Способ обнаружения микрокапсульных микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ,tö 6766Ï

Союз Советских.

Социалнстнческнх

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 14,02.78 (21) 2578967/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (51) M. Кл.з

С 12К 1/00

Государственный комитет (43) Опубликовано 30.07.79. Бюллетень № 28 (53) УДК 576.8.093.4 (088.8) по делам изобретении н открытий (45) Дата опубликования описания 30.07.79 (72) Авторы изобретения

И. А. Попова, К. Ф. Дубров и Г. И. Рожков

Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ МИКРОКАПСУЛЬНЫХ

М И КРОО РГАН ИЗМОВ

Изобретение относится к области микробиологии.

Известен способ обнаружения микрокапсульных микроорганизмов путем микроскопирования исследуемого материала (1). 5

Способ позволяет выявить микрокапсульные формы микроорганизмов при значительном их содержании в исследуемом материале.

Однако известный способ не обеспечивает 10 высокой точности.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Эта цель достигается тем, что исследуемый материал предварительно смешивают и инкубируют со взвесью лейкоцитов в плазме свежевзятой крови восприимчивого к данной инфекции организма из расчета

5 — 30 микробных клеток на 1 лейкоцит.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь от донора берут в пробирку с внесенным в нее гепарином, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре до оседания эритроцитов (20 мин). Затем 25 отбирают верхнюю часть пробы, содержащую лейкоциты, взвешенные в плазме крови. Суспензию живых микробов после установления их числа по стандарту мутности или каким-либо другим приемом смешива- 30 ют со взвесью лейкоцитов в плазме крови таким образом, чтобы отношение микробов и лейкоцитов в реакционной системе составляло 5 — 30 микроорганизмов на 1 лейкоцит.

Полученной реакционной системой заполняют камеры гемоцитометров (Горяева, Бюркера, Тома или другие) и содержимое каждой камеры герметизируют по периметру покровного стекла расплавленным парафином. Приготовленные таким образом камеры с реакционной системой инкубируют в течение 1 — 5 ч. Через определенные промежутки времени, которые зависят от вида и величины внесенной дозы микроорганизмов, покровные стекла с отпечатанными на них препаратами снимают с камеры, высушивают, фиксируют, окрашивают общеупотребительными приемами и подвергают микроскопированию. В результате взаимодействия лейкоцитов и микробов, которым свойственно образование микрокапсулы, в отпечатанных на покровных стеклах препаратах четко выявляются бескапсульные формы микробов, фагоцитированные и перевариваемые лейкоцитами, и микрокапсульные формы микроорганизмов, расположенные вне лейкоцитов.

Пример 1. 0,1 мл двухчасовой культуры возбудителя брюшного типа, штамм

ТУ2-4446, выращенной на агаре Мартена

676611

Формула изобретения

40

Составитель С. Малютина

Техред А. Камышникова Корректор Л. Брахнина

Редактор М. Дмитриева

Заказ 1684/3 Изд. М 476 Тираж 549 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, K-35, Раушская наб., д. 475

Типография, пр. Сапунова, 2 при 37 С и смытой с поверхности агара бульоном Мартена, вносят в 0,4 мл свежеприготовленной взвеси лейкоцитов в плазме крови здорового человека, взятой за

0,5 ч до внесения микроорганизмов, Отношение возбудителей брюшного тифа и лейкоцитов составляет 11: 1. Полученную таким образом реакционную систему вносят в 7 камер Горяева, герметизируют расплавленным парафином и инкубируют при 37 С в течение 4 ч, снимая покровные стекла для анализа с интервалом в 0,5 ч. Фиксируют отпечатанные на покровных стеклах препараты, окрашивают их азур-эозином по Романовскому-Гимза и микроскопируют.

Обнаружено, что после 3 ч инкубирования (в препарате из 5 камеры) большая часть бактерий поглощена лейкоцитами, а из микробов, оставшихся нефагоцитированными, 70% имеют микрокапсулу, окрашенную в розовый цвет.

Пример 2. 0,1 мл взвеси живых менингококков штамма А-208 в бульоне Хоттингера, полученных из двухчасовой культуры возбудителя, выращенной на сывороточном агаре Хоттингера, вносят в 0,6 мл взвеси лейкоцитов в плазме крови человека, полученной так, как это указано в примере 1. Отношение менингококков и лейкоцитов составляет 25: 1. После перемешивания реакционную систему вносят в 5 камер Горяева, герметизируют расплавленным парафином и инкубируют при 37 С в течение

3 ч, снимая покровные стекла с интервалом в 0,5 ч, фиксируют отпечатанные на покровных стеклах препараты, окрашивают их азур-эозином по Романовскому-Гимза и микроскопируют.

Найдено, что после 2 ч инкубации (в препарате из 3 камеры) подавляющее число менингококков поглощено лейкоцитами, а из нефагоцитированных диплококков около

80% имеют микрокапсулы.

Пример 3. 0,2 мл культуры золотистого стафилококка, выделенного от больного стафилококковым эндофтальмитом и прошедшего 3 пересева, после выращивания на агаре Хоттингера в течение 18 ч и смыва бульоном Хоттингера с 2% глюкозы, вносят

4 в 0,6 мл свежеприготовленной взвеси лейкоцитов в плазме крови кролика, не имеющего антител к стафилококку. Кровь от кролика берут за 0 5 ч до составления реакционной системы, Отношение стафилококков к лейкоцитам составляет 27: 1. Полученную таким образом реакционную систему вносят в 7 камер Горяева, герметизируют расплавленным парафином и инкубируют при 37 С в течение 4 ч, снимая покровные стекла с интервалом в 0,5 ч. Фиксируют отпечатанные на покровных стеклах препараты, окрашивают их азур-эозином по

Романовскому-Гимза и микроскопируют.

Обнаружено, что через 2,5 ч после начала инкубации реакционной системы (в препарате из 4 камеры) около 90 стафилококков, находящихся вне лейкоцитов, имеют нежно-розовую микрокапсулу.

Предлагаемый способ позволяет надежно обнаруживать микрокапсульные формы микроорганизмов — возбудителей инфекций, в том числе при первичном обнаружении сравнивать по признаку образования микрокапсул различные штаммы одного и того же микроорганизма, проводить исследования по обнаружению микрокапсул в любой баклаборатории, поскольку способ является простым в исполнейии и не требует применения сложной аппаратуры (электронного микроскопа).

Способ обнаружения микрокапсульных микроорганизмов путем микроскопирования исследуемого материала, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, исследуемый материал предварительно смешивают и инкубируют со взвесью лейкоцитов в плазме свежевзятой крови восприимчивого к данной инфекции организма из расчета 5 — 30 микробных клеток на 1 лейкоцит.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Езенчук Ю. В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. М. «Наука», 1977.