Способ получения полифункциональных ферментов

Способ получения полифункциональных ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистимеских

Республик (ii 680738 (61) Дополнительное к авт. свнд-ву— (22) Заивлено 19.12.77 (2l )2558288/28 13 (51)М. Кл, А 61 K 37/62

С 07 О 7/02 с присоединением заявки Ж

Государственный комитет

СССР

Ilo делам изобретений н открытий (23) Приоритет

0пУблнкаван0 25.08.79. Бюллетень Pk 31 (53) УДК 577.15 (088.8) Дата опубликования описания 27 08 7-9 (72) Авторы изобретения

М, A. Хенох и В, П. Першина

Институт цитологии А Н СССР (7I ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИФУНК11ИОНАЛЬНЫХ

ФЕРМЕНТОВ

Тестами для определения ферментативных активностей служат расщепление полимерной РНК (возрастанне поглощения раствором оптического излучения с длиной волны 260 нм, измеряемое на спектрофо тометре СФ»16) - для рибонуклеазы, воз»растание пропускаемости света =450 нм суспензией Мтсгососсо 1 ьод М1соы

- дпя лизоцима и гидролиз амилазыдля амилолитической активности.

Изобретение относится к производству ферментов и может быть использовано в фармацевтической промышленности.

Известен способ получения полифункциональных ферментов путем смешивания равных объемов водных растворов исходных

5 ферментов (1), Однако такой способ сложен и трудоемок.

Цель изобретения - упрощение способа.

1О

Это достигается тем, что полученную смесь эамораживают при температуре минус 77 - минус 78 С в течение 4-12 суток.

Способ осуществляется следующим образом.

3 мл смеси водных растворов ферментов (концентрация 1 мг/мп) помещают в сосуд дьюара с твердой углекислотой. После иэотермической обработки холодом при минус 77 - минус 78 С в течение 4-12 о суток растворы оттаивают в бане из дистиллированной воды при комнатной темп ратуре, затем подвергают фоакционированию на колонке с сефадексом. .Получение гибридных ферментов прово»дят в различных системах ферментатнвных смесей, в смесях лизоцима и рибонуклеазы, лизоцнма и с(.- амнлазы а(-амнлазы и ри7 бонуклеазы.

Были выделены активные бифункциональные молекулы гибридных ферментов, которые имели каталитические свойства каждого из компонен,ов. В смеси иэ трех ферментов (лизоцим, с(-амипаза, рнбонуклеаза) получен трифункциональный фермент.

6807

Для измерения оптического поглошения растворами ферментов используют спектр фотометр Сф-16, Результаты представлены в таблице.

Как видно иэ таблицы, способ обеспечивает высокий выход (8-249o) гибридного 5 прбдукта, сохраняюшего сьойства отдельных

8 65 69 — 12 5 56 54 - 24 30 26

Рибонуклеаза

Рибонуклеаза

+ с(-амилазв

4,5 50

50 90 50 — 50 12, 5 34 — 30

Лизоцим + с =амилаза

5,0 — 60 54 8, 5 — 50 46 9,0; 36 32

Лизоцим +

Рибонукле boa + с -ами10 60 64 60 . 12,5 50 51 50 16,0 36 39 34 лаза зю

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.В1осЭЕтп1Мг3 1974, 13, No 4, 698-70 2.

Сост ави тель С. М алюти на

Ре ак A Бе Тех ед 3. Фанта Корректор А. Гриценко

Заказ 4864/6 Тираж 672 Подписное

ННИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рвушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент", г.Ужгород, ул, Проектная, 4

Формула изобретения

Способ получения полифункциональных ферментов путем смешивания равных объе мов водных растворов исходных ферментов с последующим сшиванием их, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, сшиввние проводят заморв

38

4 компонентов. Он прост в осуществлении, позволяет получить высокий по сравнению с известными способами (4-6%) выход полифункционвльных ферментов с высокой активностью без применения химических сшивающих агентов и дорогостоящих установок для облучения. живанием смеси при температуре минус 77 о минус 78 С в течение 4-12 суток.