Штамм

Штамм

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ ""69i124

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

l ъ " "" ",.м ". °, /. (53)М, Кл. .

01 N 1 5/00

С 12 К 3/00 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 060478 (21) 2602356/20-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УАК 663.18;

;576.8 (088. 8) Опубликовано 1 510.79. Бюллетень ¹ 38

Дата опубликования описания 18,1079 (72) Авторы изобретения A ° è . козлов, Г.с. смолина, В. Б .Фрейман и т. е. зискинд

Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов (71) Заявитель (54) It)TAMM ВаС(Ии5 Фа"1П01ЕпЫ6 чар . ЯОИвг1смР . Н5ВТ-114

Изобретение относится к сельскохозяйтсвенной микробиологии и может быть использовано для производства энтобактерина, применяемого для борьбы с насекомыми-вредителями.

Известно, что одним из средств уничтожения насекомых-вредителей является энгомопатогенный бактериальный препарат энтобактерина, производство которого осуществляется при помощи штаммов Вас. Quring ensis var. аПезщ

В настоящее время микробиологической промышленностью для производства энтобактерина используют интродукФивные дикие штаммы Bac.thiring ensis 15 тов aå5-го серотипа, выделяемые из погибших насекомых-вредителей (1).

Однако эти штаммы, являясь дикими фагпродуцирующими культурами Вас.th0Р1пфВПВ15, не выдерживают большИх 20 объемов производственных ферментеров и бракуются из-за ливиса при первых комиссионных проверках.

Известен штамм Вас.бинг офепМ айаг. ф Э" пв- продуцент энтобактерина 69/6, выделенный Исаковой И. в 1969 r, из погибших гусениц большой пчелиной огневки (2). Штамм 69/6 в 1973 г. бы.. несколько улучшен сотрудниками В(1ИИбакпрепарат. 30

В настоящее время штамм 69/6 является единственным продуцентом энтобактерина-3, но вскоре он будет снят с производства, так как часто лизируется от собственного гомологического фага Fg -1 и дает продукцию низкого качества., Цель изобретения — штамм Вас.Фиг(пфепыз чаг, аКв 1ае Н5ВТ-114, отвечающий всем необходимым требованиям крупнотоннажного стационарного и непрерывно-циклического способов производства энтобактерина т.е. спонтанно в условиях глубинного культивирования не продуцирует вирулентный фаг, обладает более мощной ферментативной системой, за счет чего лучше расшепляет и усваивает компоненты дрожжеполисахаридной питательной среды (ДПС) и позволяет получать продукцию более высокого качества.

Полученный штамм Вас. thvring ensis ии . фаИечав 85Вт-114 имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

Морфологические признаки.

На обычном агаре типа CIIA величина клеток в экопоненциальной фазе развития равна 3,0-4,0 мкм. Вегетативная форма клеток палочковидная. В услос.

691124

Физиологические признаки, Органическая среда для поддерживающей селекции и размножения маточных культур — сухой питательный агар (СПА). Колонии в R-форме,-плоские с ризоидными краями. Диаметр колоний

5-ти суточной культуры достигает 0,50,6 см. Пигмент не образует.

Питательный бульон. Осадок на

6-7 сутки.

Молоко лакмусовое. Пептонизация и подщелачивание сверху, затем подкисление и редукция молока. На 3-4 сутки коагуляция. Переваривание на 5-6 сутки сильное. Коагулированная сыворотка розовая. . Картофель-ломтиками.Культурасухая, светло-желтая.

Агар с желатиной. 3она гидролиза

5-6 мм.

Агар — казеин. Просветление полное З0

Дрожжеполисахаридная питательная среда (ДПС), используемая для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост наблюдается в 12 часу культивирования при 28-30 С. Спорообразование начинается к 28-30 часам роста и завершается к 36 часу. Титр жизнеспособных спор в 1 мл культуральной жидкости к концу культивирования на дрожжеполи- 4Q сахаридной питательной среде достигает 2,5-3 5 млрд.

Отношение к углеводам. Усваивает без выделения газа глюкозу, мальтозу, целлобиозу, глицерин, оксалаты.

Не усваивает арабинозу, маннозу, лактозу, дульцит, маннит, сорбит, ацетаты и цитраты. .Отношение к органическим кислотам.

Усваивает уксусную, молочную и лимонную кислоты. Не усваивает фумаровую, яблочную, янтарную и винную.

Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив к фагам типа Fd 2, Fd 3.

Антагонизм проявляет к штаммам

Вас.ihuegiensis, 1, 2 и 4-му серотипам.

Для получения штамма Вас.thumgiensis ча ", аИе чае Н5ВТ-114 использов à- 50 ли принцип рекомбинации генов, т,е. перераспределение детерминант генома клеток в ряду клеточных поколений родительской популяции. В качестве фактора, индуцирующего это перерасвиях глубинного культивирования на жидких питательных средах клетки подвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны, В стационарной фазе образуют овальные споры величиной 1,6-2,1 мкм и 5 энтомоцидные округлые кристаллы, диаметр которых находится в пределах 1,52,0 мкм. По Н-антигену штамм Н5ВТ-114 относится к 5-му серотипу.

10 пределение, использовали разницу температур, равную -10 и -90 С.

В качестве исходной культуры, из которой был получен штамм Н5ВТ-114, использовали штамм НД-73 продуцент Дипела, находящегося на хранении во ВНИИбакпрепарат.

Штамм Н5ВТ-114 отличается от родителя принадлежностью к серотипу и в связи с этим является продуцентом другого энтомопатогенного препарата. Кроме того, штамм Н5ВТ-114 в сравнении со штаммом-прототипом продуцирует на обедненной ДПС вдвое больше спорокристаллического комплекса, что позволяет значительно снизить расход сырья на производство энтобактерина, а в связи с этим и снизить его себестоимость. Штамм

Н5ВТ-114 является фагнепродуцирующей культурой, т.е. находится в критическом состоянии. По своей вирулентности штамм Н5ВТ-114 превосходит штамм-прототип более чем в 3-5 раз.

Формула изббретения штамм BaclKus ьвчпфепмь чанг. faKer ae

Н5ВТ-114 используемый для изготовле) ния энтомопатогенного бактериального препарата знтобактерина, применяемого против насекомых-вредителей сельскохозяйственных культур и леса, хранится в коллекции ВЛИИбакпрепарат.

Морфологйческие признаки.

Ла обычном arape типа СПА величина клеток в экспоненциальной фазе развития равна 3,0-4,0 мкм. BereTaTHBная форма клеток палочковидная. В условиях глубинного культивирования на жидкой питательной среде клетки подвижные, встерчаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны. В стационарной фазе образуют овальные споры величиной в 1,6-2,1 мкм и энтомоцидные округлые кристаллы, величина которых укладывается в пределы 1,5-2,0 мкм.

По Н-антигену штамм Н5ВТ-114 относится к 5-му серотипу.

Физиологические признаки.

Органическая среда для поддерживающей селекции и размножения маточных культур — сухой питательный агар типа СПА. Колонии в R-форме, плоские с ризоидными краями. Диаметр колоний

5-ти суточной культуры достигает

0,5-0,6 см. Пигмент не образует.

Питательный бульон. Осадок на

6-7 сутки.

Молоко лакмусовое. Пептонизация и подшелачивание сверху, затем подкисление и редукция молока. Коагуляция на 3-4 сутки. Переваривание на 5-6 сутки сильное. Коагулированная сыворотка розовая.

691124

Составитель М.Шишкина

Редактор И, Марголис . Техред M.Келемеш Корректор И. Михеева

Заказ 6083/1 Тираж 755 Подписнбе

ПНИИПИ Государственного. комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãoðoä, ул.Проектная,4

Картофель-ломтикамй. Культура сухая, светло-желтая.

Агар с желатиной. она гидролиза

5-6 мм.

Агар-казеин. Просветление полное °

Дрожжеполисахаридная питательная . среда (ДПС), используемая для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост .наблюдается к 12 часу культивирова— ния при 28-30 С. Спорообраэование начинается к 28-30 часам роста и за.....вершается к 36 часу. Титр жизнеспособных спор в 1 мл, культуральной жидкости к концу культивирования на дрожжеполисахаридной питательной среде достигает 2,5-3,5 млрд.

Отношение к углеводам. Усваивает без выделения газа глюкозу, мальтозу, целлобиозу, глицерин, оксалаты.

Не усваивает арабинозу, маннозу, лактозу, дульцит, маннит, сорбит, ацетаты и цитраты, Отношение к органическим кислотам.

Усваивает уксусную, молочную и лимонную кислоты. Ие усв аивает фумаровую, яблочную, янтарную и винную.

Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует.

Устойчив к фагам типа Fd-2, Fd-3 °

Антагонизм проявляет к штаммам

Вас. $hu ng ensue 1,2 и 4 серотипам.

Источнйки информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Швецова О.И., Зурабо а Э.P.

Биологические свойства кристаллообраэующих бацилл, выделенных из разных видов насекомых. — Микробиологическая промышленность, 1972, Р 7, с.25-27.

2. Фрейман В.Б., Щербаков Л.A. и др. Результаты селекции производственных штаммов Baci_#_uS Фигчпфепь э

20 ни . fnHer qe Труды ВНИИбакпрепарат, в. 2, в. 2, 1973, с. 74-78 (прототип) .