Способ определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью

Способ определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Сова Советскнк

Соцналнстнческнк

Республик

ОП ИСАйИЕ изовгкткния ""68 »3

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Э

1 (51)М. Кл.

G 01 N 33/16 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено060378 (21) 2589023/30-15 с присоединением заявки М

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (23) Приоритет

Опубликовано 250879 Бюллетень М 31

Дата опубликования описания 250879 (53) УДК 636.3:

: 636.09 (088.8) (72) Авторы изобретения

Ф.М. Мухамедгалиев, И.Ф. Латыпов, Ю.Ф. Мартынов, К.М. Разознаев и Э.Б. Всеволодов

Институт экспериментальной биологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЦЕССИВНОГО ГЕНА

ПИГМЕНТАЦИИ ШЕРСТИ У ЖИВОТНЫХ С БЕЛОЙ ШЕРСТЬЮ

Изобретение относится к области селекции сельскохозяйственных животных, преимущественно овец, и может быть использовано для создания гомоэиготных (по доминантному гену белой окраски шерсти) популяций и для отбора из стада гомозиготных или гетерозиготных особей для генетических экспериментов °

В современной селекции и генетических исследованиях наличие у животных гена рецессивной пигментации (который у различных авторов обсзначается по разному) определяют единственным способом — анализирующим скрещиванием fl). Этот метод предполагает скрещивание исследуемого животного с особями, генотип которых в отношении рецессивной пигментации шерсти известен (или выявляется в процессе опыта) и по наличию потомков с пигментированной шерстью судят о присутствии рецессивного гена пигментации у исследуемого жинотного, Пигментация шерсти на большой части поверхности кожи или во многих отдельных небольших участках возможна только при гомоэиготности по гену (генотип dd), т.е. при отсутствии доминантного аллеля Д, обусловлинающего белую окраску шерсти. Рождение частично пигментированных ягнят, т.е ° белых ягнят с одиночными пятнами пигментации рунной части волосяного покрова или с пигментацией только ушей и дистальных отделон конечностей, может не быть связано с генотипом dd.

Иэ селекционной практики известно, что н стадах белых животных, в частности овец, встречаются как гомозиготные по белой окраски шерсти особи (генотип 00), так и гетерозиготные особи (генотип Dd) внешне не отличающиеся. От комбинации родителей, оба иэ которых несут рецессивный ген пигментации (т.е. с reHoTHIIoM Dd) н

25Ъ случаев рождаются ягнята с браком пигментированная шерсть . Методом анализирующего скрещивания можно выянить баранов с генотипом Dd только обнаружив н его достаточно многочисленном потомстве от белых овцематок ягнят с пигментированной шерстью. Что касается овцематок, у которых потомство не может быть столь же многочисленным, как у баранов, то сколько-нибудь надежно исключить присутствие у них гена d очень трудно.

681373

50

Недостатком известного способа является то, что он очень длительный (по крайней мере несколько лет) и трудоемкий, т.е ° в хозяйстненных условиях почти неосуществимо выявление и удаление из стада всех особей, несущих ген d и формирование стада из заведомо гомозиготных животных (генотип РР) для селекционных или на— учно-исследовательских целей.

Цель изобретения — повышение эффективности селекции и сокращение

10 ее срокон при формировании стад, гомозиготных по гену доминантной белой окраски шерсти животных, в частности онец.

Поставленная цель достигается тем, 15 что у разных особей с белой шерстью отбирают образцы шерсти, удаляют иэ нее жиропот, измеряют сигнал электронного парамагнитного резонанса образцов шерсти, после чего образцы шер- 2() сти подвергают ультрафиолетовому облучению и повторно измеряют сигнал электронного парамагнитного резонанса и по корреляционному анализу сигналов электронного парамагнитного резонанса до и после облучения судят о наличии рецессивного гена пигментации шерсти у животных. При этом перед измерением сигнала электронного парамагнитного резонанса образцы шерсти обрабатывают дистиллированной водой и высушивают.

На чертеже изображено расположение точек (каждая иэ которых соответствует одной овцематке) вдоль линий 35 регресии: положительной (для несущих ген d овец — гетерозигот — ГТ) и отрицательной (для лишенных генà d овец — гомозигот — ГМ).

Сплошными кружками обозначены белые овцематки, родившие пигментирован-40 ных ягнят от белых баранов (т.е, заведомо гетероэиготные матки Dd). Пустыми кружками обозначены онцематки, родившие белых, а крестиками частично пигментиронанных . ягнят. Сплошные 45 кружки располагаются только вдоль линии положительной регрессии (ГТ), а пустые кружки к крестики как вдоль линии положительной,так и вдоль линии отрицательной регрессии, так как белых ягнят рождают и гомо- и гетероэиготные матки.

Пример. Для реализации способа может быть использован ЭПР-спектрометр ЭПА 2М и другие более совершенные радиоспектрометры, ультрафиолетовый облучатель, например, типа

OPK-21 с ртутно-кварцевой лампой

ПРК-2 и диапроектор как мощный источ— ник света например, Свитяэь . ОбФ

60 разцы состриженной весной шерсти из нижней защищенной сохранившимся жиропотом части штапелеи моь--: в двух сменах ксилола, высушивают при комнатных условиях, смачивают дистиллированной водой в течение 15 мин и вновь нысу>5 шивают при комнатных условиях до прекраще .ия снижения неса (одни сутки), Затем взвешивают по 40 — 60 мг шерсти, помещают ее по воэможности равномерным слоем на штатив в виде доски, разделенной проволокой на ячейки, площадью 9 см и облучаю. светом диапроектора с расстояния одного метра от объектина в течение 1-2 час, с целью повысить содержание парамагнитных центров в шерсти до уровня, обеспечивающего отношение сигнал/шум при ЭПР-спектрометрии образцов не ниже 10. После этого образцы шерсти помещают в стеклянные капилляры, подвергают ЭПР-спектрометрии и определяют величину ЭПР-сигнала в относительных единицах. Величина ЭПР-сигнала закономерно отличается у разных образцов в дна и более раза.

Извлекают образцы шерсти иэ капилляров и нновь помещают их по воэможности ранномерным слоем на тот же штатив и облучают ультрафиолетом (ртутно-кварцевая лампа ПРК-2, диапазон длин волн 248 †5 НМ) с расстояния одного метра от лампы в течение

1 час. При окончании облучения образцы смачивают н дистиллированной воде 15 мин и высушивают при комнатных условиях до прекращения снижения веса. После этого вновь записывают

ЭПР-сигнал образцов и данные ЭПРспектрометрии каждого образца наносятся на миллиметроную бумагу, н виде точки с координатами: по оси абсцисс сила ЭПР-сигнала (в относительных единицах) до ультрафиолетового облучения, а по оси ординат — сила

ЭПР-сигнала (в относительных единицах) того же образца после ультрафиолетового облучения и смачивания. Как видно из чертежа, точки, соответствующие образцам шерсти от разных овец, располагаются не случайно, а вдоль двух пересекающихся линий регрессии: положительной (ГТ) и отрицательной (ГМ). Точки, лежащие вдоль отрицательной линии регрессии, представлены образцами шерсти от гомозиготных, лишенных гена d овец (генотип DD), а точки вдоль положительной линии регрессии от гетерозиготных овец (генотип Dd), несущих ген d. Небольшая часть точек (8-20%), расположенных н зоне пересечения двух линий регрессии, соответствует овцам, генотип которых данным методом выявить невозможно. Достоверность отнесения данного животного к гомоэиготам или гетероэиготам возрастает по мере удаления соответствующей ему точки от пересечения линий регрессий и оценивается на основе общепринятых методо регрессионного анализа.

Проверка полученных данных на основе единственно практически приемлемого приема ЭПР-спектрометрии шерсти белых маток, родивших черных яг681373

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 5079/41 Тираж 1090 Подписное

r. Ужгород, ул. Проектная, 4 филиал ППП Патент, нят от белых баранов (т.е. шерсти заведомых овцематок — гетероэигот, несущий ген d), приведенным выше способом показала, что точки, соответствующие ЭПР-сигналам их шерсти, ложатся только вблизи положительной линии регрессии и никогда не попадают в по5 пуляцию точек вдоль отрицательной линии регрессии (не считая зоны пересечения двух линий регрессий).

Преимущества предлагаемого способа состоят в том, что он позволяет определить рецессивный ген пигментации d у животных в стаде эа несколько дней, вместо многих месяцев и даже лет, необходимых для проведения и учета результатов анализирующего 5 скрещивания, которое к тому же дает возможность при массовом исследовании выявить только одну четверть особей иэ числа гетерозиготных маток эа во производительный цикл данного gp вида животных.

Для баранов преимущество предлагаемого способа заключается в отсутствии необходимости покрывать им сотни голов маток с неизбежным рис- 2 ком внести нежелательный рецессивный ген пигментации и ждать результатов от анализирующего скрещивания.

Описанный способ предлагается как единственный практически приемлемый для определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью, что позволяет создавать популяции гомозиготных животных по доминантному гену белой окраски шерсти °

Способ определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью сокращения сроков выявления рецессивного гена пигментации, о наличии его у животных, судят по корреляции сигналов электронного парамагнитного резонанса образцов шерсти до и после ультрафиолетового облучения данных образцов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Васин Б.Н. Эволюция шерстного покрова овец. — Новосибирск, 1969, с. 20-32.