Способ глубинного культивирования

Способ глубинного культивирования

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву— (22) Заявлено 24.03.78 (21) 2593545/30-15 с присоединением заявки ачЪ— (23) Приоритет (51)M. Кл.

А 01 N 15/00

С 12 К 1/06 еввударствекньй кемнтет

СССР оо лелем кзебретение и еткрытяя

Опубликовано 15.11.79- Бюллетень ачт 42

Дата опубликования описания 20.11.79 (53у УДК

632.951 (088.8) (22) А вторн изобретен ня

А. И. Козлов, Г. С. Смолина, В. Б. Фрейман, А. А. Чупин и И. А. Софиенко

Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защити растений и бактернальных препаратов (21) Заявитель (54) СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВАС. THURINGIENSIS

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть, в частности, использовано для получения энтомопатогенных бактериальных препаратов в условиях крупно.тоннажного производства.

Известны способы глубинного культивирования энтомопатогенных бактериальных препаратов — дендробациллина — 3A (1) и энтобактерина (2).

Существо этих способов основано на глубинном культивировании штаммов-продуцентов, засеваемых в рабочие ферментеры, загруженные жидкой питательной "средотй" определенного состава.

Однако в крупнотоннажном производстве эти способы малоэффективны, так как требуют большого количества сырья на единицу готовой продукции. В качестве сырья используют глюкозу и кукурузный экстракт, которые являются дефицитными.

Наиболее близким к изобретению является способ глубииюго культивирования Вас. thuringiensis ферментацией на жилкой питательной среде с послелушими сепарированнем и сушкой полученного споро-.кристаллического комплекса (3). В качестве жидкой питательной среды используют дрожжеполисахаридную питательную среду Фабича, содержащую (%) 3 кормовых дрожжей (БВК), 1,5 кукурузной муки и 95,5 воды.

На 1 т такой среды расходуют 45 кг кормового сырья. Выход из 1 т культуральной жидкости после глубинного культивирования продуцента не более 5 — 10 кг споро-кристаллического комплекса.

Такой высокий расход сырья на единицу сухого концентрата приводит к весьма неэкономичному использованию дрожжей и кукурузной муки. Кроме того, в процессе приготовления жидкой дрожжеполисахаридной питательной среды вместе с сухими дрожжами и кукурузной мукой в питательную среду попадает большое количество термоустойчивых фагосодержащих спор Вас. thuringiensis, которые выдерживают режимы стерилизации и затем, когда осуществляется процесс глубинного культивирования продуцента, постоянно пбнаруживаются в виде размножающейся вегетативной фагопродуцирующей культуры.

69712?

Целью изобретения является сокращение расхода кормового сырья и ликвидация в питательной среде фагопродуцирующего материала.

Указанная цель достигается за счет гого, что в способе глубинного культивирования Вас.

thurihgIensis ферментацией на жидкой питательной среде с последующими сепарированием и сушкой полученного споро-кристаллического комплекса ферментацию проводят в два этапа: на 1 этапе ферментацию ведут в течение 10—

14 ч до стадии грануляции вегетативных клеток, которые затем убивают прогреванием культуральной жидкости при 90-100 С, на !! этапе прогретую культуральную жидкость разбавлякт 5 водой в 2 — 3 раза, стерилизуют, засевают свежим стерильным посевным материалом продуцента и проводят процесс до спорообразования н высьшания культуры Вас. йог!почепа!а. Причем прогрев культуральной жидкости после 2о

1 этапа осуществляют в течение 30 — 40 мин, а после г роведения II этапа в культуральную жидкость добавляют 0,5 вес.% каолина.

Пример. В рабочий ферментер, заполненный стерильной регламентной питательной средой, поме1цают обычным способом посевной материал продуцента энтомопатогенного бактериального препарата и ведут ферментацню на ! этапе при 30 C.â течение 14, 10 или 12 ч до стадии, грануляции вегетативных клеток; За этот промежуток времени глубинного культивирования культура продуцента дает максималь ное число генераций и успевает частично переработать и усвоить компоненты питания. Успевают также прорасти и размножиться фагопродуцнруюшие термоустойчивые споры, попав. шие в среду при ее приготовлении и выдержавшие режимы стерилизации. В этом состоянии культуральную жидкость в ферментере подогревают сухим паром, температура прогрева 100, 90 нли 95 С, время выдержки при такой температуре 40, 30 или 35 мин.

Ha ! этапе ферментации культуральную жидкость с убитыми клетками продуцента и убитыми клетками фагопродуцента разбавляют водопроводной водой в 3, 2 или 2,5 раза.

Перемешивают, вновь стерилизуют любым известным способом, заполняют ферментеры, засевают их новой порцией посевного материала и осуществляют процесс наработки биомассы.

Питанием для продуцента на II этапе служат остатки в культуральной жидкости дрожжей и кукурузной муки, а также биомасса убитых вегетатнвных клеток от 1 этапа. Неосредственно перед сепарацией в культуральную жидкость добавляют каолин из расчета 0,5% для лучшего отделения споро-кристаллического комплекса при сепарации.

В таблице приведены данные, покаэывающи. преимущество способа согласно изобретению в сравнении с известными.

697122 гч I а о

g М ее о о м

00 00 х )

kf х о

))3 д -е

М

Ia

С4 н х

Q Ф о а гч а ч

Р

Ы х о

К о

Й о о

Ф о

K а а

С 4 ГЧ

С4 CV а а

С4 С1

Г1 Г1

)Я

)х

4 2

)Q ц и

)х

Е ,0 4 aS н )0 х о Q v

Ж Е К

»ъ х

М

lO о

v о х

v о о

3 о

Р о

М (:) а х

0 е Я

S0 д

Q o» о о

Й о о

H.> .

61 О ю

Х К 0S

aS н) ох -х

М х

», н

Y о р х о

Е о

CIS

5ц р

М ( х

Х о

< х х

1 о и

D х

Г4!

f»

CQ х х

13 о

1. Способ глубинного культивирования Вас.

thur ingiensis ферментацией на жидкой питательной среде с последующими сепарированием и сушкой полученного споро-кристаллического комплекса, отличающийся тем, что, с целью сокращения расхода кормового сырья и ликвидации в питательной среде фагопродуцнрующего материала, ферментацию проводят в два этапа; на первом этапе ферментацию ведут в течение 10 — 14 ч до стадии грануляции

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР No 134524, кл. С 12 К 3/00, 1958.

2. Авторское свидетельство СССР Р 144579, кл. А 01 1ч IS!00, 1960, 3. Авторское свидетельство СССР N 362048, кл. С 12 К 1/06, 1970 (прототип).

Составитель Л. Добашина

Тех ряд Л.Алферова Корректор Н. Горват

Редактор Г. Хорина

Заказ 6820/4

Тираж 755 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открьпий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., g. 4/5

Филиал ППП "Патент . r . .Ужгород, ул.!1роектная. 4 л ° -,, 7 . .,,: ., 697122 8

Сравнительные данные таблицы показывают, вегетатнвных клеток, которые затем убивают 0 способ глубинного культивирования Вас. прогреванием культуральной жидкости при

thuringiensis согласно изобретению позволяет 90 — EOO С, на втором этапе прогретую культуполучать вдвое больше продукции на одну и ральную жидкость разбавляют водой в 2 — 3 раза, ту же веоэвую единицу кормового сырья, рас- 5 стерилнзуют, засевают свежым стерильным походуемого для приготовления питательной среды севным материалом продуцента и проводят для глубинного .культивирования продуцентов. процесс до спорообраэования и высыпания кульКроме того, в процессе культивирования значи- туры Вас. thuringiensis. тельно сокращается число ферментаций, в куль- 2. Способ по п.. 1, отличающийся туральной жидкости которых обнаруживается 1О тем, что прогрев культуральной жидкости после вирулентный фаг. первого этапа осуществляют в течение 30—

40 мин.

3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и ч а юФормула изобретения щ н и с я тем, что после проведения второго

15 этапа в культуральную жидкость добавляют

0,5 вес.% каолина.