Штамм "бк-харьков

Штамм "бк-харьков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

мг

ДФ 1

О Г И С-:-А — Н И Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советскмк

Соцмалмстмчесимк

Республик

1iii686738

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 24.12.76 (21) 2434245/30-15 (51)М. Кл.

А 61 К 39/04 с присоединением заявки РЙ—

Гвсудврстввякье квмвтвт

СССР вв делам кзвбрвтвивв к аткрытвм (23) Приоритет

Опубликовано 25 09 79 Бюллетень йе 35

Дата опубликования описания 25 09 79 (53) УДК 616 002-5 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. П. Черкас, С. Г. Кандыба и И. Л. Дикий

Харьковский научно-исследовательский институт микробиологии, вакцин и сывороток им. Мечникова (7I) Заявитель (54) ШТАММ MYCOBACTERiUM TUBERCUIOSlS

"БК-ХАРЬКОВ"

Штамм Mycobacterium tuberculosis ("БК-Харьков" N 841, вариант штамма Vallee типа Bovis, предназначенный для изготовления противотуберкулеэной вакцины) .

Изобретение относится к ветеринарии и представляет собой новый штамм микобактерий туберкулеза, который может быть использован для приготовления противотуберкулезных препаратов: вакцины, других антигенов, а также сывороточных препаратов.

Для профилактики туберкулеза людей во всем мире применяется живая вакцина иэ микобактерий туберкулеза штамм БЦЖ/BCG 111

В ветеринарии вакцинопрофилактика БЦЖ как в Советском Союзе, гак и большинстве стран мира, в настоящее время не осуществляется. Одной из основных причин этого, помимо недостаточной нммуногенности ЬЦЖ является возникновение продолжительной аллергии у вакцнннрованных БЦЖ животных, сохраняющейся в течение года и более, и отсутствие пригодных для практики методов дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин от постинфекцнонных, Одним нз средств для улучшения вакцинопрофилактики туберкулеза у людей и создания препарата для таковой у животных является применение новых, более иммуногенных, вакцинных штаммов мнкобактерий туберкулеза. Эти штаммы должны быть безвредными и обладать достаточнымн для защиты вакцинированных от развития туберкулезного процесса иммуннзирующими свойствами, а также не обусловливать возникновения продолжительной аллергии.

Целью. изобретения является получение штамма микобактерий туберкулеза, отвечающего основным требованиям, предьявляемым к вакцинным штаммам: безвредный, достаточно нммуногенный, чтобы защитить вакцинированных от развития туберкулезного процесса.

Полученный штамм микобактерий туберкулеза "БК-Харьков" имеет следующие морфологическую, культуральную и другие биологические характеристики, Морфологические признаки: слегка изогнутые, иногда с утолщениями на концах, полнморфные, грамположительные палочки, длиной 2 — 8 мкм и толщиной 0,2 — 0,5 мкм, типично окрашиваются

686738 ражения после длительного контакта с больными туберкулезом телятами, достигает 100%.

Остаточная вирулентность: незначительная, первичные туберкулезные комплексы не формируются.

Аллергиэирующие свойства: аллергия слабо выражена и относительно кратковременна (у морских свинок до двух, а у телят до шести месяеа).

Приобретенные штаммом микобактерий туберкулеза "БК-Харьков" вирулентные свойства оказались стойкими, наследственно закрепленными. геверсионное пассирование в течение

10 лет не обнаружило восстановления его исходной вирулентной характеристики. Штамм "БКХарьков" был получен из вирулентного штамма микобактерий туберкулеза Val lee, бычьего гипа, который пассировали в течение 1-1,5 лет на мясо-пептонно-глицериновом бульоне, содержащем 3-15% препарата "Эктерицид", (водорастворимые продукты окисления рыбьего жира в физиологическом растворе хлорида натрия), причем концентрацию экстерицида в среде выращивания микобактерий туберкулеза увеличивали с 3 до 15% по мере возрастания кратности пассажей.

Сравнительная характеристика штаммов микобактерий туберкулеза "БК-Харьков" и БЦЖ приведена в таблице.

Индекс зашиты

Продолжительность аллер гической реакции на туберкулин

Остаточная вирулентность

Штамм

"БК-Харьков"

У морских свинок У морских свинок и телят 100% до 2, а у телят до 6 месяцев

У людей 73,2 — 83,7% У телят 1 год и

Вакцинированные более телята лишь переживают контрольных животных, а через

3 — 9 месяцев после заражения у них развивается инкапсулированный туберкулез. тельной аллергениостью — относительно кратко. временной и слабо выраженной аллергической реакцией на туберкулин, что дает возможность в практике проводить дифференциацию между вакцинированными и инфицированными туберкулезом животными. по методу Циль-Нильсена, стойко сохраняющие эту окраску при воздействии кислот, щелочи и спирта, не образующие спор и не имеюгцие капсулы. Цитоплазма бактерий имеет гомогенный вид и содержит гранулы, микрогранулы и вакуолн.

Культуральные свойства . на поверхности жидких питательных сред формируется рыхлая, морщинистая пленка светло-желтого цвета. На плотных питательных средах (Петрова, Виногра- 10 дова) растет в виде изолированных колоний типа "R" с образованием пигмента лимонно-желтого цвета. Растет в аэробных условиях. Анаэробиотические свойства не отмечаются. Оптимальные параметры температуры 37,8 — 38,0 C рН 4,5—

8,0.

Биохимические свойства: снижена активность каталаэы, уреазы и дегидразы.

Иммуногенные свойства: индекс защиты

"БК-Харьков в эксперименте на морских свин- 20 ках после однократного подкожного введения им 5 мг "БК-Харьков" и последующего заражения 0,01 мг вирулентной культуры микобактерий туберкулеза штамм Vallee, а также на телятах после двукратной внутрикожной вакцинации по 2 мг/кг или трехкратной подкожной вакцинации в дозах 0,4 — 0,6 — 0,8 мг/кг веса теленка с интервалом 5 суток и экспериментального заражения 15 мг подкажно вирулентной культурой штамма У 8, либо естественного за- 30

Как видно иэ таблицы, штамм "БК-Харьков" отличается от производственного штамма

БЦЖ высокой иммуногенной активностью (индекс защиты 100 o), почти полной алатогенностью, (не формируется первичный туберкулезный комплекс), ареактогенностью, а также незначиПервичные туберкулезные комплексы не формируются

Формируются первичные туберкулезные комплексы

Они инкапсулируются, а затем рассасываются (сроки исчезновения от 100 дней до 4 лет) 686738

Формула изобретения

Составитель В. Завьянцев

Техред JI.Алферова Корректор М. Шароши

Редактор Д. Пинчук

Тираж 672 Подписное

UHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5588/6

Филиал ППП "Патент™, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Отмеченные преимущества штамма БК- Харьков" по сравнению с БЦЖ были установлены на ла-лабораторных животных и на 300 телятах. Штамм

"БК-Харьков" безвреден для телят и обладает иммуногенностью. 5

В лабораторных опытах по определению иммунитета у 60 телят, вакцинированных различными методами — внутрикожно, подкожно и перорально — установлен иммунитет, соответственно методу прививки, у 100 — 40% животных при искусственном заражении, (отсутствие иммунитета отмечалось у телят, которым вакцина бы. ла применена перорально).

В производственных условиях из 489 телят, привитых вакциной внутрикожно и исследованных аллергическим методом после прививки, не реагировали на туберкулин от 20 до 70 % животных (по группам), а у трех телят из пяти, положительно реагировавших при туберкулинизации и убитых для исследования через 6 — 9 мес. после вакцинации, обнаружены патоморфологические изменения во внутренних органах и лимфатических узлах, типичные для туберкулеза.

Экономический эффект от использования вакцины "БК-Харьков" для профилактики туберкулеза только крупного рогатого скота в масштабах страны может достигнуть сотен миллионов рублей в год, так как гибель одного теленка в возрасте до двух лет обходится в 350 — 500 руб, 30 колеблясь в зависимости от его породы, веса, себестоимости и других показателей в каждом хозяйстве.

Штамм Mycobacterium tuberculosis "БК-Харьков", вариант штамма Vallee типа Sovis, предназначенный для приготовления противотуберкулезной вакцины, хранится в коллекции Харьковского научно-исследовательского института микробиологии, вакцин и сывороток им. Мечникова.

Морфоло ические признаки: слегка изогнутые, иногда с утолщениями на концах, полиморфные, грамположительные палочки длиной 2 — 8 мкм и толщиной 0,2 — 0,5 мкм, типично окрашивающиеся по методу Ииль-Нильсена, стойко сохраняющие эту окраску при воздействии кислот, щелочи и спирта, не образующие спор и не имеющие капсулы. Иитоплазма бактерий имеет го. могенный вид и содержит гранулы, микрогранулы и вакуоли.

Культуральные свойства: на поверхности жидких питательных сред формируется рыхлая, морщинистая пленка светло-желтого цвета.

На плотных питательных средах (Петрова, Виноградова) растет в виде изолированных ко- лоний типа R, с образованием пигмента лимонно-желтого цвета. Растет в аэробных условиях, анаэробиотические свойства не отмечаются. Оптимальные параметры температуры 37,8-38,0 С, рН вЂ” 4,5 — 8,0.

Биохимические свойства: активность каталаэы, уреазы и дегидраэы снижена.

Иммуногенные свойства: индекс защиты морских свинок и телят достигает 100%.

Остаточная вирулентность: незначительная, Первичные туберкулезные комплексы не формируются.

Аллергиэирующие свойства: аллергия слабовыражена и относительно кратковременна (у морских свинок до двух, а у телят до шести месяцев) .

Источники информации, принятые во внима ние при экспертизе

1. Вейсфейлер Ю. К. Руководство по сывороточному и вакцинному делу — М., 1943, с. 241253.