ кислоту 5
;для разобщения процесса окислительного фосфорилирования в концентрации
0 6
0,05-0,2%, при этом культуралънуь жидкость перед упариванием подкисляют до рН 3,0-3,5.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Решетов П.Д. Получение и свойства стрептотрициновых антибиотиков, М., 1964, {автореферат диссертации).