Способ обнаружения дикаина

Способ обнаружения дикаина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1 1

О П И C А Н И Е ич682798

ИЗОБРЕТЕН И Я, К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Соки Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свпд-ву— (22) Заявлено 28.03.77 (21) 2467070/23-04 с лрисоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30.08.79. Бюллетень ¹ 32 (45) Дата опубликования огшсания 18.10.79 (51) >, 1 л 2 С 01 N 21Щ

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий ("-") ДЕ 543.01;". 7 (088.8) (72) Авторы изобретения

Д. В. Песахович и Б. Н. Бекетов (71) Заявитель Тюменский государственный медицинский институт (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ДИКАИНА

Изобретение относится к аналитической химии, а именно, к способам обнаружения дикаина, оно может быть использовано в химико-токсилогическом анализе и биофармацевтических исследованиях.

Известен способ обнаружения дикаина путем обработки анализируемой пробы концентрированной азотной кислотой с последующими удалением влаги и добавлением к сухому остатку спиртового раствора едкого кали с получением при этом кроваво-красного окрашивания (1). Однако этот способ имеет малую точность.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ обнаружения дик анна, заключающийся в обработке анализируемой пробы раствором серной кислоты, центрифугировании и отделении примесей, подщелачивании полученного при этом раствора и обработке его хлороформом, очистке хлороформенного экстракта хромотографией в тонком слое сорбента с последующим микрокристаллоскопированием (2).

Данный способ продолжителен и имеет низкую чувствительность, поскольку не всегда можно обнаружить дикаин (редко имеется нераспавшаяся молекула его). Это обусловлено тем, что в животном организме дикаин под влиянием ферментов крови уже через короткое время после его введения распадается с образованием основных метаболитов — продуктов его гидролиза и-бутиламинобензойной кислоты и диметиламиноэтанола.

Целью изобретения является повышение чувствительности и сокращение времени определения.

Предлагаемый способ обнаружения дикаина заключается в обработке гомогенизируемой анализируемой пробы раствором соляной кислоты, нагревании, центрифугированип и отделении от примесей, в подй кислении полученного после отделения примесей водного раствора до рН 4,0 — 4,5 с обработкой его хлороформом, очистке хлороформенного экстракта электрофорезом с последующей обработкой электрофореграммы последовательно соляной кислотой, парами брома, нитритом натрия и хинозолом в присутствии гидроксида натрия.

Отличительными признаками способа являются гомогенизация подкисленной анализируемой пробы, нагревание, подкисление полученного после отделения примесей водного раствора до рН 4,0 — 4,5, очистка хлороформенного экстракта электрофорезом, последующей обработкой электрофореграммы последовательно соляной кислотой, па682798

Способ обнаружения дикаина путем обработки анализируемой пробы раствором минеральной кислоты, центрифугированием и отделением примесей, обработкой полученного при этом водного раствора хлороформом, очисткой хлороформенного экстракта, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени определения, после обработки кислотой с одновременной гомогенизацией анализируемую пробу нагревают, полученный водный раствор после отделения примесей подкисляют до рН 4,0 — 4,5 и о пстку хлороформепного экстракта осуществляют электрофорезом с последующей обработкой электрофореграммы последовательно соляной кислотой, парами брома, питритом натрия и хинозолом в присутствии гидроксида натрия.

65 рами брома, нитритом натрия и хинозолом в присутствии гидроксида натрия. Наличие дикаина в биологическом материале определяют не по молекуле дикаина, а по его метаболиту — и-бутиламинобензойной кислоте, являющейся более устойчивым соединением и сохраняющейся более длительное время. Кроме того, с целью экономии времени на химико-токсикологический анализ обработку анализируемой пробы проводят при одновременной гомогенизации биологического материала в микроразмельчитсле тканей РТ-2 водой, подкисленной соляной кислотой. Очищают вытяжку от соэкстрактивных веществ нагреванием на кипящей водяной бане с последующими центрифугированием и экстракцией хлороформом при рН 11. Предварительно очищенную вытяжку подкисляют до рН 4,0 — 4,5,и экстрагируют хлороформом п-бутиламинобензойную кислоту. Хлороформное извлечение очищают электрофорезом на бумаге. Электрофореграммы высушивают при комнатной температуре и проявляют реакцией азосочетания. Для этого от электрофореграммы (26 2 см) отрезают продольную полосу шириной 0,5 см, которую опрыскивают 1 н. раствором соляной кислоты и подвергают воздействию паров брома в течение 5 мин.

Затем последовательно опрыскивают Зо/оным раствором нитрита натрия и через

3 мин 0,3 /о-ным раствором хинозола в 8 /оном растворе гидроксида натрия.

Пример. 10 г печени трупа, содержащей 1000 мкг дикаина, после 24 ч инкубирования гомогенизируют в присутствии

25 мл разбавленной соляной кислоты с последующим центрифугированием при

6000 об/мин. Операцию повторяют 3 раза.

Центрифугаты объединяют, подщелачивают 25О/о-ным раствором аммиака до рН 11 и экстрагируют хлороформом дикаин 4 раза. При однократной экстракции хлороформом при рН 11 экстрагируется 93 /о дикаина. Основной метаболит дикаина п-бутиламинобензойная кислота (п-БАБК) при рН 11 практически не экстрагируется.

При экстракции дикаина в хлороформный слой переходит основная масса соэкстрактов.

Определение п-БАБК. Вытяжку после экстракции дикаина подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 1 и нагревают в течение 1 ч при 100 С с целью гидролиза связанной п-БАБК и отделяют центрифугированием коагулирующие при нагревании биокомпоненты. Центрифугат подщелачивают 25 /о -ным раствором аммиа а до рН 4,0 — 4,5 и экстрагируют хлороформомм и-БАБК 4 р а за. При однокр атной экстракции хлороформом при рН 4,0 — 4,5 ..кстрагируется 97 /о п-БАБК. Хлороформпые экстракты (рН 4,0 — 4,5) объединяют и

30 растворитель испаряют. Сухой остаток растворяют в 96О/о-ном этаноле. Обнаружение п-БАБК проводят по следующей методике. На полоску фильтровальной бумаги наносят в несколько приемов аликвоту полученного раствора экстракта. Место внесения обрабатывают 1 н. раствором соляной кислоты и затем парами брома до образования устойчивой желтой окраски на месте нанесения раствора экстракта. Далее последовательно обрабатывают 3 о/о -ным раствором нитрита натрия и через 3 мин

0,3 /о-ным раствором хинозола в 8 /о-ном растворе гидрооксида натрия. Образуется кирпично-красное окрашивание, интенсивность которого зависит от количества п-БАБК в пробе. Интенсивность окраски сохраняется более двух лет. Чувствительность окраски (реакции) 0,5 мкг п-БАБК в пробе.

Очистку раствора экстракта (рН 4,0—

4,5) проводят электрофорезом на бумаге по следующей методике.

Аликвоту раствора экстракта наносят в виде сплошной полосы на электрофореграммы (2x26 см, хроматографическая бумага ФН 15),и проводят электрофорез в течение 1 ч при напряжении 400 В. Начальная температура электролита 20 С. Одновременно проводят электрофорез свидетеля — п-БАБ К.

На проведение анализа биологического материала предлагаемым способом необходимо 10 — 12 ч на полный анализ. Использование гомогенизации сокращает время изолирования и повышает выход,изолируемых веществ вследствие резкого увеличения поверхности контакта клеток ткани с извлекателем.

Чувствительность определения данным способом выше, чем известным, в 25 раз.

Формула изобретения

682798

Составитель Л. Соломенцева

Техред Н. Строганова

Редактор О. Кузнецова

Корректор С. Файн

Заказ 765/968 Изд, № 485 Тираж 1090 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Государственная фармакопея СССР, изд. Х, М., 1968, с. 244.

2, Роговский Д. Ю. Исследование дикаина и ксикаина в судебно-химическом анализе. Автореферат кандидатской диссертации, № 792, Львов, 1968.