Патент 679625

Питательная среда для выращивания культуры раувольфии змеиной-продуцента алкалоидов

 

О П -И С А Н И Е ()679625

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Сокээ Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 03.05.77 (21) 48114 /28-13 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет-(51) М. Кл.

С 12 К 9/00

Государственный «ом«тет

СССР по делам изобретен«« и от«рытнй

Опубликовано 15.08.79. Бюллетень № 30

Бата опубликования описания 15.08.79. (53) УДК

615.45.5 81.81 (088.8) А. Г. Воллосович. Л. A. Николаева, T. Н. Пучинина и H. H. Позднякова (721 Авторы изобретения

Ленинградский химико-фармацевтический институт (71) Затевитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КУЛЬТУРЫ

ТКАНИ РАУВОЛЬФИИ ЗМЕИНОЙ вЂ” ПРОДУЦЕНТА

АЛКАЛОИДОВ

I 2

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производства лекарственных препаратов.

Известна питательная среда для выращивания культуры ткачи раувольфии эмеиной— продуцента алкалоидов, содержащая смесь солей: KNOz, NH4NOz., MgS04 4Н,О; ионов Га, К, Cl и Н,РО, смесь микроэлементов;

FeS0< ° 7Н,О;. Na3DTA;, НзВОэ, Mn$04i 4HzÎ

Zn$04i 4HzO; NazMo04 2НтО; KJ; Cu$04 5НрО;

CaClz 6Í,О, смесь витаминов и углеводов, со1О стоящую из тиамина, ииозита, сахарозы, а также агар-агар и воду (11.

Однако известная питательная среда не обеспечивает высокого выхода алкалоидов.

Целью изобретения является повышение выхода алкалоидов.

Зта цель достигается тем, что среда дополнительно содержит (ИН4)т$0, ион Са в виде

+4. соли Ca(NO>)z 4Н,О ионы К и Cl — в виде

Ю

KCI и ион HzРО4 в виде соли NH4HzРО4.

Количественное соотношение компонентов в среде (мг/л): KNOz — 1000 — 1900; NH4N03—

300 — 700; MgSO4 ° 4Hz Π— 400 — 600; (NH4) 2 $04—

200 — 500; ИН,Н,Р04 -- 500 — 800: Са (NOz)т < 4Н,Π— 800 — 900: KCI — 40-100; FeS04-7H,О27 — 28; МаЗДТА — 37 — 38 Нз ВОэ — 9 3 — 12.4

MnS0+ — 22 — 23; -ZnSOa 4Hz Π— 1,7 — 8,6;

Naz МоО ° 2Н20 — 0,2 — 0,3; К J — 0,83 — 0,9;

CuSO4 5НгΠ— 0 015 — 0,025; CoCIz бНз О

0,075 — 0,125; тиамин — 0,4 — 1,0; инозит — 60—

100; сахароза — 4800 — 5200; агар-агар — 6000—

7000; воды — до 1 л.

Прежде чем приступить к приготовлению среды, готовят серию концентратов.

1. Концентрат тиамина — 10 мг тиамина рас- творяют в 10 мг воды.

2. Концентрат Fe хелата — FeSO4 7Í,O и йаЭДТА растворяют при подогревании в воде так. чтобы указанные в прописи дозировки этих солей содержались в 5 мл раствора.

3. Концентрат микроэлементов готовят из расчета, чтобы в I мл раствора содержалось указанное в прописи количество всех микроэлементов (за исключением Ее$047Н,О и

1чаЭДТА. Каждый иэ микроэлементов растворяют отдельно в небольшом количестве воды, 679625

3 4 затем 0астворы сливают и доводят до нужного роэлементов и 80 мг инозита. Раствор доводят водой до 1 л Среду автоклавируют 10 мин разливают в колбы емкостью 250 мл. по 60мл и стерилизуют в автоклаве при 1 атм 10 мин.

Ткань .высаживают в возрасте 45 дней, инокулюм — 700 — 800 мг на 1 колбу.

Прирост биомассы и выход алкалоидов в культуре изолированной ткани рвувольфии weиной представлены s таблице.

160 а 0,66 0,42 и 0,03 058 т 0,02

2,12 t 0,06 030 в 0,61 0,66 и 001

2,14 а 0,67 Оф5 t 0,08, 0,85 t 0,05

1,08 k 0,06 140 а 0,08

1,21 а 6,05 1,14 t 005

1,13 2 0,03 1,88 в 0,08

1 0,5Ч а 6,64

2 6,90 t 6,05

3 6,66 в 6,68

Р р м м е ч в s и в: оаъны ввввапнвв в рвзюв ерема гаав

Квк видно из данных таблицы, прирост биомассы и выход иеннейпюго противоарнтмичес кого алкалонда аймвлина в 1,5 — 2 раза увеличивается ири выращивании продуцента на ноВОЙ среде.

Формула изобретепия внима, т. XII, вып. 4, Составитель С. Малютина

Техред Н.Бабурка

Редактор Н. Грязнова корректор С. Патрушева

Заказ 4745/25

Тираж 526 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская на., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 объема.

6,5 г агар-агара растворяют при кипячении в 500 мл воды. Все соли растворяют в отдельности в небольшом количестве воды (50-60 мл) и сливают в указанном в порядке.s раствор 5 агара, затем в полученную смесь вносят 50 r сахарозы, 1 мл концентрата тиамина, 5 мл концентрата Fe хеяата, 1 мл концентрата микПитательная среда для выращивания культуры ткани раувольфии змеиной — нродуцента алкалоидов, содержащая смесь солей: KNOq, р1Н4ИОз, MgS04 4Н10; ионов Са, К С1 и Н Р04; смесь микроэлементов; I=eS04 7Н О;

МвЭДТА Нэ ВОз, Мп304 40т О; ZnSO4 4Н2 О.

Йаз Мо04 2ИрО; KJ; CuS04,5HzO; СОС!з х бйзО; смесь витаминов и углеводов, состоящую из тнамина, инознта, сахарозы, а также агар-агар и воду, о т л ц ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повьппения выхода алкалоидов, свмда донолнительио содержит (NH4) 804, ион Са в виде соли Ca(NOз) 4Н,Î; ионы

К и С! — в виде соли KCI, ион Н,Р04"— в виде соли NH4HqPO4 при следующем количест4% веином соотношении компонентов (мг/л) KI4Os

1чН4 N03

MgS04 ° 7Н,О (NH4) 3 1 04

1 1Н4 НФ РО4

Са(Й03) q 4Н О

KCI ре804 7НзО

ИаЭДТА

Н Во

+>S04 4Н3О

ZnS04 ° 4Нв О

Иа Мо04 2Н О

KJ

С11804» 5Нр О

CoClg 6Н30

ТН8МНН

Инозит

Сахароза

Агар-агар

Вода

Источники информации, ние при экспертизе

1. Растительные ресурсы . 1976, с. 578.

1000 — 1900

300 — 700

400 — 600

200 — 500

500 — 800

800 — 900

40 — 100

27-28

37-38

9,3 — 12,4

22-23:

1,7 — 8,6

0,2-0,3

0,83 — 0,9

0,015 — 0,025

0 075 — 0,125

0,4-1,0

60 — 100

4800 — 5200

6000 — 7000 до 1л. принятые во