Патент 687114

Ингибитор бактериофага n=69-6

 

0 П И С А Н И Е,бв71Н

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

СОюз Советских

Социалистических

Республнк

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 03.05.78 .(21) 2610282/30 — 15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) М. Клк

С 12 В 1/24

Гасударстеенный каметет

СССР еа делам мзебретекей и еткрыткй

Опубликовано 25.09.79. Бюллетень № 35

Дата опубликования описания 25.09.79 (53) УДК 63:576.8 (088.8) (72) Авторы изобретения

Т. Ю. Падегимас, Г. И. Мицкуте н А.— А. Б. Паулюконнс

Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энэнмологии (71) Заявитель (54) ИНГИБИТОР БАКТЕРИОФАГА G 7 ВАСlllUS

ТН0йf NG1EN$1$ VAR. GAIIER1AE Н 69-6

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам ограничения бактернофаговой инфекции, оно может быть использовано при производстве продукта защиты растений — знтеробактерина.

Известны средства, ингибирующие бактериофаговую инфекцию в ферментационных средах (1). Недостатком известных средств является снижение или исчезновение эффективности через некоторое время их использования. Это обусловлено изменчивостью и приспособляемостью бактериофагов.

Целью изобретения является изыскание новых средств, ингнбирующих бактернофаг д 7

Bacillus thyringiensis var. galleriae !1О 69 — 6, доступных для использования в промышленном масштабе и обладающих лучшими биологическими свойствами.

Для достижения указанной цели в качестве ннгибитора бактериофага g 7 Bacillus thu—

ringiensis.var. galleriae У 69 — 6 применяют

N- (о-нитрофенилсульфенил-1+фенил-а- аланин (НФСФА) в виде дицикпогексиламмонневой соли. Это соединение применяется в качестве реактива в химии пептидов (2). Его включают в состав питательной среды в начале ферментацнн. Оно селективно влияет на развитие данного бактернофага, не оказывая отрицательного влияния на рост и размножение культуры.

П р н м е р 1. Ингнбирование бактериофага g 7 на твердой питательной среде в чашках Петри.

Питательную среду, состоящую из 15 г хукуруэной муки, 30 r кормовых дрожжей, !

О г агар-агара н воды (ло 1000 мл), хорошо перемешивают, доводят рН до 7,0 — 7,4 и стерилизуют 40 мнн прн 129 С. Стерильную среду охлаждают до 50 С н .разливают по чашкам

Петри. После застывания нижнего слоя ло его поверхности разливают смесь, состоящую иэ

0,2 мл:смытой с косячка односуточной суспензии Bacillus thuringiensis var. galleriae

N 69-6, 0,2 мл бактериофага g 7 (!О клеток/мл), 0,2 мл 0,2%-ного раствора дицнклогекснламмонневой соли НФСФА в этаноле (70 ) и 3 мл расплавленного и охлажденного до 42 С О,б -ного агар-агара. После эасты687114

lO

Пример 2. Ингибирование бактериофага g 1 в жидкои среде.

Питательную среду, состоящую из 30 г кормовых дрожжей, 15 r кукурузной муки и воды (до 1000 мл), хорошо перемешивают, !5 рН доводят до 6,8 — 7,2, разливают в колбы по 80 мл и стерилизуют 45 мин при 129 С.

После охлаждения до 40 С среду эаеевают по

0,2 мл смытой с косячка односуточной культуры У 69 — 6 (10 клеток/мл) и соответст- 2о

Культура У 69-6

Рост культуры спустя 48 ч спустя 24 ч количество количество

% клеток в

1 мл клеток в

1 мл

7200Ж400

Чистая культура

Культура + фаг g 7

Культура + НФСФА

70000+300

55000+190

Культура ь фаг g 1

НФСФА

Применение N-(о-нитрофенилсульфеннл)-L-P-фенил-а-аланина в качестве ингибитора

45 бактериофага g 7 Bacillus thuringiensis var, gal leriae 1!о 69-6.

Источники информации, принявшие во внимание при экспертизе !. Авторское свидетельство (ГСР N 417466, кл. С !2 В 1/24, 1974.

2. Lewas L. et al. J. Amer. chem. Sos., 1963, 85, 3660.

Тираж 526

Подписное

ЦНИИПИ Заказ 5674/26

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 ния верхнего слоя среды чашки инкубируют в термостате при 37 С. Контролем служат чашка Петри, содержащие те же компоненты, кроме инпибитора НФСФА. Результаты олыпгов оценивают по количеству негативных колоний, образующихся через 24 ч, Проводят 12 опытов., Количество негативных клеток без ингибитора 181+21,0; с ингибитором 15+0,5. Эффективность 92%.

При производстве энтеробактерина более

50% ферментаций вир1, ентны бактериофагом

g 7 вследствие чего значительная часть фер1 ментаций сливается в канализацию. Приведенные опыты показывают,что НФСФА является эффективным ингибитором бактериофага g 7.

Рост зараженной бактериофагом культуры в присутствии ингибитора достигает более 80% от нормального.

Согласно предварительной оценке годовой экономический эффект от реализации изобретения составит более 1,3 млн. рублей. 4 вующим количеством бактериофага g 7 иэ расчета фаговая частица на бактериальную клетку. После этого вносят спиртовой раствор

НФСФЛ в таком количестве, чтобы его конечная концентрация в колбах составляла 20 мг/л.

Контрольные колбы готовят так же, но в них не вносят НФСФА. Опытные и контрольные колбы ставят на круглые качалки (180 o6/мин) и инкубируют 48 ч при 37 С.

Эффективность действия НФСФА на бактериофаг g 7 оценивают путем подсчета количества живых клеток в 1 мл питательной среды через 24 и 48 ч роста культуры. Подсчет осуществляется методом разведения, высевая на агариэованную среду (мясопептонный агар) выросшие колонии. Процесс образования спор и кристаллов контролируют с помощью микроскопа. Полученные результаты ингибирующего действия НФСФА и бактериофаг g 7 приведены в таблице, ! 00 460001200 100

0 0 0

97 42000+2100 91

76 4000012200 87

Формула изобретения