Способ культивирования макрофагов

Способ культивирования макрофагов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

676Ы2

О П И С А- Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 03.11.77 (21) 2539498/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (51) М, Кл, С 12К 9/00 (43) Опубликовано 30.07.79. Бюллетень № 28 (45) Дата опубликования описания 30,07.79 (53) УДК 576.8.093..33 (088.8) по делам изсбретеиий и открытий (72) Авторы изобретения

Е. А. Суптель, Н. Б. Загорная и Л. Я. Сагитова

Киевский институт инфекционных болезней (71) Заявитель (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МАКРОФАГОВ госУдаРствеииый комитет (23) Приоритет

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен способ культивирования микрофагов путем выращивания in vitro в питательной среде в присутствии сыворотки с 5 последующим съемом монослоя клеток (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода жизнеспособных клеток и длительных сроков переживания.

Целью изобретения является повышение выхода жизнеспособных клеток и удлинение сроков переживания.

Эта цель достигается тем, что макрофаги предварительно помещают в гомологичную сыворотку, выдерживают в термостате и 15 затем добавляют питательную среду.

Пример 1, Мыши внутрибрюшинно вводят 2 мл 2% раствора крахмала. Через одни сутки животное обескровливают.

Кровь выдерживают 10 минут при 37 С и

10 минут при 4 С, затем сыворотку отсасывают.

В брюшную полость этого же животного вводят 5 мл среды № 199. Через 5 минут эксудат брюшной полости отсасывают, клетки отмывают и осаждают центрифугированием (не более 1000 оборотов в минуту) в течение 5 — 10 минут. Надосадочную жидкость удаляют. К осадку клеток добавляют 1 мл свежеприготовленной сыворотки 30 этого же животного, ресуспензируют и разливают по 0,1 мл в пробирки культивирования. Пробирки укладывают на 1 час в термостат при 37 С. Инкубация макрофагов с сывороткой способствует быстрому прикреплениюию их к стенкам сосудов. Затем в каждую пробирку добавляют 1 мл среды № 199 и вновь помещают в термостат при

37 С. Через одни сутки наблюдается формирование монослоя.

Пример 2. Морской свинке внутрибрюшинно вводят 5 мл 2% раствора крахмала. Спустя сутки животное обескровливают. Кровь выдерживают 10 минут при

37 С и 10 минут при 4 С. Затем сыворотку отсасывают.

В брюшную полость этого же животного вводят 10 мл среды № 199. Через 5 минут извлекают эксудат брюшной полости. Клетки промывают, осаждают центрифугированием. К осадку клеток добавляют 3 мл сыворотки этого же животного. Полученную взвесь разливают по 0,1 мл в пробирки для культивирования, которые укладывают в термостат при 37 С на 1 час. Затем в каждую пробирку добавляют 1 мл среды № 199. Через сутки культивирования в термостате наблюдается формирование монослоя клеток, 676612

Составитель С. Малютина

Техред А. Камышникова Корректор Л. Брахнина

Редактор Л. Гольдина

Заказ 1684/4 Изд. Ме 476 Тираж 549 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4 5

Типография, пр. Сапунова, 2

Предлагаемый способ способствует увеличению числа жизнеспособных клеток с

50% и до 80%, удлинению срока переживания макрофагов с 3 — 7 суток до 12 суток и более, позволяет в 100% случаев получать монослой клеток.

Формула изобретения

Способ культивирования макрофагов путем выращивания in vitro в питательной среде в присутствии сыворотки с последующим съемом монослоя клеток, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения выхода жизнеспособных клеток и удлинения сроков переживания, макрофаги предвари5 тельно помещают в гомологичную сыворотку, выдерживают в термостате и затем добавляют питательную среду.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

10 1. Вестник АМН СССР, 1973, Мв 7, с. 52 — 58.