Способ получения препарата для профилактики и лечения синегнойной инфекции

Способ получения препарата для профилактики и лечения синегнойной инфекции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(и,688195

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

:. --,г +- " -

Йф лф)ф gd (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 25.01.78 (21) 2573664/28-13 с присоединением заявки № (51) М. Кл

А 61К 39/02

ГосУдаРственный комитет (23) Пр цор (53) УДК 576.8.097.2 (088.8) по делам изобретений (43) Опубликовано 30.09.79. Бюллетень № 36 и открытий (45) Дата опубликования описания 30,09.79 (72) Авторы изобретения (71) Заявители

И. А. Гришина, И. И. Колкер и Е. С. Станиславский

Институт хирургии им. А. В. Вишневского и Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ

ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СИНЕГНОИНОЙ

ИНФЕКЦИИ

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению иммунологических препаратов, которые используют в медицине.

Известен способ получения препарата 5 для профилактики и лечения спнегнойпой инфекции путем отбора вирулентной культуры — возбудителя синегнойной инфекции, посева ее на питательную среду и инкубпрования с последующей дезинтеграцией 0 микробных клеток, концентрированием полученной взвеси, выделением и очисткой целевого продукта (1).

Однако известный способ является трудоемким и не обеспечивает получения эф- 15 фективного препарата.

Цель изобретения — повысить эффективность препарата и упростить способ.

Эта цель достигается тем, что отбирают несколько вирулентных штаммов спнегной- 20 ной палочки, различных по серотппу и выделяющих протеазы и и, высевают

»х на питательную среду, содержащую в дистиллированной воде 2,0 0,1 вес. % пептона, 1,0+i-0,1 вес. % глюкозы, 0,5+0,1 вес. % 5 хлористого натрия, 1,5+-0,1 вес. % агара, инкубируют в течение 2 — 3 суток, затем после концентрирования взвесь клеток автоклавируют в течение 50 — 60 мпн, выдерживают ее 45 — 46 суток прп 22 — 25 C и выделяют целевой продукт ступенчатой стерилпзующей фильтрацией через асбестовые пластинки СФ и свечи Ф5 и Фт.

Кроме того, отбирают вирулентные штаммbl синегпойной палочки ¹ 8,868, 1463, 37,951.

Отбирают впрулентные штаммы синегнойной палочки, выделяющие протеазы и нуклеазы (желатпнозу, летпциназу, ДНК— азу, фпбринолизпн, уреазу, каталазу), коагулпрующие плазму и гемолпзпрующие кроличьи эритроциты, выделенные от больных с синегнойной инфекцией по серотппу, относящиеся к наиболее часто встречающимся в клинике.

Отбирают, например, пять штаммов № 8, 868, 1463, 968, 37, |оторые выделены от тяжелых ожоговых больных и обладают всеми вышеперечисленными свойствами.

Культуры этих штаммов выращивают на

K0CII IC3 . 3 ITPM Ci TOiIIlbI e I(3 I bTVP bl CiM bI B Bют физиологическим раствором и засевают газоном на чашки с питательной средой следующего состава: 2 вес. % пептона, 1 вес. % глюкозы, 0,5 вес. % NaC1, 1,5 вес. % агара и остальное — дистиллированная вода, стерилизуют среду прп

688195

Формула изобретения

Составитель О, Малютина

Редактор М, Кузнецова Техред Л. Орлова Корректор P. Беркович

Заказ 2355/16 Изд. Кв 565 Тираж 681 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К-35, Раушская иаб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

0,5 атм. Поверхность питательной среды псред посевом покрывают стерильными целлофановыми дисками (целлофан марки

100) . Навески ингредиентов питательной среды производят в пределах +0,1 г от указанных значений.

Чашки, не перевертывая, ставят в термостат прп 37 С на 3 суток. При таком режиме происходит образование достаточно большого количества экстрацеллюлярных продуктов жизнедеятельности синегнойной палочки. Температура в термостате может изменяться в пределах +0,1 С, т. е. в пределах точности работы самого термостата. 15

По истечении указанных трех суток стерильным пинцетом снимают целлофановые диски с культурой и слизью и переносят их в колбу с нейтральным физиологическим раствором и стеклянными бусами. 2о

Колбу встряхивают 10 — 15 мин на Шутеле при скорости 240 качаний в минуту.

Для освобождения раствора от гелеобразных остатков питательной среды его фильтруют через марлево-ватный фильтр. 25

Доводят взвесь до концентрации 5 млрд. клеток в 1 мл по оптическому стандарту.

Раствор автоклавируют при 1 атм (121 С) 1 ч.

После автоклавирования фильтрат конт- 30 ролируют на стерильность, засевая 1,0 мл фильтрата на бульон Хоттингера.

Стерильный фильтрат выдерживают

45 — 46 суток при 22 — 25 С для аутоферментолиза. 35

Через указанный срок раствор фильтруют через фильтр Сальникова (СФ) и затем через свечи Фз и Фт.

Стерильный препарат выдерживают еще

10 дней при 37 С, проводя контроль на 40 стерильность. Температурный режим поддерживается в пределах +-0,1 С.

Стерильный препарат разливают в ампулы по 0,1 мл и запаивают.

Эффективность препарата. .15

Расчет: Общая доза иммунизаций по белку предлагаемого препарата № 1000у на

180 †2 г веса животного, известного

16,5у на 18 — 20 г веса животного.

Доза иммунизации на 1 г веса: предла- 50 гаемого препарата 5у, известного — .

0,8257.

Доза заражения предлагаемого препа. рата 200000 ЬВзо, известного — 10 — 20

ЬЭзо. На 1 г веса предлагаемого препарата — 1000 ЬРзо, известного — 1 LD;p.

Из приведенного расчета очевидна высокая эффективность полученного препарата.

Предлагаемый способ позволяет получить препарат, вызывающий стойкий, антитоксический и антимикробный иммунитет, и удешевить его путем сокращения технологических операций и замены дорогостоящего оборудования и реактивов.

1. Способ получения препарата для профилактики и лечения синегнойной инфекции путем отбора вирулентной культуры— возбудителя синегнойной инфекции, посева ее на питательную среду и инкубирования с последующей дезинтеграцией микробных клеток, концентрированием полученной взвеси, выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности препарата и упрощения способа, отбирают несколько вирулентных штаммов синегнойной палочки, различных по серотипу и выделяющих протеазы и нуклеазы, высевают их на питательную среду, содержащую в дистиллированной воде 2,0+-0,1 вес. % пептона, 1,0<+-0,1 вес. % глюкозы, 0,5 1-0,1 вес.

/д хлористого натрия, 1,5+0,1 вес. /о огара, инкубируют в течение 2 — 3 суток, затем после концентрирования взвесь клеток автоклавируют в течение 50 — 60 мин, выдерживают ее 45 — 46 суток при 22 — 25 С и выделяют целевой продукт ступенчатой стерилизующей фильтрацией через асбестовые пластинки СФ и свечи Фз и Ф7.

2. Способ по п. 1 отличающийся тем, что отбирают вирулентные штаммы синегнойной палочки № 8, 868, 1463, 37, 951.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Франции № 22902110, кл. А61К

39/02, 1976.