Способ получения препарата клубеньковых бактерий

Способ получения препарата клубеньковых бактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

. сере,.,, патен; нете, н - е<»

Н1Я Н е.н"а

О П

Союз Советскнк

Соцналистнческик

Респубпии

697489

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 05.06.78 (21) 2624162/30-15 с присоединением заявки Ж(51) М. Кл.

С 05 F 11/08

Госудо рстееиио1й комитет

СССР оо делан изобретений и открмтнй (23) П риоритет

Опубликовано 15.11.79. Бюллетень,% 42Дата опубликования описания 15.11 79 (53) УДК,631.461. .52 (088.8) A. В. Хотянович, В. В. Ьочаров, А. Е. Фролов, H. А. Бексеева .

Н. Ю. Амстердамская и А. И. Позднякова (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА

КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ

Изобретение относится к обпасти сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано в производстве препаратов кпубеньковых бактерий, которые применяют в сельском хозяйстве при вырашивании бобовых растений.

Известны различные способы получения пре. паратов кпубеньковых бактерий путем перемешивания инокупята азотфиксируюших микроорганизмов с различными субстратами (1).

Известен также способ получения бактери апьного удобрения смешиванием торфа. с инокупюмом механическим путем ипи путем периодического напыления инокупюма йа торфяную крошку при температуре слоя последней не вью ше 35 С до достижения равномерной влажности препарата 35 — 40k (2).

Как известно, сухой торф с влажностью

15 — 20% отличается значительной гидрофобностью.

Кроме того, в торфе содержится до 10% воска и смол (битум), существенным образом снижающих смачиваемость торфа водой ипи различными водными растворами. Высушивание торфа при 150-180 С приводит к попимеризации битумов, усугпубпяющей эффект несмачиваемости

Поэтому во всех спучаях смецтивание происходит в течение длительного времени (10 — 25 мин), следствием чего является низкая выживаемость

5 кпубеньковых бактерий.

Цель изобретения — повысить выживаемость бактерий в процессе механического перемешивания инокупюма с сухим торфом.

Эта цель достигается тем. что механическое

10 перемешивание сухого торфа с инокупюмом проводят в присутствии неиногенного поверхностно- активного вещества (ПАВ1. имеющего высокую смачиваюшую активность 00 отношению к сухому торфу, нетоксичного дпя кпубеньковых бактерий и не снижающего азотфиксирующую

15 активность растений в симбиозе с кпубеньковыми бактериями.

Используются ПАВ обгцей формулы

RO(C H40)„H, где R — CllH»C H, 20

С,,Н25С6Н5 ипи С1ОН2, — С,ОН4, и и= 3 — 12.

Обработка сухого торфа такими HAB unu внесение их в жидкий инокупюм значительно сокращает время, необходимое дпя равном< рного распределения бактериальных кпе1ок в мас6с)748(1 сс торфа при перемешивании. Сокращение времени перемецшвания существенно снижает цроценг гибели вносимых в торф бактериальпых клеток. Благодаря этому становится возможным уменыпить количество инокулюма при сохранении требуемого для препарата исходного титра (0,8 — 1,5 млрд/г) .

Выживаемость клубеньковых бактерий, % от исходного титра

Способ получения препарата

Концентрация ПАВ в препарате, вес.% после хранения. в течение 6 мес после механическо перемешивания в течение времени, о мин

Перемешивание составляющих препарата без ПАВ (известный) 0

601

Перемешивание составляющих препарата в присутствии оксиэтилированного спирта: фракции C i 0-С 0

71

82

0,1

0,5 нонилфенола

0,1

0,5

73 — — — — — — — — — — — — — — Д

Пример 3. Смесь торфа с ПАВ (без Таким образом, новый способ получения инокулюма), приготовленную аналогично приме- препарата клубеньковых бактерий по сравнению рам 1 или 2, расфасовывают в непроницаемую 5О . с известным обеспечивает сокращение времени для микроорганизмов упаковку, например поли- перемешивания торфа с инокулюмом с 15 — 25 этиленовые пакеты, стерилизуют одним из из- до 3 мин при обеспечении paâíîìåðíîñòè смевестных способов и инокулируют в асептических. шивания; повышение выживаемости клубеньусловиях инъекцией жидкой культуры клубень- ковых бактерий в процессе приготовления пре55 ковых бактерий непосредственно в пакет. При парата с.25 до 78-82%. этом жидкий инокулюм равномерно распределя- Результаты испытаний выживаемости клубеньется в массе торфа беэ дополнительного переме- ковых бактерий в препаратах, изготовленных разными способами, при условии достижения

Пример 1. Подготавливают 170 кг нейтрализованного и высушенного торфа с тониной помола 0,1 мм и влажностью 18 — 20%.

Затем к нему одновременно прибавляют 130 л инокулюма (с титром 14,2 млрд/мл) и 0,1% (к весу торфа) оксиэтилированного спирта фракции С1Π— С о со средней степенью оксиэтилирования 3 моля окиси этилена на 1 моль спирта и перемешивают компоненты до равномерного распределения жидкости в препарате. Время перемешивания 3 мин. Равномерность распределения инокулюма в торфе определяют двумя способами: определением влажности отдельных проб весом l r и определением числа бактерий в отдельных пробах весом 1 г. Готовый препаp3f расфасовыванп и хранят в зечение 6 мес. при низких положительных температурах.

По предлагаемому способу выживаемость бактерий после пермешивания составляет 82% (1l,6 млрд/г), а в контрольном варианте (без

ПАВ) для получения равномерного распределения инокулюма требуется время перемешивания не менее 20 мин и в этом случае выживаемость бактерий составляет не более 25% (3,5 млрд/г), При тех же исходных условиях и введении

0,5% аналогичного ПАВ выживаемость бактерий после 3 мин перемешивания составляет 78% (11,1 млрд/г) от исзодного титра.

Пример 2. Поступают как в примере 1, но в качестве ПАВ берут оксиэтилированный нонилфенол со средней степенью оксиэтилирования 7 молей окиси этилена на 1 моль нонилфенола в количестве 0,1%. В этом случае выживаемость бактерий после перемешивания составляет 75% (10,6 млрд/г), а при ко щентрации ПАВ

0,5% — 73% (10,3 млрд/г) от исходного титра.

Результаты примеров 1 и 2 приведены в таблице.

697489

Составитель М. Мирзаев

ТехредЛ. Алферова.

Корректор M. Пожо, Редактор Е. Хорина

Тираж 483 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 6870/18

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 равномерного распределения инокулюма на субстрате- носителе х

Препарат обладает низким качеством иэ-за неравномерного перемешивания инокулюма с торфом. хх

Выживаемость бактерий при приготовлении препарата по существующей технологии.

Формула изобретения 10

1. Способ получения препарата клубеньковых бактерий на гидрофобных твердых субстратах, преимущественно торфе, включающий ннокулирование субстрата-носителя жидкой культурой клубеньковых бактерий с последующим перемешиванием, отличающийся, 6 тем, что, с целью снижения травмируемости и гибели клеток бактерий, процесс перемешивання проводят в присутствии неионогенных поверхностно-активных веществ общей формулы

RO (С H40)Ä 11, где R — С8H»C6Н,— — С i z Н 5 Сь Н или С i о Н з 1 — С g p Нф > и

n - =3 — 12.

2,Способ поп. 1,отличающийся тем, что поверхностно-активные вещества используют в концентрации 0,1 — 0,5% от веса воздушно-сухого торфа.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Доросинский Л. М. Клубеньковые бактерии и нитрагии. Л., "Колос", 1970.

2. Авторское свидетельство СССР hP 477150, кл. С 05 F 11/08; 1975 (прототип),