Способ получения антирабической вакцины

Способ получения антирабической вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1 ц 68784I

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 29.06.78 (21) 2637322/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.11,80. Бюллетень ¹ 41 (45) Дата опубликования описания 07.11.80 (51) М.К .

С 12К 5/00

Государственный комитет

СССР (53) УДК 615.371/.372 (088.8) ио делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

M К. Каракуюмчян, Л. В. Надайчик, Э. P. Пилле, И. Л. Плетенева, Н. И. Бондикова, В. Л. Донюш, 3. B. Никулина, О. Г. Анджапаридзе и А. T. Кравченко

Московский научно-исследовательский институт вирусных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОИ ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии.

Известен способ получения антирабической вакцины путем гомогенизации вируссодержащей мозговой ткани в солевом растворе с последующей инактивацией и лиофилизацией целевого продукта (1).

Однако вакцина, полученная известным способом, содержит много балластных веществ и является реактогенной.

Целью изобретения является снижение реактогенности вакцины.

Цель достигается тем, что гомогенизированную мозговую ткань разводят буферным раствором с рН = 7,1 — 7,3, содержащим 0,005 M раствор КН РО4, 0,0035 М раствор NaOH, 0,3 М раствор NaCI и бидистиллированную воду, до получения 20%-ной суспензии, затем ее встряхивают, центрифугируют и надосадочную жидкость инактивируют бетапропиолактоном, Кроме того, встряхивание и центрифугирование ведут при 32 — 37 С.

Пример 1. Для получения очищенной инактивированной антирабической вакцины из мозга овец используют фиксированный вирус бешенства штамм «Москва», который пассируется через мозг кроликов и имеет инфекционный титр при интрацеребральном заражении мышей не ниже

10 JID;>/0,03 мл. Из мозга инфицированных кроликов готовят суспензию в разведении 1: 100 в физиологическом растворе и

5 вводят в объеме 0,3 — 0,5 мл в мозг 2 — 10 овцам (для получения одной серии вакцины). Овец, заболевших лабораторным бешенством с латентным периодом 90 — 144 ч и типичной клиникой, тотально обескровливают, отделяют голову и в стерильных условиях извлекают головной мозг, предварительно взяв пробу для контроля на стерильность. Далее мозг измельчают в гомогенизаторе до получения тонкодисперсной взвеси, которую разводят стерильным буферным раствором с рН 7,1 — 7,3 при температуре 37 С до получения 20% -ной суспензии.

Буферный раствор имеет следующий со2р став, Г/л:

КН2Р04 0,675

NaOH 0,14

NaC1 17,4

Вода бидистиллированная Остальное

Примечание: КН2РО4 и NaOH добавляют в виде 0,2 М растворов (25 мл и

17,5 мл соответственно), 687841 № опыта

Материал

Показатели

6 7 8 9

2 3

10 11

6,7 6,0

6,5 7,0

7,5

6,25

7,25 7,25

6,5

7)5

Титр вируса в Ig ЛД;„, 0,03 мл

7,1

Мозговая суспензия до очистки

28,5 24,8

32,0

37,3 21,2

30,8 28,4

21,2

34,9

28,0

Белок, мг1 мл

35,0

G,5 I

7,5

6,5

6,25

7,0 7,5

7,21

6,25

7,5 7,5

7,1

Титр вируса в Ig ЛД5о/0,03 мл

Мозговая суспензия после очистки

5,4

4,25

5,17 4,25

9,1 5,3

8,1 6,25

9,5

7,0

Белок, мг/мл

Буферный раствор стерилизуют автоклавированпем.

Полученную 20%-ную мозговую впруссодержащую суспензию встряхивают на шуттель-аппарате (120 — 150 качании% ин) при

37 С в течение 1 ч. После этого суслензию переносят в подогретые центрифужные стаканы и центрифугируют 30 мин нри 1200 ——

1500 . Надосадочную вируссодержащу о жидкость, свободную от нерастворимых бел- 10 ков и липидов, смешивают с равным объемом стерильного раствора 15% -ной сахарозы на бидистиллированной воде, содержащего бетапропиолактон в соотношении

1: 2000. Конечное разведение бетапропио- 15 лактона в полуфабрикате составляет

1: 4000, а концентрация сахарозы 7,5% .

Инактивацию вируса проводят при комнатной температуре (20 — 25 С) в течение

3 ч при непрерывном перемешивании. По- 20 том бутыли переносят в холодильную комнату с температурой 4 — б С на 48 — 72 ч.

Полуфабрикат проверяют на стерильность и полноту инактивации. Затем его разливают в ампулы по 1,5 мл и лиофилизируют. 25

В таблице представлена характеристика исходной и очищенной вируссодержащей мозговой суспензии.

Количество белка в готовом препарате менее 3 мг/мл (при определении по методу

Лоури), т. е. в 4 — 5 раз меньше, чем в известной вакцине Ферми.

Очищенная вакцина не обладает энцефалитогенной активностью в опытах на морских свинках (известная вакцина Ферми вызывает гибель около 75% животных).

Вакцина обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью в опытах на животных.

Введение вакцины добровольцам (по

3 мл в течение 14 дней) вызвало лишь у некоторых незначительные местные явления при отсутствии каких-либо общих реакций и сопровождалось активной продукцией антител к вирусу бешенства, 45

Предлагаемый способ позволяет полуГотовую вакцину контролируют на бактериологическую стерильность, безвредность, отсутствие живого вируса, содержание белка, антигенность, остаточную влажность и растворимость. При использовании вакцины содержимое одной ампулы растворяют в 3 мл бидистиллированной стерильной воды, проверенной на отсутствие пирогенностп.

Пример 2. Для получения инактивированной очищенной антирабической вакцины из мозга крыс-сосунков или мышейсосу нков вирус, указанный в примере 1, разводят 1: 1000 и вводят животным интрацеребрально по 0,03 мл. Для приготовления вакцины используют животных, заболевших на 3 — 5 сутки после заражения, В одну серию объединяют мозг 400 — 1000 животных. Далее проводят все операции, описанные в примере 1.

Предлагаемыи способ получения очищенной антирабической вакцины позволяет удалить из суспензии мозговой ткани около

80% балластных вешеств практически без потери вируса (см. таблицу). чить вакцину, не вызывающую местных- и общих реакций нри парентеральном введен и и.

Фор мула изобретения

1. Способ получения антирабической вакцины путем гамогенизации вируссодержащей мозговой ткани в солевом растворе с последующей инактивацией и лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью снижения реактогенности вакцины, гомогенизированную мозговую ткань разводят буферным раствором с рН = 7,! — 7,3, содержащим 0,005 М раствор

КН,РО4, 0,0035 М раствор iUaOH, 6,3 М раствор NaC1 и бидистиллированную воду, до получения 20%-ной суспензии, затем ее встряхивают, центрифугируют и надосадочную жидкость инактивируют бетапропиолактоном, 687841

Составитель С. Малютина

Редактор Е. Месропова

Техред И. Заболотнова

Корректор В. Борисова

Заказ 2543)2 Изд. Юю 598 Тираж 522 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

2. Способ по и. 1, отл и ч а ющий ся тем, что встряхивание и центрифугирование ведут при 32 — 37 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. МРТУ-42, Ка 481 — 72, 1972.